Name: standardized identification of compound structure in tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis
Uploaded: 2023-03-17T14:10:00
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Este trabajo fue financiado por el Programa de Talento Xinglin de la Universidad de Chengdu de TCM (No. 030058191), la Fundación de Ciencias de la Naturaleza de Sichuan (2022NSFSC1470) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82204765).

1. Preparación de la muestra
<ol><li>Pesar con precisión 1 g de la muestra de AMS y colocarla en un matraz cónico con 30 ml de metanol al 80%. Transfiera la mezcla a un sonicador de baño de ultrasonido durante 30 minutos de extracción a 25 °C. Centrifugar la muestra a 14.000 x g durante 5 min. NOTA: La frecuencia del sonicador de baño de ultrasonido es de 40 KHz.</li>
	<li>Prepare una jeringa para inyección y un filtro de membrana microporosa (0,22 μm, solo orgánico). Filtrar el ...

<ol>
	<li>Chen, X. -. F., Wu, H. -. T., Tan, G. -. G., Zhu, Z. -. Y., Chai, Y. -. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography+coupled+with+time-of-flight+and+ion+trap+mass+spectrometry+for+qualitative+analysis+of+herbal+medicines.">Liquid chromatography coupled with time-of-flight and ion trap mass spectrometry for qualitative analysis of herbal medicines.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 1 (4), 235-245 (2011).</li><li>Ou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematically+investigating+the+pharmacological+mechanism+of+Dazhu+Hongjingtian+in+the+prevention+and+treatment+of+acute+mountain+sickness+by+integrating+UPLC/Q-TOF-MS/MS+analysis+and+network+pharmacology.">Systematically investigating the pharmacological mechanism of Dazhu Hongjingtian in the prevention and treatment of acute mountain sickness by integrating UPLC/Q-TOF-MS/MS analysis and network pharmacology.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 179, 113028 (2020).</li><li>Kind, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+small+molecules+using+accurate+mass+MS/MS+search.">Identification of small molecules using accurate mass MS/MS search.</a> Mass Spectrometry Reviews. 37 (4), 513-532 (2018).</li><li>Phetsanthad, A., Vu, N. Q., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-faceted+mass+spectrometric+investigation+of+neuropeptides+in+Callinectes+sapidus.">Multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in Callinectes sapidus.</a> Journal of Visualized Experiments. (183), e63322 (2022).</li><li>Seetaloo, N., Phillips, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Millisecond+hydrogen/deuterium-exchange+mass+spectrometry+for+the+study+of+alpha-synuclein+structural+dynamics+under+physiological+conditions.">Millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions.</a> Journal of Visualized Experiments. (184), e64050 (2022).</li><li>Karas, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+uptake+of+platinum-and+ruthenium-based+compound+exposure+in+zebrafish+by+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry+with+broader+applications.">Dose uptake of platinum-and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications.</a> Journal of Visualized Experiments. (182), e6358 (2022).</li><li>Chang, H. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uracil-DNA+glycosylase+assay+by+matrix-assisted+laser+desorption/ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+analysis.">Uracil-DNA glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (182), e63089 (2022).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+characterization+and+identification+of+major+constituents+in+Jitai+tablets+by+high-performance+liquid+chromatography/diode-array+detection+coupled+with+electrospray+ionization+tandem+mass+spectrometry.">Structural characterization and identification of major constituents in Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry.</a> Molecules. 17 (9), 10470-10493 (2012).</li><li>Pang, B., Zhu, Y., Lu, L., Gu, F., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+applications+and+features+of+liquid+chromatography-mass+spectrometry+in+the+analysis+of+traditional+Chinese+medicine.">The applications and features of liquid chromatography-mass spectrometry in the analysis of traditional Chinese medicine.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016, 3837270 (2016).</li><li>Ichou, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+activation+time+effects+and+the+internal+energy+distributions+for+the+CID,+PQD+and+HCD+excitation+modes.">Comparison of the activation time effects and the internal energy distributions for the CID, PQD and HCD excitation modes.</a> Journal of Mass Spectrometry. 49 (6), 498-508 (2014).</li><li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+oligomer+formation+in+glucose+dehydration+by+CO2+and+tetrahydrofuran.">Suppression of oligomer formation in glucose dehydration by CO2 and tetrahydrofuran.</a> Green Chemistry. 19 (14), 3334-3343 (2017).</li><li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvent+effects+on+degradative+condensation+side+reactions+of+fructose+in+its+initial+conversion+to+5-Hydroxymethylfurfural.">Solvent effects on degradative condensation side reactions of fructose in its initial conversion to 5-Hydroxymethylfurfural.</a> ChemSusChem. 13 (3), 501-512 (2020).</li><li>Yang, S., Wang, Z., Zhao, H., Ren, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+research+of+Tibetan+medicine.">Modern research of Tibetan medicine.</a> World Journal of Traditional Chinese Medicine. 5 (2), 131-138 (2019).</li><li>Shang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethno-veterinary+survey+of+medicinal+plants+in+Ruoergai+region,+Sichuan+province,+China.">Ethno-veterinary survey of medicinal plants in Ruoergai region, Sichuan province, China.</a> Journal of Ethnopharmacology. 142 (2), 390-400 (2012).</li><li>Su, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chalcone+derivatives+from+Abelmoschus+manihot+seeds+restrain+NLRP3+inflammasome+assembly+by+inhibiting+ASC+oligomerization.">Chalcone derivatives from Abelmoschus manihot seeds restrain NLRP3 inflammasome assembly by inhibiting ASC oligomerization.</a> Frontiers in Pharmacology. 13, 932198 (2022).</li><li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+out+the+reaction+network+of+humin+formation+at+the+initial+stage+of+fructose+dehydration+in+water.">Mapping out the reaction network of humin formation at the initial stage of fructose dehydration in water.</a> Green Energy &amp; Environment. , (2022).</li><li>Hua, Y., Jenke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+sensitivity+of+an+LC-MS+method+for+screening+material+extracts+for+organic+extractables+via+mobile+phase+optimization.">Increasing the sensitivity of an LC-MS method for screening material extracts for organic extractables via mobile phase optimization.</a> Journal of Chromatographic Science. 50 (3), 213-227 (2012).</li><li>Kumar, S., Singh, A., Bajpai, V., Kumar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+characterization+and+distribution+of+monoterpene+indole+alkaloids+in+Rauwolfia+species+by+Orbitrap+Velos+Pro+mass+spectrometer.">Identification characterization and distribution of monoterpene indole alkaloids in Rauwolfia species by Orbitrap Velos Pro mass spectrometer.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 118, 183-194 (2016).</li><li>Bayat, P., Lesage, D., Cole, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tutorial:+Ion+activation+in+tandem+mass+spectrometry+using+ultra-high+resolution+instrumentation.">Tutorial: Ion activation in tandem mass spectrometry using ultra-high resolution instrumentation.</a> Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 680-702 (2020).</li><li>Wu, S. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+determination+of+disulfide+linkages+in+recombinant+therapeutic+proteins+using+online+LC&#8722;MS+with+electron-transfer+dissociation.">Mass spectrometric determination of disulfide linkages in recombinant therapeutic proteins using online LC&#8722;MS with electron-transfer dissociation.</a> Analytical Chemistry. 81 (1), 112-122 (2009).</li><li>Echterbille, J., Quinton, L., Gilles, N., De Pauw, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+mobility+mass+spectrometry+as+a+potential+tool+to+assign+disulfide+bonds+arrangements+in+peptides+with+multiple+disulfide+bridges.">Ion mobility mass spectrometry as a potential tool to assign disulfide bonds arrangements in peptides with multiple disulfide bridges.</a> Analytical Chemistry. 85 (9), 4405-4413 (2013).</li></ol>

IT-MS y su tecnología MSn ofrecen un nuevo enfoque para identificar la estructura de los compuestos TCM traza. A diferencia de Q-TOF-MS, que no pudo identificar profundamente los iones del fragmento, IT-MS con tecnología MSn sobresale debido a su capacidad para aislar y acumular iones. Este artículo describe un método para identificar compuestos traza en la medicina tibetana utilizando la técnica IT-MS y MSn . El método utiliza el valor n en MSn para determinar la cantida...

El análisis cualitativo de los componentes traza en la medicina tradicional china (MTC) se ha convertido en un tema crucial en la investigación. Debido al alto número de compuestos en TCM, es difícil aislarlos para el análisis del espectrómetro de resonancia magnética nuclear (RMN) o del difractómetro de rayos X (XRD), lo que hace que los métodos basados en espectrometría de masas (MS) que solo requieren volúmenes de muestra bajos sean cada vez más populares. Además, la cromatografía líquida (LC) junto con MS ha sido ampliamente utilizada en la investigación de MTC en los últimos años para mejorar la separación de muestras complejas y el análisis cualitativo de compuestos químicos1. Un método común es la cromatografía líquida-espectrometría de masas de tiempo de vuelo por ionización por electrospray (LC-ESI-TOF-MS), que es ampliamente utilizada en la investigación cualitativa sobre la medicina tibetana2. Con este método, los componentes complejos se enriquecen y separan en una columna LC, y la relación masa-carga (m / z) de los iones de aducción se observa utilizando un detector MS. La búsqueda en bases de datos MS EN TÁNDEM (MS/MS o MS2) es actualmente el enfoque más rápido para anotaciones compuestas confiables en el análisis de moléculas pequeñas utilizando tiempo de vuelo cuadrupolo (Q-TOF) MS y Orbitrap MS3. Sin embargo, la mala calidad de las bases de datos y la presencia de varios isómeros dificultan la identificación de compuestos desconocidos. Además, la información proporcionada por la base de datos MS/MS es limitada 4,5,6,7. Es importante investigar los compuestos químicos en cada MTC utilizando un protocolo general que pueda aplicarse ampliamente a otra MTC.
IT-MS captura una amplia gama de iones aplicando diferentes voltajes de radiofrecuencia (RF) a los electrodos de anillo8. IT-MS puede realizar exploraciones de MS de múltiples etapas de series temporales en diversos órdenes cronológicos, proporcionando fragmentación de MS de múltiples etapas (MS n) de ingredientes, donden es el número de etapas de iones del producto9. La IT-MS lineal se considera la mejor para la identificación de estructuras, ya que se puede utilizar para experimentos secuenciales deMS n 10. Los iones objetivo pueden aislarse y acumularse en el lineal IT-MS1. El MS n (n ≥ 3) en IT-MS proporciona más información de fragmentos que MS/MS en Q-TOF-MS. Dado que IT-MS no puede bloquear el ion objetivo y sus iones de fragmento, es una herramienta poderosa para la elucidación de la estructura de compuestos desconocidos, incluidos los isómeros1. La tecnología MSn ha sido ampliamente aplicada al análisis estructural de proteínas, péptidos y polisacáridos desconocidos11,12. El nivel de abundancia de iones fragmentados en MSn proporciona más información de fragmentos moleculares sobre compuestos específicos en muestras complejas que MS / MS en Q-TOF-MS. Por lo tanto, la aplicación de la tecnología MSn a la identificación estructural en TCM es esencial.
La medicina tibetana es un componente importante de la MTC13, y estos medicamentos se derivan principalmente de animales, plantas y minerales que se encuentran en el área de la meseta14. La medicina tibetana Abelmoschus manihot seeds (AMS) es la semilla de Abelmoschus manihot (linn.) medicus. AMS es una medicina herbal tradicional utilizada para tratar afecciones como la dermatitis atópica, el reumatismo y la lepra. Contiene chalcona, que posee efectos antibacterianos, antifúngicos, anticancerígenos, antioxidantes y antiinflamatorios15. En el presente estudio, se mejoraron los procedimientos deMS n y se desarrolló un método detallado para identificar estructuras compuestas en la medicina tibetana AMS utilizando IT-MS y MSn. Ciertos parámetros de MS, incluido el modo de iones, el rango de escaneo y el modo de colisión, se optimizaron para superar los problemas en la identificación de compuestos traza. Este estudio tiene como objetivo promover la identificación estandarizada de la estructura de compuestos traza en la MTC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CAS 75-05-8</td>
			<td>LC-MS grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic Acid</td>
			<td>Knowles</td>
			<td>CAS 64-18-6</td>
			<td>HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear ion trap mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LTQ XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>liquid chromatograph</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>U3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ Tune</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>version 2.8.0</td>
			<td>MS control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CAS 67-56-1</td>
			<td>LC-MS grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure water</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CAS 7732-18-5</td>
			<td>LC-MS grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>version 2.0</td>
			<td>LC-IT-MS operational software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standardized identification of compound structure in tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis

Los medicamentos tibetanos son complejos y contienen numerosos compuestos desconocidos, lo que hace que la investigación en profundidad sobre sus estructuras moleculares sea crucial. La cromatografía líquida-espectrometría de masas de tiempo de vuelo por ionización por electrospray (LC-ESI-TOF-MS) se usa comúnmente para extraer medicina tibetana; Sin embargo, muchos compuestos desconocidos impredecibles permanecen después de usar la base de datos Spectrum. El presente artículo desarrolló un método universal para identificar componentes en la medicina tibetana utilizando espectrometría de masas de trampa iónica (IT-MS). El método incluye protocolos estandarizados y programados para la preparación de muestras, configuración de MS, preejecución de LC, establecimiento de métodos, adquisición de MS, operación de MS de múltiples etapas y análisis manual de datos. Se identificaron dos compuestos representativos en la medicina tibetana Abelmoschus manihot utilizando fragmentación en múltiples etapas, con un análisis detallado de las estructuras compuestas típicas. Además, el artículo discute aspectos como la selección del modo iónico, el ajuste de fase móvil, la optimización del rango de escaneo, el control de energía de colisión, el cambio de modo de colisión, los factores de fragmentación y las limitaciones del método. El método de análisis estandarizado desarrollado es universal y se puede aplicar a compuestos desconocidos en la medicina tibetana.

La celobiosa se utilizó como modelo para verificar la viabilidad de MSn en modo de iones positivos. Como se muestra en la Figura 2A, el ESI-MS (modo de iones positivos) de la celobiosa [C 12 H22O11]+ produjo la molécula protonada [M+H]+ a m/z 365. El escaneo iónico producto (CID-MS/MS) de [M+H]+ a m/z 365 dio como resultado el segundo fragmento de ion a m/z 305 (Figura 2B), que se analizó más a fondo utilizando...

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Standardized Identification of Compound Structure in Tibetan Medicine Using Ion Trap Mass Spectrometry and Multiple-Stage Fragmentation Analysis

Aquí, describimos un protocolo general y un diseño que podría aplicarse para identificar trazas y componentes menores en las complejas formulaciones de productos naturales (matrices) en la medicina tibetana.

Identificación estandarizada de la estructura compuesta en la medicina tibetana utilizando espectrometría de masas de trampa iónica y análisis de fragmentación de múltiples etapas

Tibetan medicines are complex and contain numerous unknown compounds, making in-depth research on their molecular structures crucial. Liquid ...

Este método puede ayudar a los investigadores a analizar las estructuras de los compuestos de la medicina tibetana, especialmente los componentes del árbol. Puede proporcionar información sobre el estudio cualitativo del contenido de compuestos en medicina natural. La principal ventaja de esta técnica es que la precisión de la estructura compuesta obtenida en este caso es mayor que la de la base de datos.Esta técnica se puede utilizar en el análisis de la estructura de los intermediarios metabólicos en la vejiga o la orina. Para comenzar, la medicina tibetana Abelmoschus manihot's semillas muestra la preparación. Pesar con precisión un gramo de AMS y colocarlo en un matraz cónico que contenga 30 mililitros de 80% de metanol.Usando un sonicador de baño de ultrasonido a 40 kilohercios, realice la extracción de la mezcla durante 30 minutos a 25 grados centígrados. Luego, centrifugar la muestra a 14, 000 g durante cinco minutos. Prepare una jeringa de inyección y un filtro de membrana microporosa orgánico de 0,22 micras, y filtre el sobrenadante en una botella de muestra de dos mililitros.Después de encender el interruptor de la bomba de vacío, abra la válvula principal del cilindro de argón junto con la válvula de presión parcial y ajuste la presión a aproximadamente 0,3 megapascales. Luego, abra la válvula de nitrógeno. Inicie el software de control de espectrometría de masas, o MS.Haga clic en Fuente ESI calentada en el panel de software y configure los parámetros MS, incluida la temperatura del calentador, los caudales de gas, el voltaje de pulverización para los modos positivo y negativo y la temperatura capilar. Haga clic en el botón Aplicar para activar la fuente de iones para cromatografía líquida o LC.Prepare las fases móviles A y B utilizando ácido fórmico al 0,1% en una solución acuosa en acetonitrilo puro, respectivamente. Desgasificarlos en un sonicador de baño de ultrasonido a 40 kilohercios durante al menos 15 minutos antes de conectar las soluciones a los pasajes de fluido A y B, respectivamente.Prepare una solución de agua de metanol 1:9 volumen por volumen, luego llénela manualmente en las botellas de líquido de limpieza de la bomba y el inyector. Después de iniciar el software de control LC-MS, haga clic en Control directo para abrir el panel de control LC. Abra la válvula de purga en sentido contrario a las agujas del reloj en el módulo de la bomba.Haga clic en Más opción para abrir la configuración de la bomba y establecer los parámetros de purga en cinco mililitros por minuto durante tres minutos. Haga clic en Purgar para iniciar la eliminación de burbujas. Una vez hecho esto, cierre la válvula de purga.Luego, haga clic en Prime Syringe para enjuagar la jeringa durante tres ciclos, Wash Buffer Loop para enjuagar el bucle durante un ciclo y Wash Needle Externally para lavar la aguja durante un ciclo. Coloque el frasco de muestra en el muestrador. Haga clic en Configuración del instrumento para abrir la ventana de edición de métodos y haga clic en Nuevo para crear un nuevo método de instrumento LC-MS.Establezca un tiempo de ejecución total para el método y establezca el límite de presión. Caudal total, gradiente de flujo, temperatura de muestra, temperatura de columna y delta de temperatura de preparación en la ventana Edición de métodos. Para el método MS, seleccione el tipo de experimento General MS o MSn.Introduzca los valores del tiempo de adquisición, la polaridad, el rango de masa, el número de valor de desvío y la duración. Haga clic en Guardar para configurar los ajustes como un método de instrumento. Haga clic en Configuración de secuencia para abrir la tabla de secuencias, en la que ingrese la información sobre el tipo de muestra, archivo, nombre, ruta, ID de muestra, método del instrumento, posición y volumen de inyección.Grabe la tabla de secuencias haciendo clic en Guardar, luego implemente la configuración e inicie la adquisición de MS. Para cargar los datos de MS en el software de procesamiento de datos, haga doble clic en el archivo sin procesar en Explorer. En el cromatograma de pico base BPI, seleccione el área máxima debajo de la curva o AUC haciendo clic y arrastrando el ratón.El espectro MS correspondiente se mostrará en la misma ventana. Seleccione un ion objetivo para el siguiente análisis MS/MS. Vuelva a abrir la ventana Edición de métodos y, en la tabla de configuración de MSn, establezca el m/z del ion de destino en un decimal en la columna Misa principal.A continuación, seleccione el modo de colisión e introduzca la energía de colisión o el valor CE. Establezca el rango de escaneo MS/MS. Haga clic en Guardar para grabar el método MS e ingrese un nuevo nombre de archivo en la tabla de secuencia.Haga clic en el botón Inicio para iniciar la adquisición de MS / MS. Una vez completada la adquisición, haga doble clic en el archivo RAW en Explorer para cargar el archivo RAW MS/MS en el software de procesamiento de datos. Identifique el ion fragmento más fuerte del espectro e introduzca su valor m/z en la lista de métodos MSn.En la tabla de configuración de MSn, defina los parámetros MS3, incluido el modo de colisión, el valor CE y el rango de escaneo. Nuevamente, haga clic en Guardar para grabar el método MS e ingrese un nuevo nombre de archivo en la tabla de secuencia. Haga clic en Iniciar para iniciar la adquisición de MS3.Como se demostró anteriormente, haga doble clic en el archivo sin formato en el Explorador para cargar el archivo sin formato MS3 en el software de procesamiento de datos y repita los pasos para obtener el espectro MS4. Para analizar los datos, haga doble clic en los archivos sin procesar para abrir todos los espectros de masas de MS a MSn. Calcule manualmente los valores de diferencia m/z entre el ion y los iones de fragmento correspondientes.Luego, dibuje manualmente la estructura del núcleo de acuerdo con los resultados de MS4 y derive la estructura original utilizando grupos funcionales o segmentos moleculares basados en el valor de diferencia m / z. Dibuje manualmente las trayectorias de escisión molecular de acuerdo con cada estructura molecular en MSn. El ESI-MS de la celobiosa de carbohidratos modelo produjo la molécula proteinada M H a m/z 365 en modo positivo.El escaneo iónico del producto, o CID MS/MS dio como resultado un segundo fragmento de ion en m/z 305. Además, el análisis MS3 y MS4 resultó secuencialmente en el tercer y cuarto fragmento de iones en m/z 254 y m/z 185, respectivamente. El análisis MS / MS reveló la secuencia de fragmentaciones de iones, a saber, hidrólisis de apertura de anillo, escisión de CC y deshidratación.Por lo tanto, este método se encontró adecuado para los carbohidratos. El análisis cualitativo preliminar de AMS utilizando LC Q-TOF MS reveló la presencia de numerosos compuestos desconocidos. El análisis negativo de MSn del ion M H en m/z 617 produjo un segundo fragmento de ion en m/z 571.El análisis MS3 de este fragmento de ion produjo un tercer fragmento de ion a m/z 525 por la pérdida de hidroxietilo como metanol correspondiente a 32 dalton e hidroxilo como agua, que es 18 dalton. El análisis MS4 produjo iones de cuarto fragmento en m/z 344 y 273. La identificación manual de la estructura del núcleo reveló la estructura molecular del compuesto en m/z 617 y sus trayectorias de escisión en MSn.Se realizó el escaneo iónico producto del ion M H de otro compuesto desconocido, y también se reveló su estructura molecular y mecanismo de escisión. Después de encender la bomba de vacío, espere al menos cinco horas para garantizar un grado de vacío suficiente para las condiciones experimentales. El análisis estadístico se puede utilizar para cotejar los fragmentos que tienen la misma o similar relación masa-carga.Con el aumento de la solución de espectrometría de masas, esta técnica podría ayudar a los investigadores a obtener compuestos más nuevos en medicinas naturales.

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