Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
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이 연구는 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001에 의해 부분적으로 재정 지원을 받았습니다. Governo do Estado do Amazonas, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM의 리소스; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). 저자들은 시설 사용에 대해 보건 도구 기술 개발 프로그램 PDTIS-FIOCRUZ에 감사를 표합니다.

이 프로토콜에 사용된 모든 재료, 기기 및 소프트웨어와 관련된 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 유세포 분석 설정
<ol><li>컴퓨터에 결합된 유세포 분석기의 광학 파라미터 정렬<ol><li>Cytometer 소프트웨어에 로그인합니다.</li>
		<li>소프트웨어 작업 공간에서 Cytometer | 시작하고 몇 분 정도 기다립니다 | 클린 모드 | 앉아서 액...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

콜로니의 플레이트 카운팅과 같은 전통적인 방법은 시간이 많이 걸릴 뿐만 아니라 생존 가능한 세포가 필요하며 비활성화된 포자의 정량화를 허용하지 않는다5. Petroff-Hausser 챔버는 대체 방법론이지만 이를 수행하려면 숙련된 현미경 전문가가 필요합니다. 유세포 분석은 이러한 목적을 위한 유용한 대안임이 입증되었습니다.
Genovese et al.12 ...

바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)는 막대 모양의 그람 양성 박테리아로, 환경 조건이 세포 성장을 허용하지 않을 때 정지된 포자를 생성할 수 있습니다1. 포자는 매우 안정적인 세포 형태이며 B. subtilis를 포함한 여러 종의 포자는 인간 및 동물용 프로바이오틱스로 널리 사용됩니다2. 내성 및 안전성 특성으로 인해 이종 단백질을 표시하는 B. subtilis의 포자는 점막 보조제, 백신 전달 시스템 및 효소 고정 플랫폼 3,4로 제안되었습니다.
 B. subtilis에서 포자를 얻으려면 특수 배양 배지를 사용하여 영양 결핍에 노출시켜야 합니다. 이러한 포자를 얻고 정제한 후에는 테스트 효율을 향상시키기 위해 정량화해야 합니다 5,6. 따라서, 얻어진 포자의 농도를 분석하기 위해 특정 방법이 적용된다. 플레이트 카운팅 및 카운팅 챔버라고도 하는 Petroff-Hausser 챔버를 사용할 수 있습니다. 후자는 원래 혈액 세포의 농도를 결정하기 위해 개발되었습니다. 그러나 포자 계산 7,8을 위해 미생물학 분야에서 사용할 수 있습니다. 셀 카운팅에 사용되는 표준 방법임에도 불구하고 이 방법은 완전히 수동이고 정확도는 작업자의 경험에 따라 달라지기 때문에 판독이 어렵습니다.
유세포 분석 기반(FC) 분석은 이전에 Bacillus spp의 표지된 세포를 검출하기 위한 빠르고 신뢰할 수 있으며 특이적인 접근법으로 제안되었습니다. 유세포 분석 계수 비드의 사용은 일상적인 검사(CD4 및 CD8 T 림프구의 절대 계수)에서 세포 계수와 유세포 분석을 사용하여 검출 및 계수할 수 있는 입자와 관련된 연구 개발에서 재현성을 보장합니다9. Godjafrey와 Alsharif는 표지되지 않은 포자의 FC 정량화를 위해 계수 비드의 사용을 제안했습니다10. 유세포 분석법의 사용은 Bacillus spp 의 포자 형성 모니터링을 위해 설명되었습니다.포자 DNA10,11,12,13을 라벨링하는 것을 통해. 또 다른 연구에서는 포자 표면(15)에서 형광 표지된 단백질의 양을 평가하기 위해 FC를 사용하였다.
이 연구는 유세포 분석을 사용한 이벤트 계수와 관련하여 재현성 표준을 보장하기 위해 상업용 계수 비드를 사용하고자 했습니다. 여기서, 우리는 포자 계수를 미세 조정하고 포자 표면에서 형광 표지된 항체의 결합 효율을 평가하기 위해 FC에서 세포 계수를 위한 계수 비드의 사용을 제안합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Bacillus subtilis의 포자는 이미 다른 생명 공학 및 면역 학적 응용 분야에 대해 제안되었습니다. 그러나 포자 표면에 고정된 항원의 검출과 정량화를 개선하는 방법론의 개발이 점점 더 필요해지고 있습니다. 유세포 분석 기반 분석은 이전에 B. subtilis의 표지된 세포를 검출하기 위한 빠르고 신뢰할 수 있으며 특이적인 접근법으로 제안되었습니다. 여기에서, 우리는 유세포 분석의 사용을 사용하여 포자 표면에 형광 항체(FA)의 표시 효율을 평가하고 계수 비드를 사용하여 포자 수를 정량화할 것을 제안합니다.
이를 위해 에티듐 브로마이드를 DNA 마커로 사용하고 포자에 결합된 알로피코시아닌(APC) 표지 항체를 표면 마커로 사용했습니다. 포자의 정량화는 이 기술이 세포 검출에서 높은 정확도를 보여주기 때문에 계수 비드를 사용하여 수행되었습니다. 표지된 포자는 유세포 분석기를 사용하여 분석되었으며, 이는 결합을 확인했습니다. 그 결과, DNA 라벨링이 발아된 포자의 검출을 위해 유세포 분석에 의한 정량화의 정확도를 향상시킨다는 것이 입증되었습니다. 에티듐 브로마이드는 휴면 포자를 라벨링 할 수 없다는 것이 관찰되었습니다. 그러나, 이 기술은 그들의 표면에 결합된 형광 단백질을 가진 포자의 수의 더 정확한 결심을 제공해, 따라서 다른 신청에 있는 생물공학 플랫폼으로 포자의 사용에 집중하는 학문의 발달에서 돕습니다.

오토클레이브 포자(AS) 샘플에서 2 × 103 포자/μl 및 1 × 103 포자/μl는 각각 카운팅 비드와 Petroff-Hausser 방법을 사용하여 검출되었습니다(그림 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> 그림 1: 포자의 일반적인 정량화 계획. (A) EtBr로 표지된 포자 ?...

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Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

이 프로토콜은 유세포 분석 및 카운팅 비드를 사용하여 에티듐 브로마이드로 표지된 박테리아 포자를 정량화하는 데 중점을 둡니다. 이 방법은 또한 온전한 포자의 표면에서 단백질의 공유 결합을 분석하는 데 효율적입니다.

Bacillus subtilis 포자 계수 및 유세포 분석의 표지 분석 개선

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

전통적인 방법을 사용하는 Bacillus subtilis 포자의 세포 계수기는 작업자의 경험에 따라 완전히 수작업이 될 수 있고 정확도가 높기 때문에 힘든 작업이 될 수 있습니다. 이 프로토콜은 휴면 및 발아 포자의 열거를 가능하게 합니다. 또한 이 기술을 사용하면 표면에서 형광 단백질의 대처 비율을 결정할 수 있습니다.이 프로토콜에 있는 설정 단계를 감안할 때 비전은 이 실행에서 시설과 기술적 이해 및 세부 관리를 보여줍니다. 먼저 유세포 분석기 소프트웨어에 로그인합니다. 소프트웨어 작업 공간에서 Cytometer를 선택한 다음 Fluidic Startup을 선택합니다.그런 다음 청소 모드를 선택합니다. 마지막으로 SIT 플러시를 시작합니다. 50 마이크로 리터의 오토 클레이브 포자를 취하여 0.05 %의 희석 계수로 브롬화 에티듐으로 배양하고 30 분 동안 빛으로부터 보호합니다.17, 949G에서 10분 동안 원심분리하고 PBS에 다시 현탁시켜 포자를 PBS로 세 번 세척합니다. 다음으로, 희석에 대한 제조업체의 권장 사항에 따라 10마이크로리터의 비드를 추가하고 유세포 분석기를 사용하여 샘플을 분석합니다. negative control을 참조로 사용하여 입자의 morpho-metric 및 fluorescence 특성을 기반으로 게이팅 전략을 정의합니다.그런 다음 튜브를 부드럽게 섞습니다. 유세포 분석기 프로브에 부착하고 Acquire(획득)를 클릭합니다. 레이저 출력을 설정하려면 cytometer 창의 parameters 탭으로 이동하여 forward scatter를 375로, side scatter를 275로 조정합니다.그런 다음 임계값 탭을 선택하고 500으로 설정합니다. 다음으로, 자가형광을 제거하기 위해 포자만 포함된 무염료 샘플을 분석합니다. 파라미터 탭에서 필터 검출기 3의 전압을 603으로, 필터 검출기 5의 전압을 538로 조정하여 대조군의 형광을 사용하여 음성 모집단과 양성 모집단을 구별합니다.그런 다음 보정(Compensation)을 클릭하고 필터 검출기 5 x 3 설정 오프셋을 1로 설정합니다. 획득을 위해 장치를 구성하려면 실험을 선택하고 실험 레이아웃을 선택한 다음 획득을 30, 000 이벤트로 설정합니다. 파라미터를 조정한 후 유세포 분석기에서 라벨링되고 비드를 포함하는 샘플에 대한 데이터를 수집합니다.17, 949G에서 포자 50마이크로리터를 10분 동안 원심분리합니다. 다음으로, 25 마이크로 리터의 1- 에틸 -3-3- 디메틸 아미노 프로필 카르보디 이미드를 사용하여 포자를 다시 현탁시키고 15 분 동안 배양합니다. 그 후, 포자 현탁액에 50 밀리몰 농도의 N-하이드록시설포숙신이미드 25 마이크로리터를 첨가한다.포자 현탁액을 실온에서 30분 동안 배양합니다. 앞과 같이 원심분리하여 PBS로 포자를 세 번 씻습니다. 샘플에 형광 단백질을 추가하고 섭씨 15도에서 밤새 배양합니다.1에서 50으로 희석한 에티듐 브로마이드 밀리리터당 10mg을 첨가한 다음 샘플을 빛으로부터 보호하여 1시간 동안 얼음 위에 둡니다. 포자를 세척하고 앞과 같이 게이트를 정의한 후 점도표의 x축에서 필터 검출기 3에 대한 파라미터를 변경하고 Y축에서 필터 검출기 5에 대한 파라미터를 변경합니다. 계수 비드 방법은 오토클레이브 포자 샘플에서 마이크로리터당 2배 10에서 3번째 포자를 검출했습니다.오토클레이브 포자 샘플의 에티듐 브로마이드 염색은 비오토클레이브 포자의 염색보다 평균 형광 강도가 더 높았으며, 이는 유전 물질의 더 큰 염색을 나타냅니다. APC 표지된 항인간 인터루킨 10 항체와 결합된 오토클레이브 포자 표면은 비오토클레이브 포자에 비해 더 큰 결합 효율을 보여주었습니다. 에티듐 브로마이드에 투과할 수 있는 포자의 존재는 전체 개체군에서 발아된 포자의 존재 가능성을 나타냈다.유세포 분석 분석에 기초하여, 형광 항체는 발아된 포자에 비해 휴면 포자와의 결합 비율이 더 높은 것으로 관찰되었습니다. 또한, 형광 항체의 농도가 증가함에 따라, 결합 포자의 비율과 평균 형광 강도의 증가가 관찰되었다. 유세포 분석과 포자의 정확한 계수를 통해 정확한 판독을 보장하기 위해 현재 비드의 철저한 균질화를 수행하는 것이 중요합니다.포자에 부착된 항원의 농도를 표준화한 캐나다 연구는 포자를 백신 항체로 사용하는 것을 분석합니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

지방산의 확인 시험<em&gt; 바실러스 세레 우스</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

연구

생화학

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

재조합 단백질 발현, 결정화 및 생물 물리학 연구<em&gt; 바실러스</em&gt; 보존 된 뉴클레오티드 피로 인산화 효소, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

각 질의 닭 깃털 및 화장품에의 응용에서의 준비

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

교정 및 DNA 복구 분석 결과 단일 뉴클레오티드 확장 및 TOF MALDI 질량 분석 분석을 사용 하 여

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

단백질 폴딩, 전송, 및 방사성 펄스 체이스 하 여 살아있는 세포의 저하의 분석

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

대규모 핵 상호 작용 프로파일링을 위한 라벨 없는 면역 침전 질량 분광 워크플로우

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

라벨없는 임피던스 기반 GPCR 분석에서 처리량 증가를위한 단계별 투약 프로토콜

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광법 분석에 의한 우라실-DNA 글리코실라제 분석

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

정량적 유세포 분석기를 사용하여 형광 표지 단백질과 인공 인지질 마이크로베시클의 상호작용 분석

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...