Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Denne studien ble delvis finansiert av Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001; Governo do Estado do Amazonas med ressurser fra Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Forfatterne takker Program for teknologisk utvikling i verktøy for helse PDTIS-FIOCRUZ for bruk av sine fasiliteter.

Se materialfortegnelsen for detaljer relatert til alle materialer, instrumenter og programvare som brukes i denne protokollen.
1. Innstilling av flowcytometri
<ol><li>Justering av optiske parametere for flowcytometer koblet til en datamaskin<ol><li>Logg deg på Cytometer programvare.</li>
		<li>Fra programvarearbeidsområdet velger du Cytometer | Oppstart og vent noen minutter | Rengjør modus | Sitt væsker. MERK: Luftbo...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Tradisjonelle metoder, som platetelling av kolonier, er ikke bare tidkrevende, men trenger også levedyktige celler og tillater ikke kvantifisering av inaktiverte sporer5. Petroff-Hausser-kammeret er en alternativ metodikk, men det krever en erfaren mikroskopist for å utføre den. Flowcytometri har vist seg å være et nyttig alternativ til dette formålet.
Genovese et al.12 beskrev bruken av flowcytometri for kvantifisering av levedyktige celle...

Bacillus subtilis er en stavformet, gram-positiv bakterie som er i stand til å produsere hvilesporer når miljøforholdene ikke tillater cellevekst1. Sporer er ekstremt stabile celleformer, og de av flere arter, inkludert B. subtilis, er mye brukt som probiotika for mennesker og dyrbruk 2. På grunn av dens motstand og sikkerhetsegenskaper har sporen av B. subtilis, som viser heterologe proteiner, blitt foreslått som en slimhinneadjuvans, et vaksineleveringssystem og en enzymimmobiliseringsplattform 3,4.
For å oppnå sporer fra B. subtilis, er det nødvendig å utsette det for næringsmangel ved hjelp av et spesielt kulturmedium. Etter å ha oppnådd og renset disse sporene, må man kvantifisere dem for å forbedre testeffektiviteten 5,6. Dermed brukes visse metoder for å analysere konsentrasjonen av sporene som er oppnådd. Platetelling og et Petroff-Hausser-kammer, også kjent som et tellekammer, kan brukes. Sistnevnte ble opprinnelig utviklet for å bestemme konsentrasjonen av blodceller; Det er imidlertid mulig å bruke det innen mikrobiologi for sporetall 7,8. Til tross for at det er standardmetoden som brukes til celletelling, er lesing arbeidskrevende siden denne metoden er helt manuell og nøyaktigheten avhenger av operatørens erfaring.
Flowcytometribaserte (FC) analyser har tidligere blitt foreslått som raske, pålitelige og spesifikke tilnærminger for å oppdage merkede celler av Bacillus spp. Bruk av flowcytometritellende perler har garantert reproduserbarhet i celletelling ved rutineundersøkelser (absolutt telling av CD4- og CD8 T-lymfocytter) og i utviklingen av forskning som involverer partikler som kan detekteres og telles ved hjelp av flowcytometri9. Godjafrey og Alsharif foreslo bruk av telleperler for FC kvantifisering av umerkede sporer10. Bruk av flowcytometri ble beskrevet for monitorering av sporulering i Bacillus spp. via merking av sporens DNA 10,11,12,13. Enda en studie brukte FC til å evaluere mengden fluorescerende merkede proteiner på sporeoverflaten15.
Denne studien søkte å bruke kommersielle tellekuler for å sikre en standard for reproduserbarhet med hensyn til hendelsestelling ved bruk av flowcytometri. Her foreslår vi bruk av tellekuler for celletelling i FC for å avgrense sporeoppregning og evaluere koblingseffektiviteten til fluorescerende merkede antistoffer på sporeoverflaten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Sporer av Bacillus subtilis har allerede blitt foreslått for ulike bioteknologiske og immunologiske applikasjoner; Imidlertid er det et økende behov for utvikling av metoder som forbedrer deteksjonen av antigener immobilisert på overflaten av sporer sammen med deres kvantifisering. Flowcytometribaserte analyser har tidligere blitt foreslått som raske, pålitelige og spesifikke tilnærminger for å oppdage merkede celler av B. subtilis. Her foreslår vi bruk av flowcytometri for å evaluere visningseffektiviteten til et fluorescerende antistoff (FA) på overflaten av sporen og kvantifisere antall sporer ved hjelp av tellekuler.
For dette brukte vi ethidiumbromid som DNA-markør og et allophycocyanin (APC)-merket antistoff, som ble koblet til sporene, som en overflatemarkør. Kvantifiseringen av sporer ble utført ved hjelp av telleperler, siden denne teknikken viser høy nøyaktighet i deteksjon av celler. De merkede sporene ble analysert ved hjelp av et strømningscytometer, som bekreftet koblingen. Som et resultat ble det demonstrert at DNA-merking forbedret nøyaktigheten av kvantifisering ved flowcytometri, for påvisning av spiresporer. Det ble observert at ethidiumbromid ikke var i stand til å merke sovende sporer; Imidlertid gir denne teknikken en mer presis bestemmelse av antall sporer med fluorescerende protein koblet til overflaten, og bidrar dermed til utvikling av studier som fokuserer på bruk av sporer som en bioteknologisk plattform i forskjellige applikasjoner.

I autoklaverte spore (AS)-prøver ble det påvist 2 × 103 sporer/μl og 1 × 103 sporer/μl med henholdsvis tellekuler og Petroff-Hausser-metoden (figur 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Figur 1: Generelt skjema for kvantifisering av sporer. (A) Sporer merket med EtBr og (B) dobbelt...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Denne protokollen fokuserer på bruk av flowcytometri og telling av perler for å kvantifisere bakteriesporer merket med ethidiumbromid. Metoden er også effektiv for å analysere den kovalente koblingen av proteiner på overflaten av intakte sporer.

Forbedring av Bacillus subtilis sporeoppregning og etikettanalyse i flowcytometri

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Celleteller av Bacillus subtilis sporer ved hjelp av tradisjonelle metoder kan være en mektig oppgave, da disse metodene kan være helt manuelle og deres nøyaktigheter avhengig av operatørens erfaring. Denne protokollen gjør oppregningen av sovende og spirende sporer mulig. I tillegg gjør teknikken det også mulig å bestemme prosentandelen av håndtering av fluorescerende proteiner på overflaten.Gitt oppsettstrinnet som er tilstede i denne protokollen, demonstrerer visjonen med fasiliteter og teknisk forståelse og detaljer om omsorg i denne utførelsen. Begynn med å logge på cytometerprogramvaren. I programvarearbeidsområdet velger du Cytometer, etterfulgt av Fluidic Startup.Velg deretter Rengjøringsmodus. Og til slutt, start SIT Flush. Ta 50 mikroliter autoklavsporer og inkuber dem med ethidiumbromid ved en fortynningsfaktor på 0,05 volumvolum i 30 minutter beskyttet mot lys.Vask sporene tre ganger med PBS ved sentrifugering ved 17.949 G i 10 minutter og resuspendering i PBS. Deretter tilsettes 10 mikroliter perler etter produsentens anbefalinger for fortynning og analyserer prøven ved hjelp av et flowcytometer. Definer gating-strategien basert på partiklenes morfometriske og fluorescensegenskaper ved å bruke den negative kontrollen som referanse.Bland deretter røret forsiktig. Fest den til flowcytometersonden og klikk på Hent. For å stille inn lasereffekten, gå til parameterfanen i cytometervinduet, juster fremoverspredningen til 375 og sidespredningen til 275.Velg deretter terskelfanen og sett den til 500. Deretter analyserer du den fargestofffrie prøven som bare inneholder sporer for å eliminere autofluorescens. I parameterfanen justerer du filterdetektoren tres spenninger til 603 og filterdetektor fems spenninger til 538 for å skille mellom negative og positive populasjoner ved hjelp av fluorescens i kontrollene.Klikk deretter Kompensasjon, og sett filterdetektor 5 av 3 oppsettforskyvning til en. Hvis du vil konfigurere enheten for innhenting, velger du Eksperiment, velger eksperimentoppsettet og angir innhentingen til 30 000 hendelser. Etter justering av parametrene, samle inn data for prøvene som er merket og inneholder perler i flowcytometeret.Sentrifuge 50 mikroliter sporer ved 17.949 G i 10 minutter. Deretter suspenderer du sporene med 25 mikroliter 1-etyl-3-3-dimetylaminopropylkarbodiimid og inkuberer i 15 minutter. Etterpå tilsettes 25 mikroliter N-hydroksysulfosuccinid i en konsentrasjon på 50 millimolar til sporesuspensjonen.Inkuber sporesuspensjonen ved romtemperatur i 30 minutter. Vask sporene tre ganger med PBS ved sentrifugering som vist tidligere. Tilsett fluorescerende protein til prøvene og inkuber over natten ved 15 grader Celsius.Tilsett 10 milligram per milliliter ethidiumbromid fortynnet ved 1 til 50, og la deretter prøvene ligge på is i en time, beskyttet mot lys. Etter å ha vasket sporene og definert portene som vist tidligere, endre parametrene for filterdetektor tre på x-aksen, og filtrer detektor fem på Y-aksen i punktplottet. Tellekulemetoden påviste to ganger 10 til tredje sporer per mikroliter i autoklavsporeprøver.Ethidiumbromidfarging av autoklavsporeprøver viste høyere gjennomsnittlig fluorescensintensitet enn farging av ikke-autoklavsporer, noe som indikerer større farging av genetisk materiale. Autoklavsporeoverflaten, kombinert med APC-merket, anti-humant interleukin 10-antistoff viste større koblingseffektivitet sammenlignet med de ikke-autoklaverte sporene. Tilstedeværelsen av sporer gjennomtrengelige for ethidiumbromid indikerte mulig tilstedeværelse av spiresporer i totalpopulasjonen.Basert på flowcytometrianalysene ble det observert at det fluorescerende antistoffet viste en høyere prosentandel av kobling med de sovende sporene sammenlignet med de spirende. Videre, da konsentrasjonen av fluorescerende antistoffer økte, ble det observert en økning i prosentandelen koblede sporer og gjennomsnittlig fluorescensintensitet. Det er viktig å utføre en grundig homogenisering av strømkulene for å sikre presise avlesninger gjennom flowcytometri og nøyaktig telling av sporer.Standardisering av konsentrasjonen av antigener festet til spore, analyserer kanadiske studier bruken av spore som vaksineantistoffer.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifisering av fettsyrer i<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Rekombinant Proteinuttrykk, Krystallisering og Biofysiske Studier av a<em&gt; Bacillus</em&gt; -konserverte nukleotidpyrofosforylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Utarbeidelse av Keratin hydrolyse fra kylling fjær og dens anvendelse i kosmetikk

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Korrekturlesing og DNA reparasjon analysen Single nukleotid forlengelse og MALDI-TOF massespektrometri analyse

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse av proteinfolding, Transport og nedbrytning i levende celler av radioaktivt puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Studier på metabolismen av seks systemiske insektmidler i en nylig etablert Cell suspensjon kultur avledet fra Tea (Camellia Sinensis L.) Blader

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Label-fri Immunutfelling masse massespektrometri arbeidsflyt for stor skala kjernefysisk Interactome profilering

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Trinnvis Doseringsprotokoll for økt gjennomstrømming i etikettfrie impedansbaserte GPCR-analyser

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glykosylaseanalyse ved matriseassistert laserdesorpsjon/ioniseringstid for massespektrometrianalyse

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Analysere samspillet mellom fluorescerende merkede proteiner med kunstige fosfolipidmikrovesikler ved hjelp av kvantitativ strømningscytometri

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...