Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

この研究は、Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001 によって部分的に資金提供されました。Governo do Estado do Amazonas Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAMのリソースを使用。Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).著者らは、PDTIS-FIOCRUZの施設を利用したPDTIS-FIOCRUZの技術開発プログラムに感謝する。

このプロトコルで使用されるすべての材料、機器、およびソフトウェアに関連する詳細については、 材料表 を参照してください。
1. フローサイトメトリーの設定
<ol><li>コンピュータと結合したフローサイトメーターの光学パラメータのアライメント<ol><li>Cytometerソフトウェアにログインします。</li>
		<li>ソフトウェアワークスペースから、 <st...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

コロニーのプレートカウントなどの従来の方法は、時間がかかるだけでなく、生細胞も必要であり、不活化胞子の定量は不可能です5。ペトロフ・ハウザーチャンバーは別の方法論ですが、それを実行するには経験豊富な顕微鏡技師が必要です。フローサイトメトリーは、この目的に有用な代替手段であることが証明されています。
Genovese et <sup class="xref...

枯草菌は棒状のグラム陽性菌で、環境条件が細胞増殖を許さない場合に静止胞子を産生することができます1。胞子は非常に安定した細胞形態であり、枯草菌を含むいくつかの種の胞子は、ヒトおよび動物用のプロバイオティクスとして広く使用されています2。枯草菌の胞子は、その耐性と安全性の特性から、異種タンパク質を示し、粘膜アジュバント、ワクチン送達システム、および酵素固定化プラットフォームとして提案されている3,4。
 枯草菌から胞子を得るには、特別な培地を使用して栄養遮断にさらす必要があります。これらの胞子を入手して精製した後、検査効率を向上させるためにそれらを定量化する必要があります5,6。したがって、得られた胞子の濃度を分析するために特定の方法が適用されます。プレートカウンティングと、カウンティングチャンバーとしても知られるペトロフ・ハウザーチャンバーを使用できます。後者はもともと血球の濃度を決定するために開発されました。しかし、胞子計数のための微生物学の分野でそれを使用することは可能です7,8。細胞計数に使用される標準的な方法であるにもかかわらず、この方法は完全に手作業であり、その精度はオペレーターの経験に依存するため、読み取りは面倒です。
フローサイトメトリー(FC)ベースの分析は、バチルス属菌の標識細胞を検出するための迅速で信頼性が高く、特異的なアプローチとして以前に提案されてきました。フローサイトメトリーカウンティングビーズの使用により、ルーチン検査(CD4およびCD8 Tリンパ球の絶対数)での細胞カウント、およびフローサイトメトリーを使用して検出およびカウントできる粒子を含む研究の開発における再現性が保証されています9。GodjafreyとAlsharifは、非標識胞子のFC定量化にカウントビーズの使用を提案しました10。フローサイトメトリーの使用は、バチルス属菌の胞子形成のモニタリングについて説明されています。胞子DNA10,11,12,13を標識する。さらに別の研究では、胞子表面上の蛍光標識タンパク質の量を評価するためにFCが用いられた15。
この研究では、市販のカウンティングビーズを使用して、フローサイトメトリーを使用したイベントカウンティングに関する再現性の基準を確保しようとしました。本研究では、胞子計数を精緻化し、胞子表面上の蛍光標識抗体の結合効率を評価するために、FCでの細胞計数に計数ビーズを使用することを提案します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

枯草菌の胞子は、さまざまなバイオテクノロジーおよび免疫学的用途のためにすでに提案されています。しかし、胞子の表面に固定化された抗原の検出とその定量を改善する方法論の開発の必要性が高まっています。フローサイトメトリーベースの解析は、枯草菌の標識細胞を検出するための迅速で信頼性が高く、特異的なアプローチとして以前から提案されてきました。本研究では、フローサイトメトリーを用いて、胞子表面の蛍光抗体(FA)のディスプレイ効率を評価し、カウンティングビーズを用いて胞子の数を定量することを提案します。
このために、DNAマーカーとして臭化エチジウムを使用し、胞子に結合したアロフィコシアニン(APC)標識抗体を表面マーカーとして使用しました。胞子の定量は、細胞の検出において高い精度を示すため、計数ビーズを使用して行われました。標識された胞子をフローサイトメーターを用いて解析し、カップリングを確認しました。その結果、DNA標識により、発芽胞子の検出のためのフローサイトメトリーによる定量精度が向上することが実証されました。エチジウムブロマイドは休眠胞子を標識できないことが観察されました。しかし、この技術は、表面に蛍光タンパク質が結合した胞子の数をより正確に決定できるため、さまざまなアプリケーションにおけるバイオテクノロジープラットフォームとしての胞子の使用に焦点を当てた研究の開発に役立ちます。

オートクレーブ滅菌した胞子(AS)サンプルでは、計数ビーズとPetroff-Hausser法を用いて、それぞれ2 × 103 胞子/μlおよび1 × 103 胞子/μlを検出しました(図2)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> 図1:胞子の定量化の一般的なスキーム。(A)EtBrで標...

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Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

このプロトコルは、フローサイトメトリーとカウントビーズを使用して、エチジウムブロマイドで標識された細菌胞子を定量化することに焦点を当てています。この方法は、無傷の胞子の表面におけるタンパク質の共有結合を分析するのにも効率的です。

フローサイトメトリーにおける 枯草菌 胞子の計数と標識解析の改善

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

枯草菌の胞子の細胞カウンターは、従来の方法を使用して完全に手作業で行うことができ、オペレーターの経験に応じて精度を変更することができるため、面倒な作業になる可能性があります。このプロトコルは休眠および発芽の胞子の列挙を可能にする。さらに、この技術により、その表面の蛍光タンパク質のコーピングの割合を決定することも可能になります。このプロトコルに存在するセットアップステップを考えると、ビジョンは、この実行における設備と技術的な理解とケアの詳細を示しています。まず、サイトメーターソフトウェアにログインします。ソフトウェアワークスペースで、Cytometerを選択し、続いてFluidic Startupを選択します。次に、[クリーニングモード]を選択します。最後に、SIT フラッシュを開始します。50マイクロリットルのオートクレーブス胞子を採取し、エチジウムブロマイドと0.05体積%の希釈率で30分間、光から保護してインキュベートします。17, 949 Gで10分間遠心分離し、PBSに再懸濁することにより、胞子をPBSで3回洗浄します。次に、メーカーの希釈推奨に従って10マイクロリットルのビーズを添加し、フローサイトメーターを使用してサンプルを分析します。ネガティブコントロールを基準として、粒子の形態測定特性と蛍光特性に基づいてゲーティング戦略を定義します。次に、チューブを静かに混ぜます。フローサイトメータープローブに取り付け、Acquireをクリックします。レーザー出力を設定するには、サイトメーターウィンドウのパラメータータブに移動し、前方散乱を 375 に、側方散乱を 275 に調整します。次に、しきい値タブを選択し、500に設定します。次に、胞子のみを含む無染料サンプルを分析して、自家蛍光を排除します。パラメータータブで、フィルター検出器 3 の電圧を 603 に、フィルター検出器 5 の電圧を 538 に調整し、コントロールの蛍光を使用して負の母集団と陽性の母集団を区別します。次に、[補正] をクリックし、フィルター検出器 5 x 3 のセットアップ オフセットを 1 に設定します。取得用にデバイスを構成するには、 [実験] を選択し、実験レイアウトを選択して、取得を 30, 000 イベントに設定します。パラメータを調整した後、フローサイトメーターで標識され、ビーズを含むサンプルのデータを取得します。50マイクロリットルの胞子を17, 949 gで10分間遠心分離する。次に、25マイクロリットルの1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドを使用して胞子を再懸濁し、15分間インキュベートします。その後、25マイクロリットルのN-ヒドロキシスルホコハク酸イミドを50ミリモルの濃度で胞子懸濁液に加える。胞子懸濁液を室温で30分間インキュベートします。前述したように、遠心分離機によりPBSで胞子を3回洗浄します。サンプルに蛍光タンパク質を添加し、摂氏15度で一晩インキュベートします。1〜50に希釈したエチジウムブロマイドを1ミリリットルあたり10ミリグラム添加し、サンプルを1時間氷上に放置し、光から保護します。胞子を洗浄し、前述のようにゲートを定義した後、ドットプロットのx軸のフィルター検出器3とY軸のフィルター検出器5のパラメーターを変更します。カウンティングビーズ法は、オートクレーブ胞子サンプル中の1マイクロリットルあたり10〜3回の胞子を2回検出しました。オートクレーブ胞子サンプルのエチジウムブロマイド染色は、オートクレーブ非胞子の染色よりも高い平均蛍光強度を示し、遺伝物質の染色が高いことを示しています。オートクレーブ胞子表面は、APC標識された抗ヒトインターロイキン10抗体と結合し、非オートクレーブ胞子と比較して高い結合効率を示しました。エチジウムブロマイドを透過する胞子の存在は、全個体群に発芽胞子が存在する可能性を示しました。フローサイトメトリー解析に基づき、蛍光抗体は、発芽した胞子と比較して、休眠胞子との結合率が高いことが観察されました。さらに、蛍光抗体の濃度が上昇するにつれて、結合胞子の割合と平均蛍光強度の増加が観察されました。フローサイトメトリーと胞子の正確な計数により正確な読み取り値を確保するために、電流ビーズの完全な均質化を行うことが重要です。胞子に付着する抗原の濃度を標準化するカナダの研究では、ワクチン抗体としての胞子の使用を分析しています。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

脂肪酸の同定で<em&gt;セレウス菌</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

組換えタンパク質の発現、結晶化、および生物物理学的研究<em&gt;バチルス</em&gt;保有ヌクレオチドピロホスホリラーゼ、BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

鶏の羽根や化粧品への応用からケラチンを加水分解物の準備

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

校正と単一のヌクレオチドの拡張子と MALDI-TOF 質量分析を用いた DNA 修復アッセイ

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

タンパク質の折り畳み、トランスポート、および放射性パルス追跡による生体細胞の劣化の解析

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

茶由来の新たに確立された細胞懸濁液培養における6種の全身殺虫剤の代謝に関する研究(カメリアシネンシスL.葉

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

大規模核インターロームプロファイリングのためのラベルフリー免疫沈降質量分析ワークフロー

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

ラベルフリーインピーダンスベースのGPCRアッセイにおけるスループット向上のためのステップワイズドージングプロトコル

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型質量分析分析によるウラシル-DNAグリコシラーゼアッセイ

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

蛍光標識タンパク質と人工リン脂質マイクロベシクルの定量的フローサイトメトリーによる相互作用の解析

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...

フローサイトメトリーにおける 枯草菌 胞子の計数と標識解析の改善

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