विधि ओपन सोर्स सॉफ्टवेयर पर आधारित है जो वयस्क के ट्रैकिंग व्यवहार के लिए स्थानीय मोटर गतिविधियों का व्यवस्थित रूप से मूल्यांकन करती है और रिकॉर्ड किए गए वीडियो से लार्वा मक्खियों को मक्खियों को पकड़ता है। इस विधि को व्यवहार को रिकॉर्ड करने और विश्लेषण करने के लिए कम लागत वाले डिवाइस एकीकरण की आवश्यकता होती है, जिससे यह फ्लाई लोकोमोशन की स्क्रीनिंग के लिए एक किफायती और प्रभावी दृष्टिकोण बन जाता है। यह तकनीक स्थानीय गति हानि के साथ मानव रोग के एक फ्लाई मॉडल में व्यवहार संशोधन की पहचान करने के लिए नियोजित है, लेकिन यह बीमारी, विकलांगता या कठिनाइयों के इलाज के लिए उपयुक्त नहीं है।
विश्लेषण प्रक्रिया के दौरान प्रासंगिक वीडियो विंडो को साफ़ करना आवश्यक है, अर्थात् मूल और प्रसंस्करण वीडियो विंडो। शुरू करने के लिए, निर्माता के निर्देशों के अनुसार, ड्रोसोफिला लोकोमोशन ट्रैकिंग के लिए खुले क्षेत्र क्षेत्र को तैयार करने के लिए, एक से 10 के अनुपात में सिलिका किट के अभिकर्मक ए और अभिकर्मक बी को मिलाएं। इसके बाद, एचडी कैमरे को एक ट्राइपॉड पर सेट करें, इसे समायोजित करें ताकि कैमरा लेंस सिलिका क्षेत्र की सतह के लंबवत हो।
फिर फिजी के साथ वीडियो खोलें। प्रगति पट्टी को प्रारंभिक फ़्रेम पर खींचें और मौन रूप से अनुमोदन करें. फ्रीहैंड चयन उपकरण का उपयोग करके मक्खी के पूरे शरीर का चयन करें।
जब तक चयनित क्षेत्र का ग्रे मान व्यापक पृष्ठभूमि तक नहीं पहुंचता, तब तक सफेद संतुलन को समायोजित करने के लिए छवि, समायोजन, और चमक और कंट्रास्ट पर क्लिक करें। एनेस्थेटाइज्ड मक्खी को खुले मैदान के मैदान में स्थानांतरित करें। एक बार जब मक्खी संज्ञाहरण से ठीक हो जाती है, तो कैमरे के नीचे मक्खी के साथ एरिना डिश डालें और रिकॉर्डिंग शुरू होने पर मक्खी गति में हो, यह सुनिश्चित करने के लिए इसे एक तरफ से जल्दी हिलाएं।
वीडियो रिकॉर्डिंग प्रारंभ करने के लिए कैमरा अनुप्रयोग पर रिकॉर्ड बटन दबाएँ। रिकॉर्डिंग के पूरा होने पर, वीडियो रिकॉर्डिंग को समाप्त करने के लिए स्टॉप बटन दबाएं। रिकॉर्ड किए गए वीडियो को एम-जे मूर्तिपूजक कोडिंग के साथ एवीआई प्रारूप में परिवर्तित करें ताकि उन्हें फिजी का उपयोग करके खोला और विश्लेषण किया जा सके।
वयस्क मक्खियों के लिए 15 एफपीएस और लार्वा के लिए 12 एफपीएस पर वीडियो के प्रति सेकंड फ्रेम सेट करें। फिजी के साथ वीडियो खोलने के लिए, दो विकल्पों का चयन करें, वर्चुअल स्टैक का उपयोग करें और पॉप-अप विंडो में ग्रे स्केल में परिवर्तित करें। पशु ट्रैकर प्लगइन के सेट सक्रिय छवि उपकरण का उपयोग करके एक प्रसंस्करण विंडो प्राप्त करें, और एक ट्रैकिंग क्षेत्र बनाएं जो अंडाकार उपकरण का उपयोग करके मूल वीडियो विंडो में अखाड़े को घेरता है।
प्रोसेसिंग विंडो में पहले रिक्त फ्रेम के लिए फ़िल्टर और दो फ़िल्टर के पैरामीटर सेट करें। फिर मूल वीडियो विंडो में अगले फ्रेम का चयन करें, और प्रसंस्करण विंडो की फ़िल्टर की गई सतह चुनें। एक बार फ़िल्टर की गई प्रोसेसिंग विंडो का चयन हो जाने के बाद, प्रोसेसिंग विंडो में कवर किए गए लाल प्रोफ़ाइल के साथ ट्रैक्ट फ्लाई को चालू करने के लिए सेट थ्रेशोल्ड टूल का उपयोग करें।
फिर कंप्यूटर को प्रसंस्करण विंडो में कवर किए गए लाल प्रोफ़ाइल के साथ मक्खी को पहचानने के लिए सेट ब्लॉब डिटेक्टर का उपयोग करें। वयस्क मक्खी या लार्वा के लिए अंतिम फ्रेम सेट करें, जैसा कि पाठ पांडुलिपि में वर्णित है। मूल वीडियो विंडो में एक ट्रैकिंग आयत प्रस्तुत करने के लिए शो ब्लॉब्स टूल का उपयोग करें।
ट्रैकिंग प्रारंभ करें और निगरानी पूरी होने के बाद ट्रैकिंग फ़ाइल निर्यात करें। पशु ट्रैकर और ट्रैकिंग विश्लेषक प्लगइन का उपयोग करके ट्रैक और ज़ोन फ़ाइलों को लोड करें। ज़ोन सेटिंग्स का उपयोग करके वांछित अनुक्रमणिका का चयन करें, और पैरामीटर सेटिंग्स परिवर्तित करें।
फ़्रेम दर का उपयोग करके फ़्रेम अंतराल के समय की गणना करें. ट्रैकिंग विश्लेषक में विश्लेषण किए जाने के बाद, स्प्रेडशीट सॉफ्टवेयर और ग्राफ पैड प्रिज्म का उपयोग करके मात्रात्मक विश्लेषण चार्ट का उत्पादन करें। ट्रैक फ़ाइल खोलें.
Microsoft Office Excel में सभी निर्देशांकों की प्रतिलिपि बनाएँ और स्थान कुंजी का उपयोग कर कक्षों को विभाजित करें. प्रति फ़्रेम अंतराल गतिहीनता समय की गणना करने के लिए, सभी परिकलित परिणामों का चयन करें और पूरे स्तंभ चार्ट के मार्जिन से गतिहीनता समय को नेत्रहीन रूप से प्रदर्शित करने के लिए एक स्तंभ चार्ट सम्मिलित करें. दिशा के कोण में परिवर्तन ों को स्पष्ट करने के लिए, सभी परिकलित परिणामों का चयन करें और एक स्कैटर आरेख सम्मिलित करें।
वयस्क मक्खियों और तीसरे इनस्टार लार्वा, जिन्हें रोटेनोन के साथ इलाज किया गया था, में विलायक डीएमएसओ के साथ खिलाए गए नियंत्रण मक्खियों की तुलना में महत्वपूर्ण लोकोमोटर घाटे थे। वयस्क मक्खियों में रोटेनोन उपचार के मात्रात्मक विश्लेषण ने यात्रा की गई दूरी और औसत वेग में उल्लेखनीय कमी दिखाई। और गतिहीनता समय में उल्लेखनीय वृद्धि।
प्रतिनिधि ग्राफ़ ने नियंत्रण में उन लोगों की तुलना में रोटेनोन के साथ खिलाए गए मक्खियों में प्रति फ्रेम अंतराल में आंदोलन की गति के लिए कम चोटियां दिखाईं, जो लोकोमोटर गतिविधि घाटे की गंभीरता का संकेत देती हैं। प्रति फ्रेम स्थानांतरित पिक्सेल के संस्थान-वादी गतिहीनता कॉलम ने नियंत्रित मक्खियों की तुलना में रोटेनोन खिलाए गए मक्खियों के लिए एक मिनट के भीतर काफी कम आंदोलन दिखाया। रोटेनोन खिलाए गए और नियंत्रित जानवरों में दिशा परिवर्तन के गतिशील कोण को दर्शाने वाले प्रतिनिधि रेखांकन ने मक्खियों द्वारा चुनी गई दिशा में परिवर्तन का भी खुलासा किया।
तीसरे इनस्टार लार्वा के लिए इसी तरह के परिणाम देखे गए। परिणामों से पता चला कि रोटेनोन के साथ खिलाए गए लार्वा को ट्रैक करने का व्यवहार आंदोलन नियंत्रण की तुलना में काफी बिगड़ा हुआ था। विश्लेषण प्रक्रिया में सबसे महत्वपूर्ण कदम खाली फ्रेम का पहला बनाना है, क्योंकि यह सबूत देता है कि सॉफ्टवेयर प्रभावी ढंग से जांच कर सकता है या नहीं।
यह तकनीक शोधकर्ताओं को तंत्रिका या मांसपेशियों की चोट जैसे कई दोषों के अंतर्निहित तंत्र में गहराई से जाने की अनुमति दे सकती है।