Name: dual-dye optical mapping of hearts from ryr2r2474s knock-in mice of catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia
Uploaded: 2023-12-22T12:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dual-Dye Optical Mapping of Hearts from RyR2R2474S Knock-In Mice of Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81700308'dan XO'ya ve 31871181'dan ML'ye ve 82270334'dan XT'ye), Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Destek Programı (CN) (2021YJ0206'dan XO'ya, 23ZYZYTS0433 ve 2022YFS0607'den XT'ye ve 2022NSFSC1602'den TC'ye) ve Tıbbi Kaynakların Kimyası ve Moleküler Mühendisliği için Devlet Anahtar Laboratuvarı (Guangxi Normal Üniversitesi) (CMEMR2017-B08'den XO'ya), MRC (ML02647, G1002082, ML için G10031871181), BHF (PG/14/80/31106, PG/16/67/32340, PG/12/21/29473, PG/11/59/29004 ML), BHF CRE at Oxford (ML) hibeleri.

Deneyler için 10-14 haftalık erkek vahşi tip fareler veya 20-25 g ağırlığındaki RyR2-R2474S/+ fareler (C57BL/6 arka plan) kullanılmıştır. Tüm prosedürler, Southwest Medical University, Sichuan, Çin'in hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (onay NO:20160930) tarafından, kurumun faaliyet gösterdiği ulusal yönergelere uygun olarak onaylanmıştır.
1. Hazırlık
<ol><li>Stok çözümleri<ol><li>Blebbistatin stok çözeltisi: 10 mM'lik bir konsantra...

<ol>
	<li>Priori, S. G., Chen, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inherited+dysfunction+of+sarcoplasmic+reticulum+Ca2++handling+and+arrhythmogenesis.">Inherited dysfunction of sarcoplasmic reticulum Ca2+ handling and arrhythmogenesis.</a> Circulation Research. 108 (7), 871-883 (2011).</li><li>Goddard, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+consequences+of+the+P2328S+mutation+in+the+ryanodine+receptor+(RyR2)+gene+in+genetically+modified+murine+hearts.">Physiological consequences of the P2328S mutation in the ryanodine receptor (RyR2) gene in genetically modified murine hearts.</a> Acta Physiologica. 194 (2), 123-140 (2008).</li><li>Sabir, I. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternans+in+genetically+modified+langendorff-perfused+murine+hearts+modeling+catecholaminergic+polymorphic+ventricular+tachycardia.">Alternans in genetically modified langendorff-perfused murine hearts modeling catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia.</a> Frontiers in Physiology. 1, 126 (2010).</li><li>Zhang, Y., Matthews, G. D., Lei, M., Huang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+Ca2++homeostasis,+atrial+arrhythmogenesis,+and+sinus+node+dysfunction+in+murine+hearts+modeling+RyR2+modification.">Abnormal Ca2+ homeostasis, atrial arrhythmogenesis, and sinus node dysfunction in murine hearts modeling RyR2 modification.</a> Frontiers in Physiology. 4, 150 (2013).</li><li>Leenhardt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catecholaminergic+polymorphic+ventricular+tachycardia+in+children.+A+7-year+follow-up+of+21+patients.">Catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia in children. A 7-year follow-up of 21 patients.</a> Circulation. 91 (5), 1512-1519 (1995).</li><li>Priori, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+cardiac+ryanodine+receptor+gene+(hRyR2)+underlie+catecholaminergic+polymorphic+ventricular+tachycardia.">Mutations in the cardiac ryanodine receptor gene (hRyR2) underlie catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia.</a> Circulation. 103 (2), 196-200 (2001).</li><li>Wehrens, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FKBP12.6+deficiency+and+defective+calcium+release+channel+(ryanodine+receptor)+function+linked+to+exercise-induced+sudden+cardiac+death.">FKBP12.6 deficiency and defective calcium release channel (ryanodine receptor) function linked to exercise-induced sudden cardiac death.</a> Cell. 113 (7), 829-840 (2003).</li><li>Novak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+abnormalities+in+iPSC-derived+cardiomyocytes+generated+from+CPVT1+and+CPVT2+patients+carrying+ryanodine+or+calsequestrin+mutations.">Functional abnormalities in iPSC-derived cardiomyocytes generated from CPVT1 and CPVT2 patients carrying ryanodine or calsequestrin mutations.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 19 (8), 2006-2018 (2015).</li><li>Napolitano, C., Mazzanti, A., Bloise, R., Priori, S. G., Adam, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CACNA1C-related+disorders.">CACNA1C-related disorders.</a> GeneReviews. , (1993).</li><li>Makita, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+calmodulin+mutations+associated+with+congenital+arrhythmia+susceptibility.">Novel calmodulin mutations associated with congenital arrhythmia susceptibility.</a> Circulation. Cardiovascular Genetics. 7 (4), 466-474 (2014).</li><li>Gomez-Hurtado, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+CPVT-associated+calmodulin+mutation+in+CALM3+(CALM3-A103V)+activates+arrhythmogenic+Ca+waves+and+sparks.">Novel CPVT-associated calmodulin mutation in CALM3 (CALM3-A103V) activates arrhythmogenic Ca waves and sparks.</a> Circulation, Arrhythmia and Electrophysiology. 9 (8), (2016).</li><li>Wleklinski, M. J., Kannankeril, P. J., Knollmann, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+tissue+mechanisms+of+catecholaminergic+polymorphic+ventricular+tachycardia.">Molecular and tissue mechanisms of catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia.</a> Journal of Physiology. 598 (14), 2817-2834 (2020).</li><li>Neco, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paradoxical+effect+of+increased+diastolic+Ca2++release+and+decreased+sinoatrial+node+activity+in+a+mouse+model+of+catecholaminergic+polymorphic+ventricular+tachycardia.">Paradoxical effect of increased diastolic Ca2+ release and decreased sinoatrial node activity in a mouse model of catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia.</a> Circulation. 126 (4), 392-401 (2012).</li><li>Bogdanov, K. Y., Vinogradova, T. M., Lakatta, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sinoatrial+nodal+cell+ryanodine+receptor+and+Na(+)-Ca(2+)+exchanger:+molecular+partners+in+pacemaker+regulation.">Sinoatrial nodal cell ryanodine receptor and Na(+)-Ca(2+) exchanger: molecular partners in pacemaker regulation.</a> Circulation Research. 88 (12), 1254-1258 (2001).</li><li>O'Shea, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ElectroMap:+High-throughput+open-source+software+for+analysis+and+mapping+of+cardiac+electrophysiology.">ElectroMap: High-throughput open-source software for analysis and mapping of cardiac electrophysiology.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1389 (2019).</li><li>O'Shea, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+optical+mapping+data+using+ElectroMap.">High-throughput analysis of optical mapping data using ElectroMap.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59663 (2019).</li><li>Choi, B. R., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+maps+of+optical+action+potentials+and+calcium+transients+in+guinea-pig+hearts:+mechanisms+underlying+concordant+alternans.">Simultaneous maps of optical action potentials and calcium transients in guinea-pig hearts: mechanisms underlying concordant alternans.</a> Journal of Physiology. 529, 171-188 (2000).</li><li>Rybashlykov, D., Brennan, J., Lin, Z., Efimov, I. R., Syunyaev, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open-source+low-cost+cardiac+optical+mapping+system.">Open-source low-cost cardiac optical mapping system.</a> PLoS One. 17 (3), 0259174 (2022).</li><li>Lucas-Lopez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absolute+stereochemical+assignment+and+fluorescence+tuning+of+the+small+molecule+tool,+(-)-blebbistatin.">Absolute stereochemical assignment and fluorescence tuning of the small molecule tool, (-)-blebbistatin.</a> European Journal of Organic Chemistry. 2005 (9), 1736-1740 (2005).</li><li>Ponsaerts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myosin+II+ATPase+inhibitor+blebbistatin+prevents+thrombin-induced+inhibition+of+intercellular+calcium+wave+propagation+in+corneal+endothelial+cells.">The myosin II ATPase inhibitor blebbistatin prevents thrombin-induced inhibition of intercellular calcium wave propagation in corneal endothelial cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49 (11), 4816-4827 (2008).</li><li>Jou, C., Spitzer, K., Tristani-Firouzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blebbistatin+effectively+uncouples+the+excitation-contraction+process+in+zebrafish+embryonic+heart.">Blebbistatin effectively uncouples the excitation-contraction process in zebrafish embryonic heart.</a> Cellular Physiology &amp; Biochemistry. 25 (4-5), 419-424 (2010).</li><li>Brack, K. E., Narang, R., Winter, J., Ng, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanical+uncoupler+blebbistatin+is+associated+with+significant+electrophysiological+effects+in+the+isolated+rabbit+heart.">The mechanical uncoupler blebbistatin is associated with significant electrophysiological effects in the isolated rabbit heart.</a> Experimental Physiology. 98 (5), 1009-1027 (2013).</li><li>O'Shea, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+analysis+of+optical+mapping+data+using+ElectroMap.">High-throughput analysis of optical mapping data using ElectroMap.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59663 (2019).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dataset+of+dual+calcium+and+voltage+optical+mapping+in+healthy+and+hypertrophied+murine+hearts.">A dataset of dual calcium and voltage optical mapping in healthy and hypertrophied murine hearts.</a> Scientific Data. 8 (1), 314 (2021).</li><li>Lei, M., Huang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+arrhythmogenesis:+a+tale+of+two+clocks.">Cardiac arrhythmogenesis: a tale of two clocks.</a> Cardiovascular Research. 116 (14), e205-e209 (2020).</li><li>Mal Baudot, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concomitant+genetic+ablation+of+L-type+Cav1.3+&#945;1D+and+T-type+Cav3.1+&#945;1G+Ca2++channels+disrupts+heart+automaticity.">Concomitant genetic ablation of L-type Cav1.3 &#945;1D and T-type Cav3.1 &#945;1G Ca2+ channels disrupts heart automaticity.</a> Scientific Reports. 10 (1), 18906 (2020).</li><li>Dai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ZO-1+regulates+intercalated+disc+composition+and+atrioventricular+node+conduction.">ZO-1 regulates intercalated disc composition and atrioventricular node conduction.</a> Circulation Research. 127 (2), e28-e43 (2020).</li><li>Glukhov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calsequestrin+2+deletion+causes+sinoatrial+node+dysfunction+and+atrial+arrhythmias+associated+with+altered+sarcoplasmic+reticulum+calcium+cycling+and+degenerative+fibrosis+within+the+mouse+atrial+pacemaker+complex1.">Calsequestrin 2 deletion causes sinoatrial node dysfunction and atrial arrhythmias associated with altered sarcoplasmic reticulum calcium cycling and degenerative fibrosis within the mouse atrial pacemaker complex1.</a> European Heart Journal. 36 (11), 686-697 (2015).</li><li>Torrente, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+pacemaker+activity+of+the+sinoatrial+node+in+sodium-calcium+exchanger+knockout+mice.">Burst pacemaker activity of the sinoatrial node in sodium-calcium exchanger knockout mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (31), 9769-9774 (2015).</li><li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+SK2+upregulation+following+angiotensin+II+challenge:+Modulation+by+p21-activated+kinase-1.">Ventricular SK2 upregulation following angiotensin II challenge: Modulation by p21-activated kinase-1.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 164, 110-125 (2022).</li><li>Dong, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+dual+calcium-voltage+optical+mapping+in+murine+sinoatrial+preparation+with+optogenetic+pacing.">A protocol for dual calcium-voltage optical mapping in murine sinoatrial preparation with optogenetic pacing.</a> Frontiers in Physiology. 10, 954 (2019).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+transverse+cardiac+slicing+and+optical+mapping+in+murine+heart.">A protocol for transverse cardiac slicing and optical mapping in murine heart.</a> Frontiers in Physiology. 10, 755 (2019).</li><li>Hoeker, G. S., Katra, R. P., Wilson, L. D., Plummer, B. N., Laurita, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+calcium+release+in+tissue+from+the+failing+canine+heart.">Spontaneous calcium release in tissue from the failing canine heart.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 297 (4), H1235-H1242 (2009).</li><li>Laurita, K. R., Singal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+action+potentials+and+calcium+transients+simultaneously+from+the+intact+heart.">Mapping action potentials and calcium transients simultaneously from the intact heart.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 280 (5), H2053-H2060 (2001).</li><li>Johnson, P. L., Smith, W., Baynham, T. C., Knisley, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Errors+caused+by+combination+of+Di-4+ANEPPS+and+Fluo3/4+for+simultaneous+measurements+of+transmembrane+potentials+and+intracellular+calcium.">Errors caused by combination of Di-4 ANEPPS and Fluo3/4 for simultaneous measurements of transmembrane potentials and intracellular calcium.</a> Annals of Biomedical Engineering. 27 (4), 563-571 (1999).</li></ol>

Deneyimlerimize dayanarak, bir fare kalbinin başarılı bir çift boyutlu optik haritalamasının anahtarları, iyi hazırlanmış bir çözüm ve kalp, boya yüklemesi, en iyi sinyal-gürültü oranının elde edilmesi ve hareket artefaktının azaltılmasını içerir.
Çözeltinin hazırlanması Başarılı bir kalp deneyi için Krebs çözümü şarttır. MgCl 2 ve CaCl2 stok çözeltileri (1 mol/L) su emilimleri göz önünde bulundurularak önce...

Kalıtsal kardiyak bozukluk katekolaminerjik polimorfik ventriküler taşikardi (CPVT), fiziksel aktivite, stres veya katekolamin zorluğunu takiben polimorfik ventriküler taşikardi (PVT) atakları olarak kendini gösterirve potansiyel olarak ölümcül ventriküler fibrilasyona dönüşebilir 1,2,3,4 . 1995 yılında klinik bir sendrom olarak ilk raporunu takip eden son kanıtlar, tümü bu durumda sarkoplazmik retiküler (SR) deposu Ca 2+ salınımında yer alan yedi gende mutasyonları içermiştir: en sık bildirilen RYR2 kodlayan ryR2 kodlayan Ca2+ salım kanalları5,6, FKBP12.67, kardiyak kalsekestrin8, TRDN'yi kodlayan CASQ2 kavşaksal SR proteini triadin 9 ve CALM1 9, CALM2 10 ve CALM3'ü aynı şekilde kodlayan kalmodulin11,12'yi kodlar. Bu genotipik paternler, aritmik olayları SR deposu Ca2 + 12'nin düzensiz patolojik salınımına bağlar.
SR'den spontan Ca 2+ salınımı, Na + / Ca2 + değiştiriciyi (NCX) aktive eden Ca 2+ kıvılcımları veya Ca2+ dalgaları olarak tespit edilebilir. Üç Na + için birCa2+ değiştirici, diyastolik depolarizasyonu hızlandıran ve membran voltajını aksiyon potansiyeli eşiğine (AP) yönlendiren bir içe doğru akım üretir. RyR2 knock-in farelerde, RyR2R4496C'nin sinoatriyal düğümdeki (SAN) artan aktivitesi, diyastol sırasında I Ca, L ve SR Ca2+ tükenmesinin Ca2 + 'ya bağlı azalmasıyla SAN otomatikliğinde beklenmedik bir azalmaya yol açar ve CPVT hastalarında SAN disfonksiyonuna katkıda bulunan hücre altı patofizyolojik değişiklikleri tanımlar13,14. İlgili kardiyomiyosit sitozolik Ca2+ dalgalarının ortaya çıkması, izoproterenol (ISO) dahil olmak üzere katekolamin ile RyR duyarlılığını takiben arka plan sitozolik [Ca2+] artışları takiben daha olasıdır.
Sağlam kardiyak CPVT modellerinde gözlenen ventriküler aritmilerin nedeni olabilecek aksiyon potansiyeli (AP) aktivasyonuna yanıt olarak RyR2 aracılı Ca2+ salınımını takiben Ca2+ sinyalindeki ayrıntılı kinetik değişiklikler, bildirilen RyR2 genotiplerinin tamamı için belirlenmeye devam etmektedir12. Bu makale, izoproterenol mücadelesinden önce ve sonra programlanmış elektrik pacing ile birlikte, murin vahşi tip (WT) ve heterozigot RyR2-R2474S/+ kalplerinde Ca2+ sinyallerinin ve transmembran potansiyellerinin (V m) yüksek verimli haritalanması için enstrümantasyon kurulumunu ve deneysel prosedürü sunmaktadır. Bu protokol, izole fare kalplerinde CPVT hastalığının mekanik çalışması için bir yöntem sağlar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#956;m syringe filter</td>
			<td>Medical equipment factory of Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd. China</td>
			<td>CFT011150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Pasteur pipette</td>
			<td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd. China</td>
			<td>00900026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>B. Braun Medical Inc.</td>
			<td>YZB/GER-5474-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#956;L PCR tube</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd. Shanghai. China</td>
			<td>F611541-0010</td>
			<td>Aliquote the stock solutions&#160; to avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd. China</td>
			<td>CFT011500</td>
			<td>Store Tyrode&#39;s solution at 4 &#176;C for follow-up heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>585/40 nm filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Filter for calcium signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>630 nm long-pass filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>G15604AJ</td>
			<td>Filter for voltage signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avertin (2,2,2-tribromoethanol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Poole, Dorset, United Kingdom</td>
			<td>T48402-100G</td>
			<td>To minimize suffering and pain reflex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Tocris Bioscience, Minneapolis, MN, United States</td>
			<td>SLBV5564</td>
			<td>Excitation-contraction uncoupler to&#160; eliminate motion artifact during mapping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>SLBK1794V</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom-made thermostatic bath</td>
			<td>MappingLab, United Kingdom</td>
			<td>TBC-2.1</td>
			<td>To keep temperature of perfusion solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>(RNBT7442)</td>
			<td>Solvent for dyes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps</td>
			<td>Medical equipment factory of Shanghai Medical Instruments Co.,Ltd.,Shanghai, China</td>
			<td>YAF030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ElectroMap software</td>
			<td>University of Birmingham</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Quantification of electrical parameters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td>Evolve 512 Delta, Photometrics, Tucson, AZ, United States</td>
			<td>A18G150001</td>
			<td>Acquire images for optical signals</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ET525/36 sputter coated filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>319106</td>
			<td>Excitation filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>SLBT4811V</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium</td>
			<td>Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>(H51021209)</td>
			<td>To prevent blood clots in the coronary artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Iris forceps</td>
			<td>Medical equipment factory of Shanghai Medical Instruments Co.,Ltd.,Shanghai, China</td>
			<td>YAA010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoproterenol</td>
			<td>MedChemExpress, Carlsbad, CA, United States</td>
			<td>HY-B0468/CS-2582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>SLBS5003</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MacroLED</td>
			<td>Cairn Research, Faversham, United Kingdom</td>
			<td>7355/7356</td>
			<td>The excitation light of fluorescence probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MacroLED light source</td>
			<td>Cairn Research, Faversham, United Kingdom</td>
			<td>7352</td>
			<td>Control the LEDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors</td>
			<td>Medical equipment factory of Shanghai Medical Instruments Co.,Ltd.,Shanghai, China</td>
			<td>YBC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optical signals sampling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>BCBS6841V</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICRO3-1401</td>
			<td>Cambridge Electronic Design limited, United Kingdom</td>
			<td>M5337</td>
			<td>Connect the electrical stimulator and Spike2 software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyoPacer EP field stimulator</td>
			<td>Ion Optix Co, Milton, MA, United States</td>
			<td>S006152</td>
			<td>Electric stimulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>SLBS2340V</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>BCBW9042</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, United States</td>
			<td>SLBX3605</td>
			<td>For Tyrode&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeuroLog System</td>
			<td>Digitimer</td>
			<td>NL905-229</td>
			<td>For ECG amplifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OmapScope5</td>
			<td>MappingLab, United Kingdom</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Calcium alternans and arrhythmia analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic scissors</td>
			<td>Huaian Teshen Medical Instruments Co., Ltd., Jiang Su, China</td>
			<td>T4-3904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptoSplit</td>
			<td>Cairn Research, Faversham, United Kingdom</td>
			<td>6970</td>
			<td>Split the emission light for detecting Ca2+ and Vm&#160; simultaneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristalic pump</td>
			<td>Longer Precision Pump Co., Ltd., Baoding, China,</td>
			<td>BT100-2J</td>
			<td>To pump the solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCD010060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F127</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, United States</td>
			<td>1899021</td>
			<td>To enhance the loading with Rhod2AM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RH237</td>
			<td>Thermo Fisher Scientifific, Waltham, MA, United States</td>
			<td>1971387</td>
			<td>Voltage-sensitive dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhod-2 AM</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, United States</td>
			<td>1890519</td>
			<td>Calcium indicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel tube</td>
			<td>Longer Precision Pump Co., Ltd., Baoding, China,</td>
			<td>96402-16</td>
			<td>Connect with the peristaltic pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture</td>
			<td>Yuankang Medical Instrument Co., Ltd.,Yangzhou, China</td>
			<td>20172650032</td>
			<td>To fix the aorta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike2</td>
			<td>Cambridge Electronic Design limited, United Kingdom</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record and analyze ECG data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulation electrode</td>
			<td>MappingLab, United Kingdom</td>
			<td>SE1600-35-2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T510lpxr</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>312461</td>
			<td>For light source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T565lpxr</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>321343</td>
			<td>For light source</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dual-dye optical mapping of hearts from ryr2r2474s knock-in mice of catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia

Proaritmik kardiyak bozukluk katekolaminerjik polimorfik ventriküler taşikardi (CPVT), fiziksel aktivite, stres veya katekolamin zorluğunu takiben polimorfik ventriküler taşikardi atakları olarak ortaya çıkar ve potansiyel olarak ölümcül ventriküler fibrilasyona dönüşebilir. Fare kalbi, CPVT dahil kalıtsal kardiyak aritmik hastalıkları modellemek için yaygın bir türdür. Langendorff perfüze fare kalplerinden transmembran potansiyelinin (Vm) ve kalsiyum geçişlerinin (CaT) eşzamanlı optik haritalanması, aritmogenezin altında yatan mekanizmaları aydınlatma potansiyeline sahiptir. Hücresel seviye araştırması ile karşılaştırıldığında, optik haritalama tekniği, aktivasyonun belirlenmesi, iletim hızı, aksiyon potansiyeli süresi ve CaT süresi gibi bazı elektrofizyolojik parametreleri test edebilir. Bu makale, izoproterenol mücadelesi öncesinde ve sırasında programlanmış elektrik pacing ile birlikte murin vahşi tip ve heterozigot RyR2-R2474S/+ kalplerinde CaT ve V m'nin yüksek verimli optik haritalaması için enstrümantasyon kurulumunu ve deneysel prosedürü sunmaktadır. Bu yaklaşım, bir ex vivo fare kalp preparatında CPVT hastalığını mekanik olarak incelemek için uygulanabilir ve güvenilir bir yöntem göstermiştir.

Optik haritalama, son on yılda karmaşık kardiyak aritmilerin incelenmesinde popüler bir yaklaşım olmuştur. Optik haritalama kurulumu, 1.000 Hz'e kadar örnekleme hızı ve her piksel için 74 x 74 μm uzamsal çözünürlük sağlayan bir EMCCD kameradan oluşur. Sinyal örneklemesi sırasında oldukça yüksek bir sinyal-gürültü oranı sağlar (Şekil 1). Langendorff perfüze edilmiş kalp stabil bir duruma ulaştığında ve boya yüklemesi bittiğinde, kalp, RH237 ve Ca2+</...

Watch this Scientific Journal Video about Dual-Dye Optical Mapping of Hearts from RyR2R2474S Knock-In Mice of Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia at JoVE.com

Dual-Dye Optical Mapping of Hearts from RyR2R2474S Knock-In Mice of Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia

Bu protokol, yüksek zamansal ve uzamsal çözünürlüğe sahip transmembran voltajının ve hücre içi Ca2+ geçici akımlarının elektrofizyolojik ölçümleri de dahil olmak üzere, katekolaminerjik polimorfik ventriküler taşikardiden etkilenen vahşi tip ve knock-in hayvanlardan elde edilen fare kalplerinin çift boyutlu optik haritalamasını sunar.

Katekolaminerjik Polimorfik Ventriküler Taşikardi RyR2R2474S Knock-In Farelerinden Kalplerin Çift Boyutlu Optik Haritalaması

The pro-arrhythmic cardiac disorder catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia (CPVT) manifests as polymorphic ventricular tachycardia episodes ...

Bu yöntem, katekolaminerjik, polimorfik ventriküler taşikardi gibi hastalıklarla ilişkili ventriküler arrest yaymalarının elektrofizyolojik özelliklerini ve mekanizmalarını ortaya koymamıza yardımcı olacaktır. Bu tekniği kullanarak, özellikle CPVT gibi kardiyak aritmik hastalığın altında yatan mekanizmaları ve dinamikleri keşfetmek için uygun olan çeşitli programlanmış elektriksel pacing protokolleri altında membran potansiyelini ve hücreler arası kalsiyum sinyallerini aynı anda elde edebiliriz. Bu deneyi başarılı bir şekilde gerçekleştirmek için, iyi perfüze edilmiş bir kalbe, uygun boya yüklemesine, uyarma-kasılma ayırma ve dikkatli kamera ayarlarına sahip olduğunuzdan emin olun.Başlamak için optik haritalama sistemini kurun ve eksi 50 santigrat derecede sabit örnekleme sıcaklığı için kamerayı açın. Metabolizmayı yavaşlatmak ve kalbi korumak için hasat edilen fare kalbini soğuk CREB solüsyonuna yerleştirin. Aortun çevresindeki dokuyu çıkarın.Kanül yapmak için özel yapım bir kanül iğnesi kullanın ve 4-0 ipek sütürle sabitleyin. Şimdi kalbi Langendorff sistemi ile dakikada 3,5 ila 4,0 mililitre sabit bir hızda perfüze edin. Aşırı ön yüklemeyi önlemek için haznedeki çözelti tıkanıklığını gidermek için sol ventriküle küçük bir plastik tüp yerleştirin ve plastik tüpü kanülasyon iğnesine sabitleyin.Ardından banyodaki perfüzata iki uç yerleştirin ve elektrokardiyogram amplifikatör kutusu ve elektrik stimülasyon kontrolörü için güçleri açın. Ardından, referans verilen elektrokardiyogramı veya EKG yazılımını başlatın ve EKG'yi sürekli izleyin. Kalp kararlı bir duruma ulaştığında karanlıkta sonraki adımları gerçekleştirin.Blöbbistatin CREBs solüsyon karışımını, eksitasyondan kasılmayı ayırmak ve filme alma sırasında kasılma artefaktlarını önlemek için 10 dakika boyunca sürekli olarak kalbe perfüze edin. Daha sonra kırmızı bir el feneri kullanarak, kasılmaların tamamen durduğunu doğrulamak için kalbi inceleyin. Uyarma kasılması çözüldükten sonra kalbi Rhod-2 çalışma solüsyonu ile Langendorff perfüzyon sisteminde 15 dakika boyunca perfüze edin.Hücre içi kalsiyum boya yüklemesi sırasında oksijen beslemesini koruyun. Pluronik F-127'den kabarcık oluşumunu önlemek için, perfüzyon sistemine bir kabarcık tutucu yerleştirin. 10 mikrolitre RH 237 stok çözeltisini 50 mililitre perfüzata seyreltin ve 10 dakika boyunca yükleyin.Çift boya yüklemesini tamamladıktan sonra, bir dizi fotoğraf çekin. Voltaj ve kalsiyum sinyallerinin analiz için yeterli olduğunu onaylayın. Uyarma ışıkları için iki LED'i açın ve yoğunluklarını uygun bir aralığa ayarlayın.Kalbi algılama cihazının altına yerleştirin ve ışık noktası çapını iki santimetreye ayarlayan iki LED ile iyi aydınlatıldığından emin olun. İstenen örnekleme hızını ve uzamsal çözünürlüğü elde etmek için lens ile kalp arasındaki çalışma mesafesini 10 santimetre olarak ayarlayın. Kamerayı aynı anda kontrol etmek ve voltaj ve kalsiyum sinyallerini yakalamak için sinyal örnekleme yazılımını açın.MyoPacer Alan Stimülatörünü başlatın ve darbe başına iki milisaniye ilerleme hızı süresi ile ilerleme hızı modelini transistör transistör mantığına ayarlayın. Başlangıç yoğunluğunu 0,3 volt olarak ayarlayın. Sol ventrikül tepesinin epikardiyaline bağlı bir çift platin elektrot yerleştirin.EKG kayıt yazılımını kullanarak kalbin diyastolik voltaj eşiğini test etmek için 30 ardışık 10 hertz S1 uyaranı uygulayın. Bire bir yakalama elde edilene kadar voltaj genliğini kademeli olarak artırın. Kalsiyum veya aksiyon potansiyeli alternatiflerini ve restitüsyon özelliklerini ölçmek için S1-S1 protokolünü uygulayın.Kalbi 100 milisaniyelik temel bir döngü uzunluğundan başlayarak art arda hızlandırın. 50 milisaniyeye ulaşana kadar sonraki her sekansta döngü uzunluğunu 10 milisaniye azaltın. Stimülasyondan önce optik haritalamayı aynı anda başlatın.S1-S2 uyaran protokolünü kullanarak ventriküler etkili refrakter periyodunu ölçmek için, 100 milisaniyelik bir S1-S1 pacing döngüsü uzunluğu ile başlayın. S2'yi 60 milisaniyede birleştirin ve S2 ektopik QRS kompleksini yakalayamayana kadar iki milisaniyelik adımlık bir azalma ile azaltın. Aritmi indüksiyonu için, sürekli 50 hertz burst pacing uygulayın ve iki saniyelik bir dinlenme aralığı bekledikten sonra aynı pacing bölümünü gerçekleştirin.İlginç bir aritmik dalga oluştuğunda eşzamanlı optik haritalama kayıtlarına hemen başlamak için sürekli yüksek frekanslı pacing süresi boyunca elektrokardiyogram kayıtlarını dikkatlice izleyin. Elektron çarpan şarj bağlantılı cihaz kamerasını kullanarak görüntü yakalamaya devam edin. Görüntü alma yazılımında, Klasör Seç'e basın ve yarı otomatik büyük video veri analizi sürecini başlatmak için görüntüleri yükleyin.Analiz için doğru örnekleme parametrelerini girin. Görüntü eşiğini manuel olarak ayarlayın ve ilgilendiğiniz bölgeyi seçin. Üçe üç piksel Gauss uzamsal filtresi, Savitzky-Golay filtresi ve silindir şapka taban çizgisi düzeltmesi uygulayın.Ardından, taban çizgisini kaldırmak ve APD-80 ve CATD-50 gibi elektrofizyolojik parametreleri hesaplamak için Process Images'a basın. APD-80'i hesaplamak için aksiyon potansiyeli süresinin başlama zamanını tepe noktasına ve bitiş noktasını %80 repolarizasyona ayarlayın. Benzer şekilde, kalsiyum geçici süresinin başlangıç zamanını, son noktası %80 gevşeme olacak şekilde tepe noktası olarak tanımlayın.APD-80 ve CATD-80'in ısı haritalarındaki tipik izler gösterilmektedir. İzoproterenol, APD-80 ve vahşi tip ve katekolaminerjik polimorfik ventriküler taşikardi veya CPVT farelerini kısaltır, ancak izoproterenol zorluğundan sonra hiçbir fark bulunmadı. CATD-80 ve CPVT fareleri, izoproterenol zorluğundan sonra vahşi tipe göre daha uzunken, tedaviden önce anlamlı değildi.Voltaj sinyallerine göre, vahşi tip ve CPVT kalpleri, başlangıçta ve izoproterenol müdahalesinden sonra epikard boyunca aynı iletim kabiliyetine sahipti. Isı haritaları, CPVT farelerinin, izoproterenol mücadelesinden önce ve sonra vahşi tip farelerle aynı iletim yeteneğine sahip olduğunu göstermiştir. Kalsiyum genliği alternatifleri analizi, vahşi tip kalplerdeki kalsiyum sinyallerinin 14.29 ve 16.67 hertz'de ardışık S1-S1 pacing sırasında başlangıçta sabit kaldığını, CPVT kalplerinin ise frekansa bağlı alternatifler gösterdiğini gösterdi.İzoproterenol mücadelesinden sonra, CPVT kalpleri S1-S1 pacing sırasında frekansa bağlı alternatifler ve kalsiyum sinyali sergilerken, vahşi tip kalpler etkilenmedi. Taşi aritmi analizi, hem vahşi tip hem de CPVT kalplerinin başlangıçta 50 hertz patlama hızı sırasında normal iletim sergilediğini göstermiştir. İzoproterenol ile bolluktan sonra, CPVT kalpleri 50 hertz patlama hızından sonra yüksek frekanslı rotorlar gösterirken, vahşi tip kalpler normal iletimi korudu.Bu prosedürü takiben, bu modellerde veya farmasötiklerin icadında elektrofizyolojik ve fonksiyonel özellikleri göstermek için adogen türleri ve vahşi tip fareler kullanılır. Optik haritalama, kardiyak aritmileri incelemek için güçlü bir araçtır, ancak uyarma kasılma ayırma bağlantısı altında floresan boyadaki sınırlama nedeniyle klinik olarak kullanılamaz. Yüksek devirli hesaplama teknolojisinin geliştirilmesi altında farklı hedef moleküller için uygun floresan geliştirilmesiyle, kardiyak optik haritalama tekniği sadece uygulamaları başarmak zorundadır.

Research

JoVE Journal

Biology

Dual-Dye Optical Mapping of Hearts from RyR2R2474S Knock-In Mice of Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia

Proper Care and Cleaning of the Microscope

Mikroskop Uygun Bakım ve Temizlik

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a ...

Major Components of the Light Microscope

Işık Mikroskobu Binbaşı Bileşenleri

The light microscope is a basic tool for the cell biologist, who should have a thorough understanding of how it works, how it should be aligned for ...

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

Langendorff perfüze sıçan Kalpler Optik Haritalama

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

Semi-automated Optical Heartbeat Analysis of Small Hearts

Küçük Kalpler Yarı-otomatik Optik Heartbeat Analizi

We have developed a method for analyzing high speed optical recordings from Drosophila, zebrafish and embryonic mouse hearts (Fink, et. al., 2009). Our ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Embriyonik Ventriküler Endotel Hücre İzolasyonu

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Voltage and Calcium Dual Channel Optical Mapping of Cultured HL-1 Atrial Myocyte Monolayer

Kültürlü HL-1 Atriyal miyositlerdeki Monolayer Gerilim ve Kalsiyum Çift Kanal Optik Haritalama

Optical mapping has proven to be a valuable technique to detect cardiac electrical activity on both intact ex vivo hearts and in cultured myocyte ...

Optical Mapping of Intra-Sarcoplasmic Reticulum Ca2+ and Transmembrane Potential in the Langendorff-perfused Rabbit Heart

Optical Mapping of Intra-Sarcoplasmic Reticulum Ca2+ and Transmembrane Potential in the Langendorff-perfused Rabbit Heart

Intra-Sarkoplazmik Retikulum Ca Optik Haritalama<sup&gt; 2+</sup&gt; Ve Langendorff-perfüze Tavşan Heart Transmembran Potansiyeli

Sarcoplasmic reticulum (SR) Ca2+ handling plays a key role in normal excitation-contraction coupling and aberrant SR Ca2+ handling is known to play a ...