Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

מחקר זה מומן בחלקו על ידי Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001; Governo do Estado do Amazonas עם משאבים מ Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). המחברים מודים לתוכנית לפיתוח טכנולוגי בכלים לבריאות PDTIS-FIOCRUZ על השימוש במתקניה.

עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים הקשורים לכל החומרים, המכשירים והתוכנות המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הגדרת ציטומטריית זרימה
<ol><li>יישור פרמטרים אופטיים של ציטומטר זרימה המוצמד למחשב<ol><li>היכנס לתוכנת Cytometer.</li>
		<li>בסביבת העבודה של התוכנה, בחר Cytometer | הפעלה</strong...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

שיטות מסורתיות, כגון ספירת לוחות של מושבות, אינן רק גוזלות זמן, אלא גם זקוקות לתאים בני קיימא ואינן מאפשרות כימות של נבגים בלתי פעילים5. תא פטרוף-האוזר הוא מתודולוגיה חלופית, אך נדרש מיקרוסקופיסט מנוסה כדי לבצע אותה. ציטומטריית זרימה הוכחה כחלופה שימושית למטרה זו.
<p class="jove_conte...

Bacillus subtilis הוא חיידק גראם-חיובי בצורת מוט המסוגל לייצר נבגים שקטים כאשר תנאי הסביבה אינם מאפשרים צמיחת תאים1. נבגים הם צורות תאים יציבות ביותר ואלה של כמה מינים, כולל B. subtilis, נמצאים בשימוש נרחב כפרוביוטיקה לשימוש בני אדם ובעלי חיים2. בשל תכונות העמידות והבטיחות שלו, הנבג של B. subtilis, המציג חלבונים הטרולוגיים, הוצע כאדג'ובנט רירי, מערכת אספקת חיסונים, ופלטפורמת אימוביליזציה של אנזימים 3,4.
כדי להשיג נבגים מ B. subtilis, יש צורך לחשוף אותו למחסור תזונתי באמצעות מדיום תרבות מיוחד. לאחר השגת נבגים אלה וטיהורם, יש לכמת אותם כדי לשפר את יעילות הבדיקה 5,6. לפיכך, שיטות מסוימות מיושמות כדי לנתח את ריכוז הנבגים המתקבלים. ניתן להשתמש בספירת לוחות ובתא פטרוף-האוסר, הידוע גם בשם תא ספירה. האחרון פותח במקור כדי לקבוע את ריכוז תאי הדם; עם זאת, ניתן להשתמש בו בתחום המיקרוביולוגיה לספירת נבגים 7,8. למרות היותה השיטה הסטנדרטית המשמשת לספירת תאים, הקריאה מייגעת מכיוון ששיטה זו ידנית לחלוטין והדיוק שלה תלוי בניסיון של המפעיל.
ניתוחים מבוססי ציטומטריה של זרימה (FC) הוצעו בעבר כגישות מהירות, אמינות וספציפיות לזיהוי תאים מסומנים של Bacillus spp. השימוש בציטומטריית זרימה לספירת חרוזים הבטיח יכולת שחזור בספירת תאים בבדיקות שגרתיות (ספירה מוחלטת של לימפוציטים מסוג CD4 ו-CD8 T) ובפיתוח מחקר המערב חלקיקים המסוגלים לגילוי ולספירה באמצעות ציטומטריית זרימה9. גודג'פרי ואלשריף הציעו להשתמש בספירת חרוזים לכימות FC של נבגים לא מסומנים10. השימוש בציטומטריית זרימה תואר לניטור נבגים ב- Bacillus spp. באמצעות תיוג DNA של נבג 10,11,12,13. מחקר נוסף השתמש ב-FC כדי להעריך את כמות החלבונים המסומנים באופן פלואורסצנטי על פני הנבג15.
מחקר זה ביקש להשתמש בחרוזי ספירה מסחריים כדי להבטיח סטנדרט של יכולת שחזור ביחס לספירת אירועים באמצעות ציטומטריית זרימה. כאן, אנו מציעים להשתמש בספירת חרוזים לספירת תאים ב- FC כדי לחדד את ספירת הנבגים ולהעריך את יעילות הצימוד של נוגדנים המסומנים באופן פלואורסצנטי על פני הנבג.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

הנבגים של Bacillus subtilis כבר הוצעו ליישומים ביוטכנולוגיים ואימונולוגיים שונים; עם זאת, יש צורך הולך וגובר בפיתוח מתודולוגיות המשפרות את הזיהוי של אנטיגנים משותקים על פני השטח של נבגים יחד עם כימות שלהם. ניתוחים מבוססי ציטומטריית זרימה הוצעו בעבר כגישות מהירות, אמינות וספציפיות לאיתור תאים מסומנים של B. subtilis. כאן אנו מציעים להשתמש בציטומטריית זרימה כדי להעריך את יעילות התצוגה של נוגדן פלואורסצנטי (FA) על פני הנבג ולכמת את מספר הנבגים באמצעות ספירת חרוזים. 
לשם כך השתמשנו באתידיום ברומיד כסמן דנ"א ובנוגדן עם תווית אלופיקוציאנין (APC), שהוצמד לנבגים, כסמן פני השטח. כימות הנבגים בוצע באמצעות ספירת חרוזים, שכן טכניקה זו מדגימה דיוק גבוה בזיהוי תאים. הנבגים המסומנים נותחו באמצעות ציטומטר זרימה, שאישר את הצימוד. כתוצאה מכך, הוכח כי תיוג DNA שיפר את דיוק הכימות על ידי ציטומטריית זרימה, לזיהוי נבגים מונבטים. נצפה כי אתידיום ברומיד לא היה מסוגל לתייג נבגים רדומים; עם זאת, טכניקה זו מספקת קביעה מדויקת יותר של מספר הנבגים עם חלבון פלואורסצנטי המצומד לפני השטח שלהם, ובכך מסייעת בפיתוח מחקרים המתמקדים בשימוש בנבגים כפלטפורמה ביוטכנולוגית ביישומים שונים.

בדגימות נבגים אוטוקלאביים (AS), 2 × 103 נבגים/μl ו-1 × 103 נבגים/μl זוהו באמצעות ספירת חרוזים ושיטת Petroff-Hausser, בהתאמה (איור 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> איור 1: סכמה כללית לכימות נבגים. (A) ?...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

פרוטוקול זה מתמקד בשימוש בציטומטריית זרימה וספירת חרוזים כדי לכמת נבגי חיידקים המסומנים באתידיום ברומיד. השיטה יעילה גם לניתוח הצימוד הקוולנטי של חלבונים על פני השטח של נבגים שלמים.

שיפור של Bacillus subtilis ספירת נבגים וניתוח תוויות בציטומטריית זרימה

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

מונה תאים של נבגי Bacillus subtilis בשיטות מסורתיות יכול להיות משימה מייגעת, שכן שיטות אלה יכולות להיות ידניות לחלוטין ואת הדיוקים שלהם בהתאם לניסיון של המפעיל. פרוטוקול זה מאפשר ספירה של נבגים רדומים ונובטים. בנוסף, הטכניקה גם מאפשרת לקבוע את אחוז ההתמודדות של חלבונים פלואורסצנטיים על פני השטח שלה.בהינתן שלב ההגדרה הקיים בפרוטוקול זה, החזון מדגים עם המתקנים וההבנה הטכנית ופרטי הטיפול בביצוע זה. התחל על ידי כניסה לתוכנת הציטומטר. בסביבת העבודה של התוכנה, בחר Cytometer, ואחריו Fluidic Startup.לאחר מכן בחרו 'מצבי ניקוי'. ולבסוף, ליזום SIT סומק. קח 50 מיקרוליטר של נבגי autoclave ודגר אותם עם ethidium bromide בגורם דילול של 0.05% נפח על ידי נפח במשך 30 דקות מוגן מפני אור.שטפו את הנבגים שלוש פעמים עם PBS על ידי צנטריפוגה ב-17, 949 גרם למשך 10 דקות, והשהיה מחדש ב-PBS. לאחר מכן, להוסיף 10 מיקרוליטר של חרוזים בעקבות המלצות היצרן לדילול ולנתח את הדגימה באמצעות ציטומטר זרימה. הגדר את אסטרטגיית הגאטינג בהתבסס על המאפיינים המורפו-מטריים והפלואורסצנטיים של החלקיקים תוך שימוש בבקרה השלילית כנקודת ייחוס.לאחר מכן מערבבים את הצינור בעדינות. חבר אותו לבדיקת ציטומטר הזרימה ולחץ על רכישה. כדי להגדיר את עוצמת הלייזר, עבור אל הכרטיסייה פרמטרים בחלון הציטומטר, התאם את הפיזור קדימה ל -375 ואת פיזור הצד ל -275.לאחר מכן בחר את כרטיסיית הסף והגדר אותה ל- 500. לאחר מכן, לנתח את הדגימה ללא צבע המכיל רק נבגים כדי למנוע autofluorescence. בלשונית הפרמטרים, התאימו את המתחים של גלאי המסנן שלוש ל-603 ואת המתחים של גלאי המסנן חמש ל-538 כדי להבדיל בין אוכלוסיות שליליות וחיוביות באמצעות פלואורסצנטיות בבקרות.לאחר מכן לחץ על פיצוי, והגדר את גלאי המסננים 5 על 3 היסט הגדרה לאחד. כדי להגדיר את ההתקן לרכישה, בחר ניסוי, בחר את פריסת הניסוי והגדר את הרכישה ל- 30, 000 אירועים. לאחר התאמת הפרמטרים, רכוש נתונים עבור הדגימות המסומנות ומכילות חרוזים בציטומטר הזרימה.צנטריפוגה 50 מיקרוליטר של נבגים ב 17, 949 גרם במשך 10 דקות. לאחר מכן, להשעות מחדש את הנבגים באמצעות 25 מיקרוליטר של 1-ethyl-3-3-dimethylaminopropyl carbodiimide ולדגור במשך 15 דקות. לאחר מכן, להוסיף 25 מיקרוליטר של N-hydroxysulfosuccinimide בריכוז של 50 מילימולר לתרחיף הנבג.דוגרים על תרחיף הנבגים בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. שטפו את הנבגים שלוש פעמים עם PBS על ידי צנטריפוגה כפי שהוצג קודם לכן. הוסיפו חלבון פלואורסצנטי לדגימות ודגרו במשך הלילה בטמפרטורה של 15 מעלות צלזיוס.הוסף 10 מיליגרם למיליליטר של אתידיום ברומיד מדולל ב 1 עד 50, ולאחר מכן להשאיר את הדגימות על קרח במשך שעה אחת, מוגן מפני אור. לאחר שטיפת הנבגים והגדרת השערים כפי שהוצג קודם לכן, שנו את הפרמטרים עבור גלאי מסנן שלוש על ציר x, וגלאי מסנן חמש על ציר Y של תרשים הנקודות. שיטת ספירת החרוזים זיהתה פעמיים 10 עד השלישי נבגים למיקרוליטר בדגימות נבגים אוטוקלאביים.צביעת אתידיום ברומיד של דגימות נבגים אוטוקלאביים הראתה עוצמת פלואורסצנטיות ממוצעת גבוהה יותר מאשר צביעה של נבגים שאינם אוטוקלאבים, מה שמצביע על צביעה גדולה יותר של חומר גנטי. משטח נבג האוטוקלאב, יחד עם נוגדן אינטרלוקין 10 אנטי-אנושי שכותרתו APC, הראה יעילות צימוד גבוהה יותר בהשוואה לנבגים שאינם אוטוקלאביים. נוכחותם של נבגים חדירים לאתידיום ברומיד הצביעה על נוכחות אפשרית של נבגים מונבטים בכלל האוכלוסייה.בהתבסס על ניתוחי ציטומטריית הזרימה, נצפה כי הנוגדן הפלואורסצנטי הראה אחוז גבוה יותר של צימוד עם הנבגים הרדומים בהשוואה לנבגים הנבוטים. יתר על כן, ככל שריכוז הנוגדנים הפלואורסצנטיים עלה, נצפתה עלייה באחוז הנבגים המצומדים ובעוצמת הפלואורסצנטיות הממוצעת. חשוב לבצע הומוגניזציה יסודית של החרוזים הנוכחיים כדי להבטיח קריאות מדויקות באמצעות ציטומטריית זרימה וספירה מדויקת של נבגים.על מנת לתקנן את ריכוז האנטיגנים המחוברים לנבגים, מחקרים קנדיים מנתחים את השימוש בנבגים כנוגדנים לחיסון.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

זיהוי של חומצות שומן ב<em&gt; Cereus בצילוס</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

ביטוי חלבון רקומביננטי, התגבשות, מחקרים ביופיסיקליים של א<em&gt; Bacillus</em&gt; -שמר Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

הכנת קרטין Hydrolysate של נוצות העוף ויישומו בתחום הקוסמטיקה

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

הגהה ואת וזמינותו תיקון ה-DNA באמצעות ניתוח ספקטרומטר מסה MALDI-TOF והסיומת נוקלאוטיד יחיד

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

ניתוח של קיפול חלבונים, תחבורה, והשפלה בתאים חיים על ידי הדופק רדיואקטיבי צ'ייס

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

מחקר על חילוף החומרים של שישה קוטלי חרקים מערכתית החדש הוקמה התא תרבות ההשעיה נגזר תה (Camellia Sinensis L.) עלים

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Immunoprecipitation ללא תווית של זרימת עבודה בהיקפים גדולים של החברה ליצירת פרופיל רב-ממדי של Interactome גרעינית

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

פרוטוקול מינון סטפנסקי עבור תפוקה מוגברת ב-GPCR-מבוסס-תוויות חינם

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glycosylase בדיקה על ידי טיהור לייזר בסיוע מטריקס / יינון זמן טיסה ניתוח ספקטרומטריה מסה

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

ניתוח האינטראקציה של חלבונים בעלי תווית פלואורסצנטית עם מיקרו-וסיקלים מלאכותיים של פוספוליפידים באמצעות ציטומטריה כמותית של זרימה

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...