Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Deze studie werd gedeeltelijk gefinancierd door de Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001; Governo do Estado do Amazonas met middelen van Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). De auteurs danken het Programma voor Technologische Ontwikkeling in Hulpmiddelen voor Gezondheid PDTIS-FIOCRUZ voor het gebruik van zijn faciliteiten.

Zie de Materiaaltabel voor details met betrekking tot alle materialen, instrumenten en software die in dit protocol worden gebruikt.
1. Instelling van de flowcytometrie
<ol><li>Uitlijning van optische parameters van flowcytometer gekoppeld aan een computer<ol><li>Log in op de Cytometer-software.</li>
		<li>Selecteer in de softwarewerkruimte de optie Cytometer | Opstarten en een paar minuten wachten | Schone modus | Zit vloeistoffen</...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Traditionele methoden, zoals het tellen van kolonies, zijn niet alleen tijdrovend, maar vereisen ook levensvatbare cellen en maken het niet mogelijk om geïnactiveerde sporen te kwantificeren5. De Petroff-Hausser-kamer is een alternatieve methodologie, maar vereist een ervaren microscopist om deze uit te voeren. Flowcytometrie is hiervoor een nuttig alternatief gebleken.
Genovese et al.12 beschreven het gebruik van flowcytometrie voor de kwantifi...

Bacillus subtilis is een staafvormige, grampositieve bacterie die in staat is om slapende sporen te produceren wanneer de omgevingsomstandigheden geen celgroeitoelaten1. Sporen zijn uiterst stabiele celvormen en die van verschillende soorten, waaronder B. subtilis, worden veel gebruikt als probiotica voor menselijk en dierlijk gebruik. Vanwege zijn resistentie- en veiligheidseigenschappen is de spore van B. subtilis, die heterologe eiwitten vertoont, voorgesteld als een mucosale adjuvans, een vaccinafgiftesysteem en een enzym-immobilisatieplatform 3,4.
Om sporen van B. subtilis te verkrijgen, is het noodzakelijk om het bloot te stellen aan nutriëntendeprivatie met behulp van een speciaal kweekmedium. Na het verkrijgen en zuiveren van deze sporen, moet men ze kwantificeren om de testefficiëntie te verbeteren 5,6. Zo worden bepaalde methoden toegepast om de concentratie van de verkregen sporen te analyseren. Er kan gebruik worden gemaakt van het tellen van platen en een Petroff-Hausser-kamer, ook wel telkamer genoemd. De laatste is oorspronkelijk ontwikkeld om de concentratie van bloedcellen te bepalen; Het is echter mogelijk om het te gebruiken op het gebied van microbiologie voor het tellen van sporen 7,8. Ondanks dat het de standaardmethode is die wordt gebruikt voor het tellen van cellen, is het lezen arbeidsintensief omdat deze methode volledig handmatig is en de nauwkeurigheid ervan afhangt van de ervaring van de operator.
Op flowcytometrie gebaseerde (FC) analyses zijn eerder voorgesteld als snelle, betrouwbare en specifieke benaderingen voor het detecteren van gelabelde cellen van Bacillus spp. Het gebruik van flowcytometrie telparels heeft de reproduceerbaarheid gegarandeerd bij het tellen van cellen bij routineonderzoeken (absoluut aantal CD4- en CD8 T-lymfocyten) en bij de ontwikkeling van onderzoek met deeltjes die kunnen worden gedetecteerd en geteld met behulp van flowcytometrie9. Godjafrey en Alsharif suggereerden het gebruik van telkralen voor FC-kwantificering van niet-gelabelde sporen10. Het gebruik van flowcytometrie werd beschreven voor de monitoring van sporulatie in Bacillus spp. via het labelen van het sporen-DNA 10,11,12,13. Nog een andere studie gebruikte FC om de hoeveelheid fluorescerend gelabelde eiwitten op het sporenoppervlak te evalueren15.
Deze studie was gericht op het gebruik van commerciële telkralen om een standaard van reproduceerbaarheid te garanderen met betrekking tot het tellen van gebeurtenissen met behulp van flowcytometrie. Hierin suggereren we het gebruik van telkralen voor het tellen van cellen in FC om de sporentelling te verfijnen en de koppelingsefficiëntie van fluorescerend gelabelde antilichamen op het sporenoppervlak te evalueren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

De sporen van Bacillus subtilis zijn al voorgesteld voor verschillende biotechnologische en immunologische toepassingen; Er is echter een toenemende behoefte aan de ontwikkeling van methodologieën die de detectie van geïmmobiliseerde antigenen op het oppervlak van sporen verbeteren, samen met hun kwantificering. Op flowcytometrie gebaseerde analyses zijn eerder voorgesteld als snelle, betrouwbare en specifieke benaderingen voor het detecteren van gelabelde cellen van B. subtilis. Hierin stellen we het gebruik van flowcytometrie voor om de weergave-efficiëntie van een fluorescerend antilichaam (FA) op het oppervlak van de spore te evalueren en het aantal sporen te kwantificeren met behulp van telkralen. 
Hiervoor gebruikten we ethidiumbromide als DNA-marker en een allophycocyanine (APC)-gelabeld antilichaam, dat aan de sporen was gekoppeld, als oppervlaktemarker. De kwantificering van sporen werd uitgevoerd met behulp van telkralen, aangezien deze techniek een hoge nauwkeurigheid aantoont bij de detectie van cellen. De gelabelde sporen werden geanalyseerd met behulp van een flowcytometer, die de koppeling bevestigde. Als gevolg hiervan werd aangetoond dat DNA-etikettering de nauwkeurigheid van kwantificering door flowcytometrie verbeterde, voor de detectie van ontkiemde sporen. Er werd waargenomen dat ethidiumbromide niet in staat was om slapende sporen te labelen; Deze techniek zorgt echter voor een nauwkeurigere bepaling van het aantal sporen met fluorescerend eiwit gekoppeld aan hun oppervlak, wat helpt bij de ontwikkeling van studies die zich richten op het gebruik van sporen als biotechnologisch platform in verschillende toepassingen.

In geautoclaveerde sporenmonsters (AS) werden respectievelijk 2 × 103 sporen/μl en 1 × 103 sporen/μl gedetecteerd met behulp van telkralen en de Petroff-Hausser-methode (Figuur 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Figuur 1: Algemeen schema voor de kwantificering van sporen. (A) Sporen gelabeld met E...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Dit protocol richt zich op het gebruik van flowcytometrie en het tellen van kralen om bacteriële sporen te kwantificeren die zijn gelabeld met ethidiumbromide. De methode is ook efficiënt voor het analyseren van de covalente koppeling van eiwitten op het oppervlak van intacte sporen.

Verbetering van Bacillus subtilis sporentelling en labelanalyse in flowcytometrie

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Het verzamelen van sporen van Bacillus subtilis met behulp van traditionele methoden kan een arbeidsintensieve taak zijn, aangezien deze methoden volledig handmatig kunnen zijn en hun nauwkeurigheid afhankelijk is van de ervaring van de operator. Dit protocol maakt het mogelijk om slapende en ontkiemende sporen te inventariseren. Bovendien maakt de techniek het ook mogelijk om het percentage coping van fluorescerende eiwitten op het oppervlak te bepalen.Gezien de installatiestap die in dit protocol aanwezig is, demonstreert de visie met faciliteiten en het technische begrip en de gedetailleerdheid van zorg in deze uitvoering. Begin met inloggen op de cytometersoftware. Selecteer in de softwarewerkruimte de optie Cytometer, gevolgd door Fluidic Startup.Kies vervolgens Reinigingsmodi. En tot slot, start SIT Flush. Neem 50 microliter autoclaafsporen en incubeer ze met ethidiumbromide met een verdunningsfactor van 0,05% volume gedurende 30 minuten, beschermd tegen licht.Was de sporen driemaal met PBS door gedurende 10 minuten te centrifugeren bij 17.949 g en opnieuw te suspenderen in PBS. Voeg vervolgens 10 microliter korrels toe volgens de aanbevelingen van de fabrikant voor verdunning en analyseer het monster met behulp van een flowcytometer. Definieer de poortstrategie op basis van de morfometrische en fluorescentiekenmerken van de deeltjes met behulp van de negatieve controle als referentie.Meng vervolgens de tube voorzichtig. Bevestig het aan de flowcytometersonde en klik op Verwerven. Om het laservermogen in te stellen, gaat u naar het tabblad Parameters in het cytometervenster, stelt u de voorwaartse verstrooiing in op 375 en de zijverstrooiing op 275.Selecteer vervolgens het tabblad Drempelwaarde en stel deze in op 500. Analyseer vervolgens het kleurstofvrije monster dat alleen sporen bevat om autofluorescentie te elimineren. Stel op het tabblad Parameters de spanningen van de filterdetector drie in op 603 en de spanningen van filterdetector vijf op 538 om onderscheid te maken tussen negatieve en positieve populaties met behulp van fluorescentie in de controles.Klik vervolgens op Compensatie en stel de 5 bij 3 ingestelde setoffset van de filterdetector in op één. Als u het apparaat wilt configureren voor acquisitie, selecteert u Experiment, kiest u de experimentlay-out en stelt u de acquisitie in op 30.000 gebeurtenissen. Nadat u de parameters hebt aangepast, verkrijgt u gegevens voor de monsters die zijn gelabeld en kralen bevatten in de flowcytometer.Centrifugeer 50 microliter sporen bij 17.949 G gedurende 10 minuten. Vervolgens suspendeer je de sporen opnieuw met 25 microliter 1-ethyl-3-3-dimethylaminopropylcarbodiimide en incubeer je ze gedurende 15 minuten. Voeg daarna 25 microliter N-hydroxysulfosuccinimide in een concentratie van 50 millimolair toe aan de sporensuspensie.Incubeer de sporensuspensie gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Was de sporen driemaal met PBS door te centrifugeren zoals eerder getoond. Voeg fluorescerend eiwit toe aan de monsters en incubeer een nacht bij 15 graden Celsius.Voeg 10 milligram per milliliter ethidiumbromide verdund op 1 tot 50 toe en laat de monsters vervolgens een uur op ijs liggen, beschermd tegen licht. Na het wassen van de sporen en het definiëren van de poorten zoals eerder weergegeven, wijzigt u de parameters voor filterdetector drie op de x-as en filterdetector vijf op de Y-as van de dotplot. De telkralenmethode detecteerde twee keer 10 tot de derde sporen per microliter in autoclaafsporenmonsters.Een ethidiumbromidekleuring van autoclaafsporenmonsters vertoonde een hogere gemiddelde fluorescentie-intensiteit dan de kleuring van niet-geautoclaveerde sporen, wat wijst op een grotere kleuring van genetisch materiaal. Het autoclaafsporenoppervlak, in combinatie met APC-gelabeld, anti-humaan interleukine 10-antilichaam, vertoonde een grotere koppelingsefficiëntie in vergelijking met de niet-geautoclaveerde sporen. De aanwezigheid van sporen die doorlaatbaar zijn voor ethidiumbromide duidde op de mogelijke aanwezigheid van ontkiemde sporen in de totale populatie.Op basis van de flowcytometrie-analyses werd waargenomen dat het fluorescerende antilichaam een hoger percentage koppeling met de slapende sporen vertoonde in vergelijking met de ontkiemde. Bovendien, naarmate de concentratie van fluorescerende antilichamen toenam, werd een toename van het percentage gekoppelde sporen en de gemiddelde fluorescentie-intensiteit waargenomen. Het is belangrijk om een grondige homogenisatie van de huidige korrels uit te voeren om nauwkeurige metingen door middel van flowcytometrie en nauwkeurige telling van sporen te garanderen.Door de concentratie van antigenen die aan sporen zijn gehecht te standaardiseren, analyseren Canadese studies het gebruik van sporen als vaccinantilichamen.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identificatie van vetzuren in<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Proteïne Expressie, Kristallisatie en Biofysische Studies van a<em&gt; Bacillus</em&gt; -conserveerd nucleotide pyrophosphorylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Voorbereiding van keratine hydrolysaat van kippenveren en haar toepassing in cosmetica

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Proeflezen en DNA Repair Assay met behulp van één Nucleotide uitbreiding en MALDI-TOF massa spectrometrie analyse

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse van de vouwing van eiwitten, vervoer en afbraak in levende cellen door radioactieve Pulse Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Studie over het metabolisme van zes systemische insecticiden in een nieuw opgerichte cel schorsing cultuur afgeleid van thee (Camellia sinensis L.) Bladeren

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Label-vrije Immunoprecipitation massaspectrometrie workflow voor grootschalige nucleaire interactome profilering

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Stepwise Dosing Protocol voor verhoogde doorvoer in label-vrije impedance-based GPCR-tests

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glycosylase Assay door Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Analyse van de interactie van fluorescerende gelabelde eiwitten met kunstmatige fosfolipide microvesicles met behulp van kwantitatieve flowcytometrie

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...