Name: neutrophil lifespan extension with clon-g and an in vitro spontaneous death assay
Uploaded: 2023-05-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay at JoVE.com

פרויקט זה נתמך על ידי קרן החדשנות של מעבדת Haihe למערכת אקולוגית של תאים (22HHXBSS00036, 22HHXBSS00019), קרן החדשנות של האקדמיה הסינית למדעי הרפואה (CAMS) למדעי הרפואה (2021-I2M-1-040,2022-I2M-JB-015), קרן המחקר המיוחדת לאוניברסיטאות מרכזיות, המכללה הרפואית פקין יוניון (3332022062) ותוכנית התמיכה במדע וטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (NO. 2021YJ0480).

בית החולים לילדים בבוסטון ומעבדת המפתח הממלכתית להמטולוגיה ניסויית (SKLEH) הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים אישרו ופיקחו על כל הנהלים. איור 1 מתאר תרשים זרימה של תרבית נויטרופילים עם CLON-G ומבחן המוות במבחנה .
1. הארכת תוחלת החיים של נויטרופילים עם CLON-G</strong...

נויטרופילים ממלאים תפקידים חיוניים בחסינות מולדת ונרכשת, וההומאוסטזיס שלהם מוסדר היטב. נויטרופילים הם הלויקוציטים הנפוצים ביותר בדם ההיקפי האנושי, ויש להם מחזור חזק ומהיר. מבוגר בריא יכול לשחרר 1 x 109 נויטרופילים / ק"ג מדי יום ממח העצם28. מותם של נויטרופילים הפך אפוא לאחת ?...

נויטרופילים ידועים כמרכיבים ארסנל של גרגירים ציטופלזמיים בשפע, ניקוטין-אמיד אדנין די-נוקלאוטיד פוספט (NADPH) אוקסידאז, אנזימים אנטי-מיקרוביאליים ואברונים שונים המגנים מפני חיידקים פולשים; בנוסף, הם תנועתיים מאוד והם התאים הראשונים שגויסו לאתר הדלקת, כלומר נויטרופילים הם קו ההגנה הראשון של מערכת החיסון המולדת 1,2. טיפול בעירוי גרנולוציטים הפך לפיכך לטיפול קליני מבטיח לזיהומים הקשורים לנויטרופניה כדי להגביר באופן זמני את חסינות הנויטרופילים 3,4,5. תגליות אחרונות הראו בבירור כי נויטרופילים מתפקדים גם כמשפיעים רב-פנים בתרחישים פיזיולוגיים רבים6. תוחלת החיים הממוצעת של נויטרופיל היא פחות מ -24 שעות, ולכן, מחקר בסיסי על נויטרופילים ויישום של מחקרי נויטרופילים הם קשים מאוד בשל המגבלות הקשורות מניפולציה גנטית יציבה ואחסון לטווח ארוך 7,8,9,10,11 . ישנם כמה קווי תאים שיכולים להציג באופן חלקי כמה פונקציות נויטרופילים, כגון HL-60, PLB-985, NB4, Kasumi-1, ותאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים12. קווי תאים אלה יכולים להשיג עריכה גנטית יעילה ושימור בהקפאה; עם זאת, הם עדיין שונים במידה עצומה מנויטרופילים ראשוניים, ולכן אינם יכולים לשחזר נאמנה פונקציות נויטרופילים13. לפיכך, רוב המחקר בתחום זה עדיין מסתמך על נויטרופילים ראשוניים טריים שבודדו. השדה עדיין מסתמך על יצירת עכברים מותנים יקרים וגוזלי זמן כדי לחקור תפקודים גנטיים ספציפיים בנויטרופילים, אך כיום לא קיימים מודלים אנושיים.
לאחר שהשקענו את מאמצינו לחקור את התהליכים ההטרוגניים המעורבים במוות של נויטרופילים ואת המסלולים המרובים המווסתים תהליכים אלה14,15, דווח לאחרונה על טיפול חדש המכונה CLON-G (caspases-lysosomal membrane permebilization-oxidant-necroptosis inhibition plus granulocyte colony-stimulating-stimulating factor) 16. CLON-G מורכב מ-Q-VD-oph (quinolyl-valyl-O-methylaspartyl-[-2,6-difluorophenoxy]-methyl ketone), Hsp70 (חלבון הלם חום 70), DFO (דפרוקסאמין), NAC (N-אצטיל-ציסטאין), Nec-1s (נקרוסטטין-1s) ו-G-CSF (גורם מגרה מושבת גרנולוציטים). מוות ספונטני של נויטרופילים מתווך על ידי מסלולים מרובים, כולל אפופטוזיס, נקרופטוזיס ופירופטוזיס. Q-VD-oph מעכב אפופטוזיס של נויטרופילים כמעכב פאן-קספז על ידי התמקדות בקספז 1, קספז 3, קספז 8 וקספז 917. נקרופטוזיס נויטרופיל תלוי במסלול איתות הכולל חלבון קינאז-1 (RIPK1) וחלבון דמוי תחום קינאז שושלת מעורבת (MLKL)18. כמעכב RIPK1, Nec-1s מעכב את הנקרופטוזיס של נויטרופילים. Hsp70 ו-DFO יכולים לעכב חדירות קרום ליזוזומלי (LMP), מה שעלול לגרום לאפופטוזיסנויטרופילים 19 ולפירופטוזיס20. מיני חמצן תגובתי (ROS) ממלאים תפקידים חיוניים במוות של נויטרופילים על ידי תיווך LMP19 ואפופטוזיס21 ועל ידי עיכוב אותות הישרדות22. כנוגד חמצון שיכול להפחית הצטברות ROS, NAC מעכב מוות של נויטרופילים. כגורם גדילה, G-CSF מפעיל אותות הישרדות נויטרופילים ומעכב אפופטוזיס23,24 המושרה על ידי calpain. על ידי התמקדות בו זמנית במסלולי מוות ספונטניים מרובים של נויטרופילים, ניתן להאריך ביעילות את תוחלת החיים של הנויטרופילים ליותר מ-5 ימים מבלי לפגוע בתפקודם. טיפול CLON-G מרחיב את האפשרויות של שימור נויטרופילים, שינוע ומניפולציה גנטית, אשר יכולים להאיץ את המחקר בקהילת הנויטרופילים. בינתיים, בהתבסס על הידע על מוות נויטרופילים, הפרוטוקולים המאושרים כיום לבדיקות מוות תאי יכולים לגרום נזק בלתי צפוי לנויטרופילים14, ולכן פרוטוקולים אלה שוכללו כך שיתאימו יותר למחקרי נויטרופילים. דו"ח זה מספק פרוטוקולים מפורטים לתרבית נויטרופילים עם CLON-G ובדיקת מוות תאי במבחנה של נויטרופילים בעכברים באמצעות ציטומטריית זרימה והדמיית פלואורסצנטיות. CLON-G יעיל הן על עכברים והן על נויטרופילים אנושיים; עם זאת, דגימות העכבר מודגמות כאן כדי לפשט פרוטוקול זה. הריכוז של NAC הוא 1 מילימטר עבור נויטרופילים של עכברים ו-10 מיקרומטר עבור נויטרופילים אנושיים. Hsp70 הוא ספציפי למין, ולכן יש להשתמש בו בהתאם למקור הנויטרופיל. עבור פרוטוקול זה, אין זה משנה אם נויטרופילים מבודדים מדם היקפי או מח עצם וכיצד הם מבודדים.
במחקר הנוכחי, נויטרופילים בודדו ממח עצם של עכבר כדי להשיג מספיק נויטרופילים לניסויים, שכן ניתן להשיג כ 1 x 10 7-1.5 x 107 נויטרופילים ממח העצם, בעוד שרק 1 x 10 6 נויטרופילים ניתן לבודד מהדם ההיקפי של עכבר יחיד בן 8-12 שבועות C57BL/6 (משני המינים). צנטריפוגה הדרגתית בוצעה כדי למנוע נזק והפעלה אפשריים מהגירוי המכני של מיון FACS או מיון MACS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m syringe filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4612</td>
			<td>Filtrate prepared CLON-G components.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL micro centrifuge tube</td>
			<td>LABSELECT</td>
			<td>MCT-001-150</td>
			<td>Lab consumable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>LABSELECT</td>
			<td>CT-002-15</td>
			<td>Lab consumable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well cell culture plate</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351147</td>
			<td>Neutrophil culture plate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>LABSELECT</td>
			<td>CT-002-50</td>
			<td>Lab consumable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSRII</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>Instrument for flow cytometry analysis of neutrophil death.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td>Assitant of Annexin-V binding&#160; to phosphatidylserine.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Perkinelmer</td>
			<td>UltraVIEW VOX</td>
			<td>Instrument for fluorescent analysis of neutrophil death.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal plate</td>
			<td>NEST</td>
			<td>801001-20mm</td>
			<td>Lab consumable for fluorescent image assay.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting beads</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>C36950</td>
			<td>Quantification in flow cytometry analysis of neutrophil death.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DFO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9533</td>
			<td>Component of CLON-G. LMP inhibitor.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide ( DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td>Solvent for Q-VD-oph and Nec-1s.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099141C</td>
			<td>Component of neutrophil culture basic medium. Nutrition supply.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-Annexin-V</td>
			<td>BD</td>
			<td>51-65874X</td>
			<td>Annexin-V can bind to phosphatidylserine of aged cells.This is at FITC channel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hsp70</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113187</td>
			<td>Component of CLON-G. LMP inhibitor.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAC</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Component of CLON-G. Antioxidant.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nec-1s</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>852391-15-2</td>
			<td>Component of CLON-G. Necroptosis inhibitor.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution (PS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Component of neutrophil culture basic medium. Antibiotics to protect cells from bacteria comtamination.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide (PI)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>421301</td>
			<td>For neutrophil death assay. A small fluorescent molecule that binds to DNA&#160; but cannot passively traverse into cells that possess an intact plasma membrane.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-VD-oph</td>
			<td>Selleck chem</td>
			<td>S7311</td>
			<td>Component of CLON-G. Pan-caspase inhibitor.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Granulocyte Colony-stimulating Factor for Injection (CHO cell)(G-CSF)</td>
			<td>Chugai Pharma China</td>
			<td>GRANOCYTE</td>
			<td>Component of CLON-G.&#160; Promote neutrophil survival through Akt pathway.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polystyrene Tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>100-0102</td>
			<td>Lab consumable for flow cytometry analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td>Component of neutrophil culture basic medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>LEAGENE</td>
			<td>R00641</td>
			<td>Solution for flow cytometry analysis of neutrophil death.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>FENG CHUAN</td>
			<td>13-011-00029</td>
			<td>pH adjustion for NAC.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa Stain Solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1020</td>
			<td>Neutrophil cytospin staining.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

neutrophil lifespan extension with clon-g and an in vitro spontaneous death assay

תוחלת החיים הממוצעת של נויטרופילים היא פחות מ-24 שעות, מה שמגביל את המחקר הבסיסי על נויטרופילים ואת היישום של מחקרי נויטרופילים. המחקר הקודם שלנו הצביע על כך שמסלולים מרובים יכולים לתווך את המוות הספונטני של נויטרופילים. קוקטייל פותח על ידי התמקדות בו זמנית במסלולים אלה, עיכוב קספזות-ליזוזומליות של קרום החדירה-חמצון-נקרופטוזיס בתוספת גורם מגרה מושבת גרנולוציטים (CLON-G), אשר האריך את תוחלת החיים של הנויטרופילים ליותר מ -5 ימים מבלי לפגוע באופן משמעותי בתפקוד הנויטרופילים. במקביל פותח גם פרוטוקול אמין ויציב להערכה והערכה של מוות נויטרופילים. בעבודה זו, אנו מראים כי CLON-G יכול להאריך את תוחלת החיים של נויטרופילים במבחנה ליותר מ -5 ימים, ואנו מציגים את התארכות תוחלת החיים של נויטרופילים באמצעות FACS ומיקרוסקופ פלואורסצנטי קונפוקלי. דו"ח זה מציג נהלים להכנת CLON-G ומציג בדיקת מוות ספונטני במבחנה של נויטרופילים, אשר יכולה לשמש לחקר נויטרופילים ולאחר מכן לחקור מוות נויטרופילים, ובכך לספק משאב אמין לקהילת הנויטרופילים.

המורפולוגיה המוכתמת של רייט-גימסה (איור 2A-D) ופנוטיפים של FACS (איור 2E-J) של הנויטרופילים שטופלו ב-CLON-G לא הושפעו. הכדאיות של נויטרופילים שטופלו ב-CLON-G תוך 24 שעות הייתה בערך 90%+ בהתבסס על ניתוח ציטומטריית זרימה (איור ...

Watch this Scientific Journal Video about Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay at JoVE.com

Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay

פרוטוקול זה מפרט את הכנת CLON-G להארכת תוחלת החיים של נויטרופילים ליותר מ-5 ימים ומספק הליך אמין להערכת מוות נויטרופילים באמצעות ציטומטריית זרימה ומיקרוסקופ פלואורסצנטי קונפוקלי.

הארכת תוחלת החיים של נויטרופילים עם CLON-G ובדיקת מוות ספונטני במבחנה

The average lifespan of a neutrophil is less than 24 h, which limits basic research on neutrophils and the application of neutrophil studies. Our previous ...

הפרוטוקול שלנו מספק תווך קוקטייל להארכת תוחלת החיים של נויטרופילים ליותר מחמישה ימים מבלי לפגוע בתפקודי הנויטרופילים. הוא מציע גם דיאליזה חוץ גופית אמינה עבור נויטרופילים. טיפול CLON-G מרחיב את האפשרויות של שימור נויטרופילים, שינוע ומניפולציה גנטית, אשר יכולים להאיץ את המחקר בקהילת הנויטרופילים.כדי להתחיל, להכין את המדיום הבסיסי על ידי הוספת RPMI 1640 FBS ו pen-strep לצינור 50 מיליליטר. במקביל, הפשירו את כל פתרונות המלאי של רכיבי CLON-G על קרח. לאחר מכן לדלל HSP 70 ו 200 מיקרוגרם למיליליטר של G-CSF במדיום הבסיסי.מעבירים 976 מיקרוליטר של מדיום בסיסי לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. לשם כך, הוסף את רכיבי CLON-G להכנת מיליליטר אחד של 2x מדיום CLON-G כמתואר בכתב היד. לאחר מכן, הכינו את תרבית הנויטרופילים על ידי השעיית הנויטרופילים של העכבר המבודד בתווך הבסיסי.מוסיפים את מדיום CLON-G, ואחריו את המדיום הבסיסי ל-24 צלחות תרבית שאינן רקמות. לאחר מכן מוסיפים 100 מיקרוליטר של השעיית התא מוכן בעדינות צינור שלוש עד ארבע פעמים. לדגור על צלחת התרבית ב 37 מעלות צלזיוס עם אספקת 5% פחמן דו חמצני.לצבוע את נויטרופילים בתרבית עם cytospin ולנתח אותם באמצעות מיקרוסקופ אור. לניתוח ציטומטריית זרימה, הוסיפו מיליליטר אחד של תווך התא לתרבית תאי נויטרופיל שגדלה בן לילה. מערבבים את מדיום תרבית התאים על ידי פיפטציה עדינה חמש עד שבע פעמים ומעבירים 100 מיקרוליטר של תערובת זו לצינור ציטומטריית זרימה בנקודות הזמן הרצויות.במקביל, מערבלים את חרוזי הספירה ואת הפיפט 10 מיקרוליטר של תמיסת חרוזים לאותו ציטומטריית זרימה ציטומטריה המכילה תווך תא. הוסיפו 10 מיקרוליטר של תערובת צביעה מוכנה מראש לצינור ציטומטריית זרימה זה ודגרו במשך חמש דקות במקרר תחת רדת החשיכה. לאחר מכן להוסיף 100 מיקרוליטר של מלוחים לצינור ולערבב היטב עבור הפצה שווה של ספירת חרוזים ותאים.לבסוף, בצע את ניתוח ציטומטריית הזרימה של תרחיף התא כמתואר בכתב היד של הטקסט. לבדיקת תמונות פלואורסצנטיות, יש להוסיף שני מיליליטר של תרחיף תאים לכל לוחית קונפוקלית ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני. בינתיים, להמיס גרם אחד של סידן כלורי ב 45 מיליליטר של מלוחים ולסנן אותו עם יחידת סינון 0.2 מיקרומטר.הסר בעדינות את הצלחת הקונפוקלית בנקודת הזמן הנדרשת. לצבוע את התאים עם 10 מיקרוליטר של FITC-Annexin-V, PI וסידן כלורי במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי קונפוקלי, ללכוד את התמונות באמצעות הערוצים הרצויים.במחקר הנוכחי, המורפולוגיה של נויטרופילים לא הושפעה בתווך CLON-G גם לאחר חמישה ימים. יתר על כן, פנוטיפים פקס הדגימו תאים שלמים לאחר הטיפול. ניתוח ציטומטריית הזרימה הראה אוכלוסייה חיובית של נויטרופילים לא מטופלים בנספח-V ואובדן האוכלוסייה יכול להיות בגלל אתילן דיאמין חומצה טטראצטית בתווך התא.עם זאת, הכדאיות של נויטרופילים שטופלו ב-CLON-G לאחר 24 שעות הייתה בערך יותר מ-90%מבחני התמונה הפלואורסצנטית אישרו גם את הכדאיות התאית של נויטרופילים שטופלו ב-CLON-G. הנויטרופילים שגודלו בתווך הבסיסי במשך 24 שעות הראו תאים נפוחים וייתכן שאובדן התאים האלה נבע מטלטול או פיפטינג של הלוח הקונפוקלי. ריכוזים והשפעות של תרכובת CLON-G יכולים להשפיע באופן משמעותי על בדיקות נויטרופילים.אם הדבר אפשרי, הימנעו מאפנון שלהם. חקירות נויטרופילים הן מייגעות, יקרות ומוגבלות מאוד ביישום קליני בשל תוחלת החיים הקצרה שלהן. שיטה זו מתגברת חלקית על מכשולים אלה.

Research

JoVE Journal

Biology

Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Proboscis Extension Response PER Assay in Drosophila

תגובת חוטם הרחבה (PER) Assay ב תסיסנית

Proboscis extension response (PER) is a taste behavior assay that has been used in flies as well as in honeybees.
On the surface of the fly's mouth ...

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

במבחנה Invasion FluoroBlok גידול Assay

The hallmark of metastatic cells is their ability to invade through the basement membrane and migrate to other parts of the body. Cells must be able to ...

A &#946;-glucuronidase (GUS) Based Cell Death Assay

A ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase GUS Based Cell Death Assay

Β-glucuronidase (גאס) נייד מבוסס מוות Assay

We have developed a novel transient plant expression system that simultaneously expresses the reporter gene, &beta;-glucuronidase (GUS), with putative ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

מדידה של תוחלת חיים ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Isolation of Native Soil Microorganisms with Potential for Breaking Down Biodegradable Plastic Mulch Films Used in Agriculture

בידוד של מיקרואורגניזמים באדמה אינדיאני עם פוטנציאל לפירוק סרטים מאלצים פלסטיק מתכלים המשמש בחקלאות

Fungi native to agricultural soils that colonized commercially available biodegradable mulch (BDM) films were isolated and assessed for potential to ...

In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

במבחנה SUMOylation Assay ללמוד סומו E3 ליגאז פעילות

Small ubiquitin-like modifier (SUMO) modification is an important post-translational modification (PTM) that mediates signal transduction primarily ...

Optimized Scratch Assay for In Vitro Testing of Cell Migration with an Automated Optical Camera

Optimized Scratch Assay for In Vitro Testing of Cell Migration with an Automated Optical Camera

אופטימיזציה Assay מאפס במבחנה בדיקה של נדידת תאים עם מצלמה אופטית אוטומטית

Cell migration is an important process that influences many aspects of health, such as wound healing and cancer, and it is, therefore, crucial for ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

הדמיה הידבקות מולקולרית בתא מתגלגל על ידי הידבקות טביעת רגל אסאי

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Histology Basics and Cell Death Detection in Honeybee Tissue

יסודות ההיסטולוגיה וזיהוי מוות תאי ברקמת דבורת הדבש

Honeybees (Apis mellifera L.) inside the hive (nurse workers and other hive bees) and outside the hive (foragers) are exposed to climate and weather ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

זיהוי בזמן אמת של ייצור מיני חמצן תגובתי בתגובה חיסונית באורז עם בדיקת כימילומינסנציה

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...