Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Denne undersøgelse blev delvis finansieret af Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001; Governo do Estado do Amazonas med ressourcer fra Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Forfatterne takker programmet for teknologisk udvikling i værktøjer til sundhed PDTIS-FIOCRUZ for brug af dets faciliteter.

Se materialefortegnelsen for detaljer vedrørende alle materialer, instrumenter og software, der anvendes i denne protokol.
1. Indstilling af flowcytometri
<ol><li>Justering af optiske parametre for flowcytometer koblet til en computer<ol><li>Log ind på Cytometer-softwaren.</li>
		<li>Fra softwarearbejdsområdet skal du vælge Cytometer | Start og vent et par minutter | Ren tilstand | Sid væsker. BEMÆRK: Luftbobler og ...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Traditionelle metoder, såsom kimtælling af kolonier, er ikke kun tidskrævende, men har også brug for levedygtige celler og tillader ikke kvantificering af inaktiverede sporer5. Petroff-Hausser-kammeret er en alternativ metode, men det kræver en erfaren mikroskopist at udføre den. Flowcytometri har vist sig at være et nyttigt alternativ til dette formål.
Genovese et al.12 beskrev brugen af flowcytometri til kvantificering af levedygtige ce...

Bacillus subtilis er en stavformet, grampositiv bakterie, der er i stand til at producere hvilende sporer, når miljøforholdene ikke tillader cellevækst1. Sporer er ekstremt stabile celleformer og de af flere arter, herunder B. subtilis, er meget udbredt som probiotika til mennesker og dyrbrug 2. På grund af dets resistens og sikkerhedsegenskaber er sporen af B. subtilis, der viser heterologe proteiner, blevet foreslået som en slimhindeadjuvans, et vaccineafgivelsessystem og en enzymimmobiliseringsplatform 3,4.
For at opnå sporer fra B. subtilis er det nødvendigt at udsætte det for næringsstofmangel ved hjælp af et specielt kulturmedium. Efter opnåelse og rensning af disse sporer skal man kvantificere dem for at forbedre testeffektiviteten 5,6. Således anvendes visse metoder til at analysere koncentrationen af de opnåede sporer. Pladetælling og et Petroff-Hausser-kammer, også kendt som et tællekammer, kan bruges. Sidstnævnte blev oprindeligt udviklet til at bestemme koncentrationen af blodlegemer; Det er dog muligt at bruge det inden for mikrobiologi til sporetælling 7,8. På trods af at det er standardmetoden, der bruges til celletælling, er læsning besværlig, da denne metode er helt manuel, og dens nøjagtighed afhænger af operatørens erfaring.
Flowcytometribaserede (FC) analyser er tidligere blevet foreslået som hurtige, pålidelige og specifikke tilgange til påvisning af mærkede celler af Bacillus spp. Anvendelsen af flowcytometritælleperler har garanteret reproducerbarhed i celletælling i rutineundersøgelser (absolut antal CD4- og CD8 T-lymfocytter) og i udviklingen af forskning, der involverer partikler, der kan detekteres og tælles ved hjælp af flowcytometri9. Godjafrey og Alsharif foreslog brugen af tælleperler til FC-kvantificering af umærkede sporer10. Anvendelsen af flowcytometri blev beskrevet til monitorering af sporulation i Bacillus spp. via mærkning af spore-DNA'et 10,11,12,13. Endnu en undersøgelse brugte FC til at evaluere mængden af fluorescerende mærkede proteiner på sporeoverfladen15.
Denne undersøgelse søgte at anvende kommercielle tælleperler for at sikre en standard for reproducerbarhed med hensyn til begivenhedstælling ved hjælp af flowcytometri. Heri foreslår vi brugen af tælleperler til celletælling i FC for at forfine sporetælling og evaluere koblingseffektiviteten af fluorescerende mærkede antistoffer på sporeoverfladen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Sporerne af Bacillus subtilis er allerede blevet foreslået til forskellige bioteknologiske og immunologiske anvendelser; Der er imidlertid et stigende behov for udvikling af metoder, der forbedrer påvisningen af antigener, der er immobiliseret på overfladen af sporer sammen med deres kvantificering. Flowcytometribaserede analyser er tidligere blevet foreslået som hurtige, pålidelige og specifikke tilgange til påvisning af mærkede celler af B. subtilis. Heri foreslår vi brugen af flowcytometri til at evaluere displayeffektiviteten af et fluorescerende antistof (FA) på overfladen af sporen og kvantificere antallet af sporer ved hjælp af tælleperler.
Til dette brugte vi ethidiumbromid som en DNA-markør og et allophycocyanin (APC) -mærket antistof, som var koblet til sporerne, som en overflademarkør. Kvantificeringen af sporer blev udført ved hjælp af tælleperler, da denne teknik demonstrerer høj nøjagtighed i påvisning af celler. De mærkede sporer blev analyseret ved hjælp af et flowcytometer, som bekræftede koblingen. Som et resultat blev det demonstreret, at DNA-mærkning forbedrede nøjagtigheden af kvantificering ved flowcytometri til påvisning af spirede sporer. Det blev observeret, at ethidiumbromid ikke var i stand til at mærke sovende sporer; Denne teknik giver imidlertid en mere præcis bestemmelse af antallet af sporer med fluorescerende protein koblet til deres overflade, hvilket hjælper med udviklingen af undersøgelser, der fokuserer på brugen af sporer som en bioteknologisk platform i forskellige applikationer.

I autoklaverede sporeprøver (AS) blev 2 × 103 sporer/μl og 1 × 103 sporer/μl påvist ved hjælp af henholdsvis tælleperler og Petroff-Hausser-metoden (figur 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Figur 1: Generel ordning for kvantificering af sporer. (A) Sporer mærket med EtBr og (B</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Denne protokol fokuserer på brugen af flowcytometri og tælleperler til kvantificering af bakteriesporer mærket med ethidiumbromid. Metoden er også effektiv til at analysere den kovalente kobling af proteiner på overfladen af intakte sporer.

Forbedring af Bacillus subtilis sporetælling og etiketanalyse i flowcytometri

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Celletæller af Bacillus subtilis sporer ved hjælp af traditionelle metoder kan være en besværlig opgave, da disse metoder kan være helt manuelle og deres nøjagtigheder afhængigt af operatørens erfaring. Denne protokol gør det muligt at opregne sovende og spirende sporer. Derudover gør teknikken det også muligt at bestemme procentdelen af coping af fluorescerende proteiner på overfladen.I betragtning af opsætningstrinnet, der er til stede i denne protokol, demonstrerer visionen med faciliteter og den tekniske forståelse og detaljerne i pleje i denne udførelse. Begynd med at logge ind på cytometersoftwaren. I softwarearbejdsområdet skal du vælge Cytometer efterfulgt af Fluidic Startup.Vælg derefter Rengøringstilstande. Og til sidst skal du starte SIT Flush. Tag 50 mikroliter autoklavesporer og inkuber dem med ethidiumbromid ved en fortyndingsfaktor på 0,05 volumenprocent i 30 minutter beskyttet mod lys.Sporerne vaskes tre gange med PBS ved centrifugering ved 17.949 G i 10 minutter og resuspendering i PBS. Derefter tilsættes 10 mikroliter perler efter producentens anbefalinger til fortynding og analyserer prøven ved hjælp af et flowcytometer. Definer gating-strategien baseret på partiklernes morfometriske og fluorescensegenskaber ved hjælp af den negative kontrol som reference.Bland derefter røret forsigtigt. Fastgør den til flowcytometersonden, og klik på Erhverv. For at indstille lasereffekten skal du gå til parameterfanen i cytometervinduet, justere fremadspredningen til 375 og sidespredningen til 275.Vælg derefter tærskelfanen, og indstil den til 500. Derefter analyseres den farvestoffri prøve, der kun indeholder sporer for at eliminere autofluorescens. På parameterfanen skal du justere filterdetektoren tre's spændinger til 603 og filterdetektor fems spændinger til 538 for at skelne mellem negative og positive populationer ved hjælp af fluorescens i kontrollerne.Klik derefter på Kompensation, og indstil filterdetektor 5 x 3 opsætningsforskydning til en. For at konfigurere enheden til erhvervelse skal du vælge Eksperiment, vælge eksperimentlayoutet og indstille erhvervelsen til 30.000 hændelser. Efter justering af parametrene skal du hente data for de prøver, der er mærket og indeholder perler i flowcytometeret.Centrifuger 50 mikroliter sporer ved 17.949 G i 10 minutter. Derefter suspenderes sporerne igen ved hjælp af 25 mikroliter 1-ethyl-3-3-dimethylaminopropylcarbodiimid og inkuberes i 15 minutter. Derefter tilsættes 25 mikroliter N-hydroxysulfosuccinimid i en koncentration på 50 millimolar til sporesuspensionen.Inkuber sporesuspensionen ved stuetemperatur i 30 minutter. Sporerne vaskes tre gange med PBS ved centrifugering som vist tidligere. Tilsæt fluorescerende protein til prøverne og inkuber natten over ved 15 grader Celsius.Tilsæt 10 milligram pr. Milliliter ethidiumbromid fortyndet ved 1 til 50, og lad derefter prøverne ligge på is i en time, beskyttet mod lys. Efter vask af sporerne og definition af portene som vist tidligere, skal du ændre parametrene for filterdetektor tre på x-aksen og filterdetektor fem på Y-aksen i prikplottet. Tælleperlemetoden detekterede to gange 10 til den tredje sporer pr. mikroliter i autoklavesporeprøver.En ethidiumbromidfarvning af autoklavesporeprøver viste højere gennemsnitlig fluorescensintensitet end farvning af ikke-autoklaverede sporer, hvilket indikerer større farvning af genetisk materiale. Autoklavesporeoverfladen kombineret med APC-mærket, anti-humant interleukin 10-antistof viste større koblingseffektivitet sammenlignet med de ikke-autoklaverede sporer. Tilstedeværelsen af sporer, der er gennemtrængelige for ethidiumbromid, indikerede den mulige tilstedeværelse af spirede sporer i den samlede befolkning.Baseret på flowcytometrianalyserne blev det observeret, at det fluorescerende antistof viste en højere procentdel af kobling med de sovende sporer sammenlignet med de spirede. Da koncentrationen af fluorescerende antistoffer steg, blev der desuden observeret en stigning i procentdelen af koblede sporer og gennemsnitlig fluorescensintensitet. Det er vigtigt at udføre en grundig homogenisering af de nuværende perler for at sikre præcise aflæsninger gennem flowcytometri og nøjagtig tælling af sporer.Standardisering af koncentrationen af antigener bundet til spore, canadiske undersøgelser analyserer brugen af spore som vaccineantistoffer.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifikation af fedtsyrer i<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Rekombinant Protein Ekspression, Krystallisering og Biofysiske Studier af a<em&gt; Bacillus</em&gt; -konserveret nucleotidpyrophosphorylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Forberedelse af Keratin hydrolysat fra kylling fjer og dens anvendelse i kosmetik

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Korrekturlæsning og DNA reparation analyse ved hjælp af Single Nucleotide udvidelse og MALDI-TOF-massespektrometri analyse

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse af proteinfoldning, Transport og nedbrydning i levende celler af radioaktivt puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Undersøgelse af metabolismen af seks systemiske insekticider i en nyetableret celle affjedrings kultur afledt af te (Camellia sinensis L.) Blade

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Label-fri Immunoprecipitation massespektrometri workflow for storstilet nuklear Interactome profilering

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Trinvis doseringprotokol for øget overførselstid i label-free impedansbaserede GPCR-analyser

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA-glycosylaseassay ved matrixassisteret laserdesorption/ionisering Time-of-flight Massespektrometrianalyse

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Analyse af interaktionen mellem fluorescerende mærkede proteiner med kunstige fosfolipidmikrovesikler ved hjælp af kvantitativ flowcytometri

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...