Name: standardized identification of compound structure in tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis
Uploaded: 2023-03-17T14:10:00
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Questo lavoro è stato finanziato dallo Xinglin Talent Program della Chengdu University of TCM (n. 030058191), dalla Nature Science Foundation del Sichuan (2022NSFSC1470) e dalla National Natural Science Foundation of China (82204765).

1. Preparazione del campione
<ol><li>Pesare accuratamente 1 g del campione AMS e metterlo in un matraccio conico con 30 mL di metanolo all'80%. Trasferire la miscela in un sonicatore a bagno ad ultrasuoni per 30 minuti di estrazione a 25 °C. Centrifugare il campione a 14.000 x g per 5 minuti. NOTA: La frequenza del sonicatore del bagno ad ultrasuoni è 40 KHz.</li>
	<li>Preparare una siringa per iniezione e un filtro a membrana microporosa (0,22 μm, solo organico). Filtrare il surnatante...

<ol>
	<li>Chen, X. -. F., Wu, H. -. T., Tan, G. -. G., Zhu, Z. -. Y., Chai, Y. -. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography+coupled+with+time-of-flight+and+ion+trap+mass+spectrometry+for+qualitative+analysis+of+herbal+medicines.">Liquid chromatography coupled with time-of-flight and ion trap mass spectrometry for qualitative analysis of herbal medicines.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 1 (4), 235-245 (2011).</li><li>Ou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematically+investigating+the+pharmacological+mechanism+of+Dazhu+Hongjingtian+in+the+prevention+and+treatment+of+acute+mountain+sickness+by+integrating+UPLC/Q-TOF-MS/MS+analysis+and+network+pharmacology.">Systematically investigating the pharmacological mechanism of Dazhu Hongjingtian in the prevention and treatment of acute mountain sickness by integrating UPLC/Q-TOF-MS/MS analysis and network pharmacology.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 179, 113028 (2020).</li><li>Kind, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+small+molecules+using+accurate+mass+MS/MS+search.">Identification of small molecules using accurate mass MS/MS search.</a> Mass Spectrometry Reviews. 37 (4), 513-532 (2018).</li><li>Phetsanthad, A., Vu, N. Q., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-faceted+mass+spectrometric+investigation+of+neuropeptides+in+Callinectes+sapidus.">Multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in Callinectes sapidus.</a> Journal of Visualized Experiments. (183), e63322 (2022).</li><li>Seetaloo, N., Phillips, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Millisecond+hydrogen/deuterium-exchange+mass+spectrometry+for+the+study+of+alpha-synuclein+structural+dynamics+under+physiological+conditions.">Millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions.</a> Journal of Visualized Experiments. (184), e64050 (2022).</li><li>Karas, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+uptake+of+platinum-and+ruthenium-based+compound+exposure+in+zebrafish+by+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry+with+broader+applications.">Dose uptake of platinum-and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications.</a> Journal of Visualized Experiments. (182), e6358 (2022).</li><li>Chang, H. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uracil-DNA+glycosylase+assay+by+matrix-assisted+laser+desorption/ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+analysis.">Uracil-DNA glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (182), e63089 (2022).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+characterization+and+identification+of+major+constituents+in+Jitai+tablets+by+high-performance+liquid+chromatography/diode-array+detection+coupled+with+electrospray+ionization+tandem+mass+spectrometry.">Structural characterization and identification of major constituents in Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry.</a> Molecules. 17 (9), 10470-10493 (2012).</li><li>Pang, B., Zhu, Y., Lu, L., Gu, F., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+applications+and+features+of+liquid+chromatography-mass+spectrometry+in+the+analysis+of+traditional+Chinese+medicine.">The applications and features of liquid chromatography-mass spectrometry in the analysis of traditional Chinese medicine.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016, 3837270 (2016).</li><li>Ichou, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+activation+time+effects+and+the+internal+energy+distributions+for+the+CID,+PQD+and+HCD+excitation+modes.">Comparison of the activation time effects and the internal energy distributions for the CID, PQD and HCD excitation modes.</a> Journal of Mass Spectrometry. 49 (6), 498-508 (2014).</li><li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+oligomer+formation+in+glucose+dehydration+by+CO2+and+tetrahydrofuran.">Suppression of oligomer formation in glucose dehydration by CO2 and tetrahydrofuran.</a> Green Chemistry. 19 (14), 3334-3343 (2017).</li><li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvent+effects+on+degradative+condensation+side+reactions+of+fructose+in+its+initial+conversion+to+5-Hydroxymethylfurfural.">Solvent effects on degradative condensation side reactions of fructose in its initial conversion to 5-Hydroxymethylfurfural.</a> ChemSusChem. 13 (3), 501-512 (2020).</li><li>Yang, S., Wang, Z., Zhao, H., Ren, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+research+of+Tibetan+medicine.">Modern research of Tibetan medicine.</a> World Journal of Traditional Chinese Medicine. 5 (2), 131-138 (2019).</li><li>Shang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethno-veterinary+survey+of+medicinal+plants+in+Ruoergai+region,+Sichuan+province,+China.">Ethno-veterinary survey of medicinal plants in Ruoergai region, Sichuan province, China.</a> Journal of Ethnopharmacology. 142 (2), 390-400 (2012).</li><li>Su, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chalcone+derivatives+from+Abelmoschus+manihot+seeds+restrain+NLRP3+inflammasome+assembly+by+inhibiting+ASC+oligomerization.">Chalcone derivatives from Abelmoschus manihot seeds restrain NLRP3 inflammasome assembly by inhibiting ASC oligomerization.</a> Frontiers in Pharmacology. 13, 932198 (2022).</li><li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+out+the+reaction+network+of+humin+formation+at+the+initial+stage+of+fructose+dehydration+in+water.">Mapping out the reaction network of humin formation at the initial stage of fructose dehydration in water.</a> Green Energy &amp; Environment. , (2022).</li><li>Hua, Y., Jenke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+sensitivity+of+an+LC-MS+method+for+screening+material+extracts+for+organic+extractables+via+mobile+phase+optimization.">Increasing the sensitivity of an LC-MS method for screening material extracts for organic extractables via mobile phase optimization.</a> Journal of Chromatographic Science. 50 (3), 213-227 (2012).</li><li>Kumar, S., Singh, A., Bajpai, V., Kumar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+characterization+and+distribution+of+monoterpene+indole+alkaloids+in+Rauwolfia+species+by+Orbitrap+Velos+Pro+mass+spectrometer.">Identification characterization and distribution of monoterpene indole alkaloids in Rauwolfia species by Orbitrap Velos Pro mass spectrometer.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 118, 183-194 (2016).</li><li>Bayat, P., Lesage, D., Cole, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tutorial:+Ion+activation+in+tandem+mass+spectrometry+using+ultra-high+resolution+instrumentation.">Tutorial: Ion activation in tandem mass spectrometry using ultra-high resolution instrumentation.</a> Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 680-702 (2020).</li><li>Wu, S. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+determination+of+disulfide+linkages+in+recombinant+therapeutic+proteins+using+online+LC&#8722;MS+with+electron-transfer+dissociation.">Mass spectrometric determination of disulfide linkages in recombinant therapeutic proteins using online LC&#8722;MS with electron-transfer dissociation.</a> Analytical Chemistry. 81 (1), 112-122 (2009).</li><li>Echterbille, J., Quinton, L., Gilles, N., De Pauw, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+mobility+mass+spectrometry+as+a+potential+tool+to+assign+disulfide+bonds+arrangements+in+peptides+with+multiple+disulfide+bridges.">Ion mobility mass spectrometry as a potential tool to assign disulfide bonds arrangements in peptides with multiple disulfide bridges.</a> Analytical Chemistry. 85 (9), 4405-4413 (2013).</li></ol>

IT-MS e la sua tecnologia MSn offrono un nuovo approccio per identificare la struttura dei composti TCM in tracce. A differenza di Q-TOF-MS, che non è stato in grado di identificare in profondità gli ioni frammento, IT-MS con tecnologia MSn eccelle grazie alla sua capacità di isolare e accumulare ioni. Questo articolo delinea un metodo per identificare i composti in tracce nella medicina tibetana utilizzando la tecnica IT-MS e MSn . Il metodo utilizza il valore n in MSn per ...

L'analisi qualitativa dei componenti in tracce nella medicina tradizionale cinese (MTC) è diventata un argomento cruciale nella ricerca. A causa dell'elevato numero di composti nella MTC, è difficile isolarli per l'analisi dello spettrometro di risonanza magnetica nucleare (NMR) o del diffrattometro a raggi X (XRD), rendendo sempre più popolari i metodi basati sulla spettrometria di massa (MS) che richiedono solo bassi volumi di campione. Inoltre, la cromatografia liquida (LC) accoppiata con la SM è stata ampiamente utilizzata nella ricerca TCM negli ultimi anni per la migliore separazione di campioni complessi e l'analisi qualitativa dei composti chimici1. Un metodo comune è la cromatografia liquida-elettrospray ionizzazione time-of-flight mass spectrometry (LC-ESI-TOF-MS), che è ampiamente utilizzata nella ricerca qualitativa sulla medicina tibetana2. Con questo metodo, i componenti complessi vengono arricchiti e separati in una colonna LC e il rapporto massa-carica (m/z) degli ioni addotti viene osservato utilizzando un rivelatore MS. La ricerca di database MS TANDEM (MS/MS o MS2) è attualmente l'approccio più veloce per annotazioni composte sicure nell'analisi di piccole molecole utilizzando il tempo di volo quadrupolo (Q-TOF) MS e Orbitrap MS3. Tuttavia, la scarsa qualità dei database e la presenza di vari isomeri ostacolano l'identificazione di composti sconosciuti. Inoltre, le informazioni fornite dalla banca dati MS/MS sono limitate 4,5,6,7. È importante studiare i composti chimici in ogni MTC utilizzando un protocollo generale che può essere ampiamente applicato ad altri TCM.
IT-MS cattura un'ampia gamma di ioni applicando diverse tensioni a radiofrequenza (RF) agli elettrodi ad anello8. IT-MS può eseguire scansioni MS a più stadi di serie temporali in diversi ordini cronologici, fornendo la frammentazione MS a più stadi (MS n) degli ingredienti, doven è il numero di stadi ionici del prodotto9. L'IT-MS lineare è considerato il migliore per l'identificazione della struttura in quanto può essere utilizzato per esperimenti sequenziali MSn 10. Gli ioni bersaglio possono essere isolati e accumulati in IT-MS 1 lineare. MS n (n ≥ 3) in IT-MS fornisce più informazioni sui frammenti rispetto a MS/MS in Q-TOF-MS. Poiché IT-MS non può bloccare lo ione bersaglio e i suoi ioni frammento, è un potente strumento per la spiegazione della struttura di composti sconosciuti, inclusi gli isomeri1. La tecnologia MSn è stata ampiamente applicata all'analisi strutturale di proteine, peptidi e polisaccaridi sconosciuti11,12. Il livello di abbondanza di ioni frammento in MSn fornisce maggiori informazioni sui frammenti molecolari su composti mirati in campioni complessi rispetto a MS/MS in Q-TOF-MS. Pertanto, l'applicazione della tecnologia MSn all'identificazione strutturale in MTC è essenziale.
La medicina tibetana è una componente significativa della MTC13 e questi farmaci derivano principalmente da animali, piante e minerali trovati nell'area dell'altopiano14. La medicina tibetana Abelmoschus manihot seeds (AMS) è il seme di Abelmoschus manihot (linn.) medicus. AMS è una medicina tradizionale a base di erbe usata per trattare condizioni come la dermatite atopica, reumatismi e lebbra. Contiene calcone, che possiede effetti antibatterici, antimicotici, antitumorali, antiossidanti e antinfiammatori15. Nel presente studio, le procedure MS n sono state migliorate ed è stato sviluppato un metodo dettagliato per identificare le strutture composte nella medicina tibetana AMS utilizzando IT-MS e MSn. Alcuni parametri MS, tra cui la modalità ionica, l'intervallo di scansione e la modalità di collisione, sono stati ottimizzati per superare i problemi nell'identificazione dei composti in tracce. Questo studio mira a promuovere l'identificazione standardizzata della struttura dei composti in tracce nella MTC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CAS 75-05-8</td>
			<td>LC-MS grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic Acid</td>
			<td>Knowles</td>
			<td>CAS 64-18-6</td>
			<td>HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear ion trap mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LTQ XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>liquid chromatograph</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>U3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ Tune</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>version 2.8.0</td>
			<td>MS control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CAS 67-56-1</td>
			<td>LC-MS grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure water</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CAS 7732-18-5</td>
			<td>LC-MS grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>version 2.0</td>
			<td>LC-IT-MS operational software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standardized identification of compound structure in tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis

Le medicine tibetane sono complesse e contengono numerosi composti sconosciuti, rendendo cruciale la ricerca approfondita sulle loro strutture molecolari. La cromatografia liquida-elettrospray ionizzazione time-of-flight mass spectrometry (LC-ESI-TOF-MS) è comunemente usata per estrarre la medicina tibetana; Tuttavia, molti composti sconosciuti imprevedibili rimangono dopo l'utilizzo del database dello spettro. Il presente articolo ha sviluppato un metodo universale per identificare i componenti della medicina tibetana utilizzando la spettrometria di massa con trappola ionica (IT-MS). Il metodo include protocolli standardizzati e programmati per la preparazione del campione, l'impostazione MS, la preesecuzione LC, la definizione del metodo, l'acquisizione MS, il funzionamento MS a più stadi e l'analisi manuale dei dati. Due composti rappresentativi nella medicina tibetana Abelmoschus manihot semi sono stati identificati utilizzando la frammentazione a più stadi, con un'analisi dettagliata delle strutture composte tipiche. Inoltre, l'articolo discute aspetti quali la selezione della modalità ionica, la regolazione della fase mobile, l'ottimizzazione del raggio di scansione, il controllo dell'energia di collisione, il passaggio alla modalità di collisione, i fattori di frammentazione e le limitazioni del metodo. Il metodo di analisi standardizzato sviluppato è universale e può essere applicato a composti sconosciuti nella medicina tibetana.

Il cellobiosio è stato utilizzato come modello per verificare la fattibilità di MSn in modalità ionica positiva. Come mostrato nella Figura 2A, l'ESI-MS (modalità ionica positiva) del cellobiosio [C 12 H22O11]+ ha prodotto la molecola protonata [M+H]+ a m/z 365. La scansione ionica del prodotto (CID-MS/MS) di [M+H]+ a m/z 365 ha portato al secondo ione frammento a m/z 305 (Figura 2B), che è stato ulteriormente ...

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Standardized Identification of Compound Structure in Tibetan Medicine Using Ion Trap Mass Spectrometry and Multiple-Stage Fragmentation Analysis

Qui, descriviamo un protocollo generale e un disegno che potrebbe essere applicato per identificare tracce e costituenti minori nelle complesse formulazioni di prodotti naturali (matrici) nella medicina tibetana.

Identificazione standardizzata della struttura del composto nella medicina tibetana mediante spettrometria di massa con trappola ionica e analisi di frammentazione a più stadi

Tibetan medicines are complex and contain numerous unknown compounds, making in-depth research on their molecular structures crucial. Liquid ...

Questo metodo può aiutare i ricercatori ad analizzare le strutture dei composti della medicina tibetana, in particolare i componenti dell'albero. Può fornire informazioni sullo studio qualitativo del contenuto del composto nella medicina naturale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'accuratezza della struttura composta ottenuta in questo caso è superiore a quella del database.Questa tecnica può essere utilizzata nell'analisi della struttura degli intermedi metabolici nella vescica o nelle urine. Per iniziare, la preparazione del campione di semi della medicina tibetana Abelmoschus manihot. Pesare accuratamente un grammo di AMS e metterlo in un matraccio conico contenente 30 millilitri di metanolo all'80%.Utilizzando un sonicatore a bagno ad ultrasuoni a 40 kilohertz, eseguire l'estrazione sulla miscela per 30 minuti a 25 gradi Celsius. Quindi, centrifugare il campione a 14.000 g per cinque minuti. Preparare una siringa per iniezione e un filtro organico a membrana microporosa da 0,22 micron e filtrare il surnatante in un flacone campione da due millilitri.Dopo aver acceso l'interruttore della pompa per vuoto, aprire la valvola principale del cilindro di argon insieme alla valvola a pressione parziale e regolare la pressione a circa 0,3 megapascal. Quindi, aprire la valvola dell'azoto. Avviare il software di controllo della spettrometria di massa, o MS.Fare clic su Heated ESI Source nel pannello del software e impostare i parametri MS, tra cui temperatura del riscaldatore, portate del gas, tensione di spruzzatura per le modalità positiva e negativa e temperatura capillare. Fare clic sul pulsante Applica per attivare la sorgente di ioni per cromatografia liquida o LC.Preparare le fasi mobili A e B utilizzando acido formico allo 0,1% in una soluzione acquosa in acetonitrile puro rispettivamente. Degasarli in un sonicatore a bagno ad ultrasuoni a 40 kilohertz per almeno 15 minuti prima di collegare le soluzioni rispettivamente ai passaggi del fluido A e B.Preparare una soluzione di acqua di metanolo 1:9 volume per volume, quindi riempirla manualmente nelle bottiglie di liquido di pulizia della pompa e dell'iniettore. Dopo aver avviato il software di controllo LC-MS, fare clic su Controllo diretto per aprire il pannello di controllo LC. Aprire la valvola di spurgo in senso antiorario sul modulo pompa.Fare clic su Altra opzione per aprire l'impostazione della pompa e impostare i parametri di spurgo a cinque millilitri al minuto per tre minuti. Fare clic su Svuota per avviare la rimozione della bolla. Una volta fatto, chiudere la valvola di spurgo.Quindi, fare clic su Prime Syringe per sciacquare la siringa per tre cicli, Wash Buffer Loop per risciacquare il ciclo per un ciclo e Wash Needle Externally per lavare l'ago per un ciclo. Posizionare il flacone del campione nel campionatore. Fare clic su Instrument Setup (Configurazione strumento) per aprire la finestra Method Editing (Impostazione metodo) per aprire la finestra di modifica del metodo e fare clic su Nuovo per creare un nuovo metodo dello strumento LC-MS.Stabilire un runtime totale per il metodo e impostare il limite di pressione. Portata totale, gradiente di flusso, temperatura del campione, temperatura della colonna e delta della temperatura pronta nella finestra di modifica del metodo. Per il metodo MS, selezionare il tipo di esperimento MS o MSn generale.Immettete i valori del tempo di acquisizione, della polarità, dell'intervallo di massa, del numero del valore di deviazione e della durata. Fare clic su Salva per configurare le impostazioni come metodo dello strumento. Fare clic su Sequence Setup (Impostazione sequenza) per aprire la tabella delle sequenze, in cui immettere le informazioni sul tipo di campione, il file, il nome, il percorso, l'ID del campione, il metodo dello strumento, la posizione e il volume di iniezione.Registrare la tabella delle sequenze facendo clic su Salva, quindi implementare le impostazioni e avviare l'acquisizione MS. Per caricare i dati MS nel software di elaborazione dati, fare doppio clic sul file raw in Explorer. Nel cromatogramma di picco di base BPI, selezionare l'area massima sotto la curva o l'AUC facendo clic e trascinando il mouse.Lo spettro MS corrispondente verrà visualizzato nella stessa finestra. Selezionare uno ione di destinazione per la successiva analisi MS/MS. Riaprire la finestra di modifica dei metodi e nella tabella delle impostazioni MSN impostare m/z dello ione di destinazione su una cifra decimale nella colonna Massa padre.Quindi, selezionare la modalità di collisione e immettere l'energia di collisione o il valore CE. Impostare l'intervallo di scansione MS/MS. Fare clic su Salva per registrare il metodo MS e inserire un nuovo nome file nella tabella delle sequenze.Fare clic sul pulsante Start per avviare l'acquisizione MS/MS. Una volta completata l'acquisizione, fare doppio clic sul file raw in Explorer per caricare il file raw MS/MS nel software di elaborazione dati. Identificare lo ione frammento più forte nello spettro e inserire il suo valore m/z nell'elenco dei metodi MSn.Nella tabella delle impostazioni MSn, impostare i parametri MS3, inclusi la modalità di collisione, il valore CE e l'intervallo di scansione. Ancora una volta, fare clic su Salva per registrare il metodo MS e immettere un nuovo nome di file nella tabella di sequenza. Fare clic su Avvia per avviare l'acquisizione MS3.Come illustrato in precedenza, fare doppio clic sul file raw in Esplora risorse per caricare il file raw MS3 nel software di elaborazione dati e ripetere i passaggi per ottenere lo spettro MS4. Per analizzare i dati, fare doppio clic sui file raw per aprire tutti gli spettri di massa da MS a MSn. Calcolare manualmente i valori di differenza m/z tra lo ione e gli ioni frammento corrispondenti.Quindi, disegnare manualmente la struttura del nucleo in base ai risultati MS4 e derivare la struttura originale utilizzando gruppi funzionali o segmenti molecolari basati sul valore di differenza m / z. Disegnare manualmente i percorsi di scissione molecolare in base a ciascuna struttura molecolare in MSn. L'ESI-MS del cellobiosio modello di carboidrati ha prodotto la molecola proteinata M H a m/z 365 in modalità positiva.La scansione ionica del prodotto, o CID MS/MS ha provocato un secondo frammento di ione a m/z 305. Inoltre, l'analisi MS3 e MS4 ha portato sequenzialmente al terzo e quarto frammento di ioni rispettivamente a m/z 254 e m/z 185. L'analisi MS / MS ha rivelato la sequenza di frammentazioni ioniche, vale a dire idrolisi ad apertura dell'anello, scissione CC e disidratazione.Quindi, questo metodo è stato trovato adatto per i carboidrati. L'analisi qualitativa preliminare dell'AMS utilizzando LC Q-TOF MS ha rivelato la presenza di numerosi composti sconosciuti. L'analisi MSn negativa dello ione M H a m/z 617 ha prodotto un secondo frammento di ione a m/z 571.L'analisi MS3 di questo ione frammento ha prodotto un terzo ione frammento a m/z 525 dalla perdita di idrossietile come metanolo corrispondente a 32 dalton e idrossile come acqua, che è 18 dalton. L'analisi MS4 ha prodotto quarti ioni frammento a m/z 344 e 273. L'identificazione manuale della struttura centrale ha rivelato la struttura molecolare del composto in m/z 617 e i suoi percorsi di scissione in MSn.È stata eseguita la scansione ionica del prodotto dello ione M H di un altro composto sconosciuto e sono stati rivelati anche la sua struttura molecolare e il meccanismo di scissione. Dopo aver acceso la pompa per vuoto, attendere almeno cinque ore per garantire un grado di vuoto sufficiente per le condizioni sperimentali. L'analisi statistica può essere utilizzata per raccogliere i frammenti con lo stesso o simile rapporto massa-carica.Con l'aumento della soluzione di spettrometria di massa, questa tecnica potrebbe aiutare i ricercatori a ottenere nuovi composti nelle medicine naturali.

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Fire-derived, pyrogenic carbon (PyC), sometimes called black carbon (BC), is the carbonaceous solid residue of biomass and fossil fuel combustion, such as ...

Rapid High-throughput Species Identification of Botanical Material Using Direct Analysis in Real Time High Resolution Mass Spectrometry

Rapid high-throughput Specie Identificazione del materiale botanico Utilizzando l&#39;analisi diretta in tempo reale ad alta risoluzione Spettrometria di Massa

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Analisi dell'espirato in tempo reale tramite ionizzazione secondaria Nanoelectrospray accoppiata alla spettrometria di massa ad alta risoluzione

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Sintesi e analisi di spettrometria di massa di Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Imaging Corrosion at the Metal-Paint Interface Using Time-of-Flight Secondary Ion Mass Spectrometry

Corrosione dell'imaging nell'interfaccia Metal-Paint con spettrometria di massa ionica secondaria a tempo di volo

Corrosion developed at the paint and aluminum (Al) metal-paint interface of an aluminum alloy is analyzed using time-of-flight secondary ion mass ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides

Tecniche di spettrometria ione Mobilità-Massa per determinare la struttura e i meccanismi del riconoscimento degli ioni metallici e dell'attività di redox degli oligopeptidi di metal linciazione