Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Это исследование было частично профинансировано Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) - Финансовый кодекс 001; Governo do Estado do Amazonas с ресурсами Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Авторы благодарят Программу технологического развития в области инструментов для здоровья PDTIS-FIOCRUZ за использование ее возможностей.

Подробные сведения обо всех материалах, инструментах и программном обеспечении, используемых в этом протоколе, см. в Таблице материалов .
1. Настройка проточной цитометрии
<ol><li>Юстировка оптических параметров проточного цитометра, сопряженного с комп?...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Традиционные методы, такие как пластинчатый подсчет колоний, не только отнимают много времени, но и требуют жизнеспособных клеток и не позволяют количественно определить инактивированные споры5. Камера Петрова-Хауссера является альтернативной методикой, но для ее выполн?...

Bacillus subtilis представляет собой палочковидную грамположительную бактерию, способную производить спокойные споры, когда условия окружающей среды не позволяют клеткам расти1. Споры являются чрезвычайно стабильными клеточными формами, и споры нескольких видов, включая B. subtilis, широко используются в качестве пробиотиков для использования человеком и животными2. Благодаря своей устойчивости и свойствам безопасности споры B. subtilis, которые демонстрируют гетерологичные белки, были предложены в качестве адъюванта слизистой оболочки, системы доставки вакцины и платформы иммобилизации ферментов 3,4.
Для получения спор из B. subtilis необходимо подвергнуть его депривации питательных веществ с помощью специальной питательной среды. После получения и очистки этих спор необходимо количественно оценить их для повышения эффективности теста 5,6. Таким образом, для анализа концентрации полученных спор применяются определенные методы. Можно использовать пластинчатый счет и камеру Петрова-Хауссера, также известную как счетная камера. Последний изначально был разработан для определения концентрации клеток крови; Однако возможно его использование в области микробиологии для подсчета спор 7,8. Несмотря на то, что это стандартный метод, используемый для подсчета клеток, чтение является трудоемким, так как этот метод полностью ручной, и его точность зависит от опыта оператора.
Анализ на основе проточной цитометрии (ФК) ранее был предложен в качестве быстрого, надежного и специфического подхода к обнаружению меченых клеток Bacillus spp. Использование гранул для подсчета клеток методом проточной цитометрии гарантирует воспроизводимость при подсчете клеток при рутинных исследованиях (абсолютное количество CD4 и CD8 Т-лимфоцитов) и при разработке исследований с участием частиц, которые могут быть обнаружены и подсчитаны с помощью проточной цитометрии9. Годжафри и Альшариф предложили использовать счетные шарики для количественной оценки немеченых спор10. Описано использование проточной цитометрии для мониторинга спороношения у Bacillus spp. путем мечения споровой ДНК 10,11,12,13. В другом исследовании FC использовали FC для оценки количества флуоресцентно меченных белков на поверхности споры15.
Это исследование было направлено на использование коммерческих счетных шариков для обеспечения стандарта воспроизводимости в отношении подсчета событий с помощью проточной цитометрии. В данной работе мы предлагаем использовать счетные шарики для подсчета клеток в ФК для уточнения нумерации спор и оценки эффективности связывания флуоресцентно меченных антител на поверхности спор.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Споры Bacillus subtilis уже были предложены для различных биотехнологических и иммунологических применений; Однако возрастает потребность в разработке методологий, улучшающих обнаружение антигенов, иммобилизованных на поверхности спор, и их количественного определения. Анализ на основе проточной цитометрии ранее был предложен в качестве быстрого, надежного и специфического подхода к обнаружению меченых клеток B. subtilis. В данной работе мы предлагаем использовать проточную цитометрию для оценки эффективности отображения флуоресцентного антитела (ФА) на поверхности споры и количественной оценки количества спор с помощью счетных шариков.
Для этого мы использовали бромид этидия в качестве ДНК-маркера и антитело, меченное аллофикоцианином (APC), которое было связано со спорами, в качестве поверхностного маркера. Количественное определение спор проводили с помощью счетных шариков, так как этот метод демонстрирует высокую точность в обнаружении клеток. Меченые споры были проанализированы с помощью проточного цитометра, который подтвердил связь. В результате было продемонстрировано, что мечение ДНК повышает точность количественной оценки методом проточной цитометрии для обнаружения проросших спор. Было замечено, что бромид этидия не способен маркировать спящие споры; Тем не менее, этот метод обеспечивает более точное определение количества спор с флуоресцентным белком, связанным с их поверхностью, что помогает в развитии исследований, которые сосредоточены на использовании спор в качестве биотехнологической платформы в различных приложениях.

В образцах автоклавных спор (АС) с помощью счетных шариков и метода Петрова-Хауссера было обнаружено 2 × 103 споры/мкл и 1 ×10 3 споры/мкл соответственно (рис. 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Рисуно?...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Этот протокол фокусируется на использовании проточной цитометрии и счетных шариков для количественного определения бактериальных спор, меченных бромидом этидия. Метод также эффективен для анализа ковалентного сцепления белков на поверхности интактных спор.

Совершенствование нумерации спор Bacillus subtilis и анализа меток в проточной цитометрии

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Подсчет клеток спор Bacillus subtilis традиционными методами может быть трудоемкой задачей, так как эти методы могут быть полностью ручными, а их точность зависит от опыта оператора. Этот протокол делает возможным перечисление спящих и прорастающих спор. Кроме того, методика также позволяет определить процент совладания флуоресцентных белков на его поверхности.Учитывая этап настройки, присутствующий в этом протоколе, видение демонстрирует оборудование, техническое понимание и детализацию ухода в этом исполнении. Начните с входа в программное обеспечение цитометра. В рабочей области программного обеспечения выберите Цитометр, а затем Жидкостный запуск.Затем выберите «Режимы очистки». И, наконец, инициируйте SIT Flush. Возьмите 50 микролитров спор автоклава и инкубируйте их с бромидом этидия при коэффициенте разбавления 0,05% по объему в течение 30 минут в защищенном от света месте.Споры трижды промывают ПБС центрифугированием при 17 949 G в течение 10 минут и повторно суспендируют в ПБС. Далее добавляют 10 микролитров шариков, следуя рекомендациям производителя по разведению, и анализируют пробу с помощью проточного цитометра. Определите стратегию стробирования на основе морфометрических и флуоресцентных характеристик частиц, используя отрицательный контроль в качестве эталона.Затем аккуратно перемешайте трубочку. Прикрепите его к зонду проточного цитометра и нажмите кнопку Получить. Чтобы установить мощность лазера, перейдите на вкладку параметров в окне цитометра, отрегулируйте прямое рассеяние на 375 и боковое рассеяние на 275.Затем выберите вкладку «Порог» и установите его на 500. Далее анализируют свободный от красителя образец, содержащий только споры, чтобы исключить автофлуоресценцию. На вкладке параметров отрегулируйте напряжение детектора фильтра 3 на 603 и напряжение детектора фильтра 5 на 538, чтобы различать отрицательную и положительную популяцию с помощью флуоресценции в контрольных элементах.Затем нажмите «Компенсация» и установите смещение настройки детектора фильтра 5 на 3 равным единице. Чтобы настроить устройство для сбора, выберите Эксперимент, выберите макет эксперимента и задайте для сбора данных 30 000 событий. После настройки параметров в проточном цитометре получают данные для образцов, которые маркированы и содержат гранулы.Центрифугируют 50 микролитров спор при 17 949 Г в течение 10 минут. Далее повторно суспендируют споры с помощью 25 микролитров 1-этил-3-3-диметиламинопропилкарбодиимида и инкубируют в течение 15 минут. После этого добавляют к споровой суспензии 25 микролитров N-гидроксисульфосукцинимида в концентрации 50 миллимоляров.Выдерживают споровую суспензию при комнатной температуре в течение 30 минут. Промойте споры три раза PBS центрифугированием, как показано ранее. Добавьте флуоресцентный белок к образцам и инкубируйте в течение ночи при температуре 15 градусов Цельсия.Добавьте 10 миллиграммов на миллилитр бромида этидия, разбавленного в соотношении 1 к 50, затем оставьте образцы на льду на один час, защищенный от света. После промывки спор и определения вентилей, как показано ранее, измените параметры для детектора фильтра три по оси x и детектора фильтра пять по оси Y точечного графика. Методом подсчета шариков в образцах спор в автоклаве выявляли от двух раз по 10 до трети спор на микролитр.Окрашивание образцами спор в автоклаве бромидом этидия показало более высокую среднюю интенсивность флуоресценции, чем окрашивание неавтоклавных спор, что указывает на большее окрашивание генетического материала. Поверхность спор автоклава в сочетании с меченым APC антителом к интерлейкину 10 показала большую эффективность связывания по сравнению с неавтоклавными спорами. Наличие спор, проницаемых для бромида этидия, указывало на возможное присутствие проросших спор в общей популяции.На основании анализа методом проточной цитометрии было отмечено, что флуоресцентное антитело показало более высокий процент связывания со спящими спорами по сравнению с проросшими. Более того, по мере увеличения концентрации флуоресцентных антител наблюдалось увеличение процента связанных спор и средней интенсивности флуоресценции. Важно выполнить тщательную гомогенизацию текущих шариков, чтобы обеспечить точные показания с помощью проточной цитометрии и точного подсчета спор.Стандартизируя концентрацию антигенов, прикрепленных к спорам, канадские исследования анализируют использование спор в качестве вакцинных антител.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Определение жирных кислот в<em&gt; Эхиноцереус бациллы</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Рекомбинантная экспрессия белков, кристаллизация и биофизические исследования<em&gt; Bacillus</em&gt; -содержащая нуклеотидная пирофосфорилаза, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Подготовка гидролизат кератина от куриные перья и его применение в косметике

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Корректура и ДНК ремонт пробирного анализа единичных нуклеотидных расширение и MALDI-TOF масс-спектрометрии с помощью

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Анализ сворачивание белков, транспорта и деградации в живых клетках, радиоактивных пульс Чейз

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Изучение метаболизма шести системных инсектицидов в недавно созданной культуре подвески клеток, полученных из чая(Камелия Sinensis L.) Листья

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Без этикетки Иммунопрецитис Масса Спектромтертрия Рабочий процесс для крупномасштабного ядерного взаимодействия Профилирование

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Протокол поэтапного дозирования для увеличения пропускной записи в label-Free Impedance основе GPCR анализы

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Анализ урацил-ДНК-гликозилазы с помощью матрицы лазерной десорбции/ионизации Масс-спектрометрии времени пролета

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Анализ взаимодействия флуоресцентно-меченых белков с искусственными фосфолипидными микровезикулами с помощью количественной проточной цитометрии

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...