Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Diese Studie wurde zum Teil durch den Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001 finanziert; Governo do Estado do Amazonas mit Mitteln der Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Die Autoren danken dem Programm für die technologische Entwicklung von Instrumenten für die Gesundheit PDTIS-FIOCRUZ für die Nutzung seiner Einrichtungen.

In der Materialtabelle finden Sie Details zu allen Materialien, Instrumenten und Software, die in diesem Protokoll verwendet werden.
1. Einstellung der Durchflusszytometrie
<ol><li>Abgleich der optischen Parameter des an einen Computer gekoppelten Durchflusszytometers<ol><li>Melden Sie sich bei der Cytometer-Software an.</li>
		<li>Wählen Sie im Arbeitsbereich der Software die Option Zytometer | Starten und einige Minuten warten | S...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Herkömmliche Methoden, wie z.B. die Plattenzählung von Kolonien, sind nicht nur zeitaufwändig, sondern benötigen auch lebensfähige Zellen und erlauben keine Quantifizierung von inaktivierten Sporen5. Die Petroff-Hausser-Kammer ist eine alternative Methode, aber sie erfordert einen erfahrenen Mikroskopiker, um sie durchzuführen. Die Durchflusszytometrie hat sich hierfür als sinnvolle Alternative erwiesen.
Genovese et al.12 beschrieben die V...

Bacillus subtilis ist ein stäbchenförmiges, grampositives Bakterium, das in der Lage ist, ruhende Sporen zu produzieren, wenn die Umweltbedingungen kein Zellwachstum zulassen1. Sporen sind extrem stabile Zellformen, und die Sporen mehrerer Arten, einschließlich B. subtilis, werden häufig als Probiotika für den menschlichen und tierischen Gebrauch verwendet2. Aufgrund ihrer Resistenz- und Sicherheitseigenschaften wurde die Spore von B. subtilis, die heterologe Proteine aufweist, als Schleimhautadjuvans, als Impfstoffverabreichungssystem und als Enzymimmobilisierungsplattform vorgeschlagen 3,4.
Um Sporen von B. subtilis zu erhalten, ist es notwendig, sie mit einem speziellen Nährmedium einem Nährstoffentzug auszusetzen. Nach der Gewinnung und Reinigung dieser Sporen müssen sie quantifiziert werden, um die Testeffizienz zu verbessern 5,6. Daher werden bestimmte Methoden angewendet, um die Konzentration der erhaltenen Sporen zu analysieren. Es kann eine Plattenzählung und eine Petroff-Hausser-Kammer, auch Zählkammer genannt, verwendet werden. Letzteres wurde ursprünglich entwickelt, um die Konzentration von Blutzellen zu bestimmen; Es ist jedoch möglich, es im Bereich der Mikrobiologie für die Sporenzählung zu verwenden 7,8. Obwohl es sich um die Standardmethode für die Zellzählung handelt, ist das Ablesen mühsam, da diese Methode vollständig manuell ist und ihre Genauigkeit von der Erfahrung des Bedieners abhängt.
Durchflusszytometrie-basierte (FC) Analysen wurden bereits als schnelle, zuverlässige und spezifische Ansätze zum Nachweis markierter Zellen von Bacillus spp. vorgeschlagen. Die Verwendung von Durchflusszytometrie-Zählkügelchen hat die Reproduzierbarkeit bei der Zellzählung bei Routineuntersuchungen (absolute Zählung von CD4- und CD8-T-Lymphozyten) und bei der Entwicklung von Forschungsarbeiten mit Partikeln gewährleistet, die mit der Durchflusszytometrie nachgewiesen und gezählt werden können9. Godjafrey und Alsharif schlugen die Verwendung von Zählkügelchen zur FC-Quantifizierung von unmarkierten Sporen vor10. Der Einsatz der Durchflusszytometrie zur Überwachung der Sporulation bei Bacillus spp. durch Markierung der Sporen-DNA 10,11,12,13. In einer weiteren Studie wurde FC verwendet, um die Menge an fluoreszenzmarkierten Proteinen auf der Sporenoberfläche zu bewerten15.
Ziel dieser Studie war es, kommerzielle Zählkügelchen zu verwenden, um einen Standard der Reproduzierbarkeit in Bezug auf die Ereigniszählung mittels Durchflusszytometrie zu gewährleisten. In dieser Arbeit schlagen wir die Verwendung von Zählkügelchen für die Zellzählung in FC vor, um die Sporenzählung zu verfeinern und die Kopplungseffizienz von fluoreszenzmarkierten Antikörpern auf der Sporenoberfläche zu bewerten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Die Sporen von Bacillus subtilis wurden bereits für verschiedene biotechnologische und immunologische Anwendungen vorgeschlagen; Es besteht jedoch ein zunehmender Bedarf an der Entwicklung von Methoden, die den Nachweis von Antigenen, die auf der Oberfläche von Sporen immobilisiert sind, sowie deren Quantifizierung verbessern. Auf Durchflusszytometrie basierende Analysen wurden bereits als schnelle, zuverlässige und spezifische Ansätze zum Nachweis markierter Zellen von B. subtilis vorgeschlagen. In dieser Arbeit schlagen wir die Verwendung der Durchflusszytometrie vor, um die Anzeigeeffizienz eines fluoreszierenden Antikörpers (FA) auf der Oberfläche der Spore zu bewerten und die Anzahl der Sporen mit Hilfe von Zählkügelchen zu quantifizieren. 
Dazu verwendeten wir Ethidiumbromid als DNA-Marker und einen Allophycocyanin (APC)-markierten Antikörper, der an die Sporen gekoppelt war, als Oberflächenmarker. Die Quantifizierung der Sporen wurde mit Hilfe von Zählkügelchen durchgeführt, da diese Technik eine hohe Genauigkeit bei der Detektion von Zellen aufweist. Die markierten Sporen wurden mit einem Durchflusszytometer analysiert, was die Kopplung bestätigte. Als Ergebnis konnte gezeigt werden, dass die DNA-Markierung die Genauigkeit der Quantifizierung mittels Durchflusszytometrie für den Nachweis von gekeimten Sporen verbessert. Es wurde beobachtet, dass Ethidiumbromid nicht in der Lage war, ruhende Sporen zu markieren; Diese Technik ermöglicht jedoch eine genauere Bestimmung der Anzahl der Sporen mit fluoreszierendem Protein, die an ihre Oberfläche gekoppelt sind, und hilft so bei der Entwicklung von Studien, die sich auf die Verwendung von Sporen als biotechnologische Plattform in verschiedenen Anwendungen konzentrieren.

In autoklavierten Sporenproben (AS) wurden 2 × 103 Sporen/μl und 1 × 103 Sporen/μl mit Hilfe von Zählkügelchen bzw. der Petroff-Hausser-Methode nachgewiesen (Abbildung 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Abbildung 1: Allgemeines Schema zur Quantifizierung von Sporen. (A) Sporen, die mit EtBr mark...

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Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Dieses Protokoll konzentriert sich auf die Verwendung von Durchflusszytometrie und Zählperlen zur Quantifizierung von Bakteriensporen, die mit Ethidiumbromid markiert sind. Die Methode ist auch effizient, um die kovalente Kopplung von Proteinen auf der Oberfläche intakter Sporen zu analysieren.

Verbesserung der Bacillus subtilis-Sporenzählung und Markierungsanalyse in der Durchflusszytometrie

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Der Zellzähler von Bacillus subtilis-Sporen mit herkömmlichen Methoden kann eine mühsame Aufgabe sein, da diese Methoden vollständig manuell durchgeführt werden können und ihre Genauigkeit von der Erfahrung des Bedieners abhängt. Dieses Protokoll ermöglicht die Zählung von ruhenden und keimenden Sporen. Darüber hinaus ermöglicht die Technik auch die Bestimmung des prozentualen Anteils fluoreszierender Proteine auf ihrer Oberfläche.Angesichts des Einrichtungsschritts, der in diesem Protokoll enthalten ist, demonstriert die Vision mit den Einrichtungen und dem technischen Verständnis und den Details der Pflege in dieser Ausführung. Melden Sie sich zunächst bei der Zytometer-Software an. Wählen Sie im Arbeitsbereich der Software Zytometer und dann Fluidic Start aus.Wählen Sie dann Reinigungsmodi aus. Und schließlich initiieren Sie SIT Flush. Nehmen Sie 50 Mikroliter Autoklavsporen und inkubieren Sie sie mit Ethidiumbromid bei einem Verdünnungsfaktor von 0,05 Vol.-% für 30 Minuten vor Licht geschützt.Waschen Sie die Sporen dreimal mit PBS, indem Sie sie 10 Minuten lang bei 17,949 g zentrifugieren und wieder in PBS suspendieren. Als nächstes fügen Sie 10 Mikroliter Kügelchen gemäß den Empfehlungen des Herstellers zur Verdünnung hinzu und analysieren Sie die Probe mit einem Durchflusszytometer. Definieren Sie die Anschnittstrategie basierend auf den morphometrischen und Fluoreszenzeigenschaften der Partikel unter Verwendung der Negativkontrolle als Referenz.Dann die Tube vorsichtig mischen. Schließen Sie es an die Durchflusszytometersonde an und klicken Sie auf Erfassen. Um die Laserleistung einzustellen, gehen Sie auf die Registerkarte "Parameter" im Zytometerfenster, stellen Sie die Vorwärtsstreuung auf 375 und die Seitenstreuung auf 275 ein.Wählen Sie dann die Registerkarte Schwellenwert aus, und legen Sie ihn auf 500 fest. Analysieren Sie als Nächstes die farbstofffreie Probe, die nur Sporen enthält, um Autofluoreszenz zu eliminieren. Stellen Sie auf der Registerkarte "Parameter" die Spannungen des Filterdetektors drei auf 603 und die Spannungen des Filterdetektors fünf auf 538 ein, um mithilfe der Fluoreszenz in den Kontrollen zwischen negativen und positiven Populationen zu unterscheiden.Klicken Sie dann auf Kompensation und setzen Sie den Setup-Offset des Filterdetektors 5 x 3 auf eins. Um das Gerät für die Erfassung zu konfigurieren, wählen Sie Experiment aus, wählen Sie das Experimentlayout aus, und legen Sie die Erfassung auf 30.000 Ereignisse fest. Nachdem Sie die Parameter angepasst haben, erfassen Sie Daten für die Proben, die markiert sind und Kügelchen im Durchflusszytometer enthalten.Zentrifugieren Sie 50 Mikroliter Sporen bei 17.949 g für 10 Minuten. Anschließend werden die Sporen mit 25 Mikrolitern 1-Ethyl-3-3-dimethylaminopropylcarbodiimid resuspendiert und 15 Minuten lang inkubiert. Danach werden 25 Mikroliter N-Hydroxysulfosuccinimid in einer Konzentration von 50 Millimolar zur Sporensuspension gegeben.Die Sporensuspension 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren. Waschen Sie die Sporen dreimal mit PBS, indem Sie sie wie oben gezeigt zentrifugieren. Geben Sie fluoreszierendes Protein zu den Proben und inkubieren Sie über Nacht bei 15 Grad Celsius.Fügen Sie 10 Milligramm pro Milliliter Ethidiumbromid hinzu, das bei 1 bis 50 verdünnt ist, und lassen Sie die Proben dann eine Stunde lang lichtgeschützt auf Eis. Nachdem Sie die Sporen gewaschen und die Gates wie zuvor gezeigt definiert haben, ändern Sie die Parameter für den Filterdetektor drei auf der x-Achse und den Filterdetektor fünf auf der Y-Achse des Punktdiagramms. Die Methode der Zählperlen detektierte zwei mal 10 bis dritte Sporen pro Mikroliter in Autoklaven-Sporenproben.Eine Ethidiumbromid-Färbung von Autoklaven-Sporenproben zeigte eine höhere mittlere Fluoreszenzintensität als die Färbung von nicht autoklavierten Sporen, was auf eine stärkere Färbung des genetischen Materials hindeutet. Die Sporenoberfläche des Autoklaven, gekoppelt mit dem APC-markierten, anti-humanen Interleukin-10-Antikörper, zeigte im Vergleich zu den nicht autoklavierten Sporen eine höhere Kopplungseffizienz. Das Vorhandensein von Sporen, die für Ethidiumbromid durchlässig sind, deutete auf das mögliche Vorhandensein von gekeimten Sporen in der Gesamtpopulation hin.Basierend auf den durchflusszytometrischen Analysen konnte beobachtet werden, dass der fluoreszierende Antikörper im Vergleich zu den gekeimten Sporen einen höheren Prozentsatz der Kopplung mit den ruhenden Sporen aufwies. Darüber hinaus wurde mit zunehmender Konzentration von Fluoreszenzantikörpern ein Anstieg des Prozentsatzes der gekoppelten Sporen und der mittleren Fluoreszenzintensität beobachtet. Es ist wichtig, eine gründliche Homogenisierung der aktuellen Kügelchen durchzuführen, um präzise Messwerte durch Durchflusszytometrie und genaue Zählung der Sporen zu gewährleisten.Kanadische Studien standardisieren die Konzentration von Antigenen, die an die Sporen gebunden sind, und analysieren die Verwendung von Sporen als Impfantikörper.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifizierung von Fettsäuren in<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Forschung

Biochemie

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Rekombinante Protein Expression, Kristallisation und biophysikalische Studien von a<em&gt; Bacillus</em&gt; -konservierte Nucleotid-Pyrophosphorylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Vorbereitung der Keratin-Hydrolysat aus Hühnerfedern und ihre Anwendung in der Kosmetik

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Korrekturlesen und DNA-Reparatur-Assay mit Einzel-Nukleotid-Erweiterung und MALDI-TOF Massenspektrometrie-Analyse

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse der Proteinfaltung, Transport und Abbau in lebenden Zellen durch radioaktive Puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Studie über den Stoffwechsel von sechs systemischen Insektiziden in einer neu etablierten Zellsuspensionskultur abgeleitet aus Tee (Camellia Sinensis L.) Blätter

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Etikettenfreier Immunpräzipitations-Massenspektrometrie-Workflow für großangelegtes Nuklear-Interactome-Profiling

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impeddance-Based GPCR Assays

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA-Glykosylase-Assay durch matrixgestützte Laserdesorption/Ionisations-Time-of-Flight-Massenspektrometrie-Analyse

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Analyse der Wechselwirkung fluoreszierend markierter Proteine mit künstlichen Phospholipid-Mikrovesikeln mittels quantitativer Durchflusszytometrie

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...