Denne model kan ikke kun bruges til at udforske patogenesen af ACD, men er også anvendelig til præklinisk udvikling af nye terapeutiske metoder, hvilket har en vigtig betydning. Dette er en stabil og effektiv dyremodel med mange fordele, såsom en kort forsøgsperiode, nem betjening, tydelige symptomer og en høj succesrate. Vores eksperimentelle protokol er meget detaljeret og nem at betjene.
Sørg for at følge hvert trin i protokollen korrekt. Før du starter modelleringen, skal du akklimatisere musene til miljøet i en uge med fri adgang til mad og vand. På modelleringsdagen skal du rengøre og desinficere miljøet og bordpladerne ved hjælp af en ultraviolet lampe og 75%alkohol.
Påfør sæbevand på musenes underliv ved hjælp af en vatpind, og barber området i retning af hårvækst med et blad eller barbermaskine. Vej musen og sammenlign vægtændringerne mellem hver gruppe. Før du udfører abdominal sensibiliseringsstimulering, skal du sikre fuld genopretning af enhver mindre skade på musens mavehud induceret ved barbering.
Forbered 0,5% DNFB-opløsning og fortynd den med acetone til olivenolieblanding i forholdet 4 til 1. Brug en pipettepistol til at blæse og blande 20 gange for at blande DNFB-opløsningen grundigt. Påfør 25 mikroliter af 0,5 % DNFB-opløsningen over midten af mavebarberingsområdet med en pipetter, og spred let med den glatte side af pipetterspidsen for at sprede den ensartet.
Efter 30 sekunders DNFB-stimulering placeres musen i et tomt bur uden strøelse for at forhindre musen i at gnide DNFB-opløsningen. Når opløsningen er helt tør, skal du returnere musen til sit oprindelige bur med fri adgang til mad og vand. For stimulering af øresensibilisering skal du orientere musekroppen og få den ydre kant af auricleen til at vende nedad for at forhindre, at opløsningen kommer ind i øregangen under DNFB-stimulering.
På dag 4 og 10 påføres 20 mikroliter af køretøjet eller 0,2 % DNFB-opløsning langsomt og ensartet på den indre overflade af venstre auricle, og opløsningen fordeles forsigtigt ved hjælp af pipettens glatte side. Lad højre øre være ubehandlet. Vent, indtil DNFB-opløsningen er tør, og læg musen tilbage i buret.
Efter stimulering af mave- og øresensibilisering vejes musene hver anden dag fra dag ét. Sammenlign vægten af hver mus med dag nul, og evaluer effekten af ACD på musenes kropsvægt, når vægten ændres. Tag billeder i høj opløsning af museørerne for at registrere ACD kliniske symptomer hver anden dag, startende fra dag ét.
Brug vernier kalibre til at måle auricletykkelsen på samme tid hver dag for nøjagtige resultater. Stop vernierkalibrene fra at fortsætte indadgående fastspænding, når der er en lille blokering for at forhindre vævsskade på museøret. Hold positionen fast, og registrer dataene for begge ører.
Registrer gennemsnittet af de tre data, og vurder ørehævelsen i mikrometer. For at evaluere graden af inflammatorisk hævelse på dag 11 skal du forberede 0,5% Evans Blue dye-opløsning og fortynde den med PBS. For at immobilisere musen med en fixator skal du åbne låget, holde musehalen, få musens hoved til at vende mod fiksatoren og lade musen instinktivt klatre ind i fiksatoren.
Dæk låget. Få musehalen til at komme ud af hullet på låget, og juster fiksatorens længde for at udsætte hele musehalen. Tør halen gentagne gange med en alkoholbomuldskugle, eller blød den i varmt vand i 30 sekunder, og klem forsigtigt roden af halen for at fylde og udvide venerne på begge sider.
Injicer langsomt Evans Blue Dye-opløsning i musens halevene ved hjælp af en 1 mm insulinnål under bestråling af en kold lyskilde. Vent i 15 minutter for at tage billeder af museørerne. DNFB-gruppens museører viste tydelige kliniske symptomer, der kunne sammenlignes med ACD, med følsomme områder, der viste de typiske symptomer på rødme, tørhed, erosion og ekssudation.
Imidlertid fremkaldte øreadministration af rent vand eller opløsningsmiddelkontrol ingen symptomer svarende til DNFB-gruppen. I DNFB-gruppen sammenlignet med det ubehandlede højre øre, Tykkelsen af venstre øre steg signifikant efter DNFB-stimulering. Der var ingen signifikant forskel i kontrol- og køretøjsgrupperne.
Det venstre øre af DNFB-gruppemusene blev mørkeblå efter injektionen af Evans Blue-farvestof, som var visuelt forskelligt fra højre øre. Venstre og højre øre af mus i kontrol- og køretøjsgrupper havde omtrent samme farve. Musens vægtøgning blev lidt bremset af DNFB eller simpel køretøjsstimulering, men resulterede ikke i signifikant vægttab.
Gentagen DNFB-stimulering i museøret resulterede i miltforstørrelse og en stigning i miltindekset. I modsætning hertil ændrede miltindekset for mus i køretøjsgruppen sig ikke signifikant. Sørg for, at DINFB-opløsningen er fuldt blandet og jævnt påført museøret uden at strømme ind i øregangen.
Dette er nøglen til succes med modellering.