Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Denna studie finansierades delvis av Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001; Governo do Estado do Amazonas med resurser från Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Författarna tackar programmet för teknisk utveckling i verktyg för hälsa PDTIS-FIOCRUZ för användningen av dess faciliteter.

Se materialtabellen för detaljer relaterade till alla material, instrument och programvara som används i detta protokoll.
1. Inställning av flödescytometri
<ol><li>Justering av optiska parametrar för flödescytometer kopplad till en dator<ol><li>Logga in på Cytometer-programvaran.</li>
		<li>Från arbetsytan för programvara väljer du Cytometer | Starta och vänta några minuter | Rengör läge | Sittvätskor. OBS:...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Traditionella metoder, såsom platträkning av kolonier, är inte bara tidskrävande, utan kräver också livskraftiga celler och tillåter inte kvantifiering av inaktiverade sporer5. Petroff-Hausser-kammaren är en alternativ metod, men den kräver en erfaren mikroskopist för att utföra den. Flödescytometri har visat sig vara ett användbart alternativ för detta ändamål.
Genovese et al.12 beskrev användningen av flödescytometri för kvan...

Bacillus subtilis är en stavformad, grampositiv bakterie som kan producera vilande sporer när miljöförhållandena inte tillåter celltillväxt1. Sporer är extremt stabila cellformer och sporer från flera arter, inklusive B. subtilis, används i stor utsträckning som probiotika för användning av människor och djur2. På grund av dess resistens och säkerhetsegenskaper har sporen av B. subtilis, som uppvisar heterologa proteiner, föreslagits som ett slemhinneadjuvans, ett vaccinleveranssystem och en enzymimmobiliseringsplattform 3,4.
För att få sporer från B. subtilis är det nödvändigt att utsätta den för näringsbrist med hjälp av ett speciellt odlingsmedium. Efter att ha erhållit och renat dessa sporer måste man kvantifiera dem för att förbättra testeffektiviteten 5,6. Således tillämpas vissa metoder för att analysera koncentrationen av de erhållna sporerna. Plåträkning och en Petroff-Hausser-kammare, även känd som en räknekammare, kan användas. Den senare utvecklades ursprungligen för att bestämma koncentrationen av blodkroppar; Det är dock möjligt att använda det inom mikrobiologi för sporräkning 7,8. Trots att det är standardmetoden som används för cellräkning är läsningen mödosam eftersom denna metod är helt manuell och dess noggrannhet beror på operatörens erfarenhet.
Flödescytometribaserade (FC) analyser har tidigare föreslagits som snabba, tillförlitliga och specifika metoder för att detektera märkta celler av Bacillus spp. Användningen av flödescytometri som räknar pärlor har garanterat reproducerbarhet vid cellräkning vid rutinundersökningar (absolut antal CD4- och CD8 T-lymfocyter) och vid utvecklingen av forskning som involverar partiklar som kan detekteras och räknas med hjälp av flödescytometri9. Godjafrey och Alsharif föreslog att man skulle använda sig av att räkna pärlor för FC-kvantifiering av omärkta sporer10. Användningen av flödescytometri beskrevs för övervakning av sporulation i Bacillus spp. genom märkning av spor-DNA 10,11,12,13. I en annan studie användes FC för att utvärdera mängden fluorescerande märkta proteiner på sporytan15.
Denna studie syftade till att använda kommersiella räknepärlor för att säkerställa en standard för reproducerbarhet med avseende på händelseräkning med hjälp av flödescytometri. Häri föreslår vi användning av räknepärlor för cellräkning i FC för att förfina sporräkningen och utvärdera kopplingseffektiviteten hos fluorescerande märkta antikroppar på sporytan.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Sporerna av Bacillus subtilis har redan föreslagits för olika biotekniska och immunologiska tillämpningar; Det finns dock ett ökande behov av att utveckla metoder som förbättrar detektionen av antigener immobiliserade på ytan av sporer tillsammans med deras kvantifiering. Flödescytometribaserade analyser har tidigare föreslagits som snabba, tillförlitliga och specifika metoder för att detektera märkta celler av B. subtilis. Häri föreslår vi användning av flödescytometri för att utvärdera visningseffektiviteten hos en fluorescerande antikropp (FA) på sporens yta och kvantifiera antalet sporer med hjälp av räknande pärlor. 
För detta använde vi etidiumbromid som DNA-markör och en allophycocyanin (APC)-märkt antikropp, som var kopplad till sporerna, som ytmarkör. Kvantifieringen av sporer utfördes med hjälp av räknepärlor eftersom denna teknik visar hög noggrannhet vid detektion av celler. De märkta sporerna analyserades med hjälp av en flödescytometer, som bekräftade kopplingen. Som ett resultat visade det sig att DNA-märkning förbättrade noggrannheten vid kvantifiering med flödescytometri för detektion av grodda sporer. Det observerades att etidiumbromid inte kunde märka vilande sporer; Denna teknik ger dock en mer exakt bestämning av antalet sporer med fluorescerande protein kopplat till deras yta, vilket hjälper till att utveckla studier som fokuserar på användningen av sporer som en bioteknisk plattform i olika applikationer.

I autoklaverade sporprover (AS) detekterades 2 × 103 sporer/μl och 1 × 103 sporer/μl med hjälp av räknekulor respektive Petroff-Hausser-metoden (figur 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Figur 1: Allmänt schema för kvantifiering av sporer. (A) Sporer märkta med EtBr och (B) du...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Detta protokoll fokuserar på användningen av flödescytometri och räkning av pärlor för att kvantifiera bakteriesporer märkta med etidiumbromid. Metoden är också effektiv för att analysera den kovalenta bindningen av proteiner på ytan av intakta sporer.

Förbättring av Bacillus subtilis , sporräkning och etikettanalys i flödescytometri

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Cellräknare av Bacillus subtilis-sporer med traditionella metoder kan vara en mödosam uppgift, eftersom dessa metoder kan vara helt manuella och deras noggrannhet beror på operatörens erfarenhet. Detta protokoll gör det möjligt att räkna upp vilande och groende sporer. Dessutom gör tekniken det också möjligt att bestämma hur många procent fluorescerande proteiner som klarar sig på dess yta.Med tanke på installationssteget som finns i detta protokoll demonstreras visionen med anläggningar och den tekniska förståelsen och detaljerna i omsorgen i detta utförande. Börja med att logga in på cytometerns programvara. I programvaruarbetsytan väljer du Cytometer, följt av Fluidisk start.Välj sedan Rengöringslägen. Och slutligen, initiera SIT Flush. Ta 50 mikroliter autoklavsporer och inkubera dem med etidiumbromid med en utspädningsfaktor på 0,05 volymprocent i 30 minuter skyddade från ljus.Tvätta sporerna tre gånger med PBS genom att centrifugera vid 17, 949 G i 10 minuter och återsuspendera i PBS. Tillsätt sedan 10 mikroliter pärlor enligt tillverkarens rekommendationer för utspädning och analysera provet med hjälp av en flödescytometer. Definiera regleringsstrategin baserat på partiklarnas morfometriska egenskaper och fluorescensegenskaper med den negativa kontrollen som referens.Blanda sedan röret försiktigt. Fäst den på flödescytometersonden och klicka på Förvärva. För att ställa in lasereffekten, gå till parameterfliken i cytometerfönstret, justera framåtspridningen till 375 och sidospridningen till 275.Välj sedan tröskelfliken och ställ in den på 500. Analysera sedan det färgfria provet som endast innehåller sporer för att eliminera autofluorescens. På parameterfliken justerar du filterdetektorns tres spänningar till 603 och filterdetektor fems spänningar till 538 för att skilja mellan negativa och positiva populationer med hjälp av fluorescens i kontrollerna.Klicka sedan på Kompensation och ställ in filterdetektorn 5 x 3 inställningsoffset till en. Om du vill konfigurera enheten för förvärv väljer du Experiment, väljer experimentlayout och ställer in förvärvet på 30 000 händelser. Efter att ha justerat parametrarna, skaffa data för proverna som är märkta och innehåller pärlor i flödescytometern.Centrifugera 50 mikroliter sporer vid 17, 949 G i 10 minuter. Slamma sedan sporerna igen med 25 mikroliter 1-etyl-3-3-dimetylaminopropylkarbodiimid och inkubera i 15 minuter. Tillsätt sedan 25 mikroliter N-hydroxisulfosuccinimid i en koncentration av 50 millimolar till sporsuspensionen.Inkubera sporsuspensionen i rumstemperatur i 30 minuter. Tvätta sporerna tre gånger med PBS genom centrifugering som visats tidigare. Tillsätt fluorescerande protein till proverna och inkubera över natten vid 15 grader Celsius.Tillsätt 10 milligram per ml etidiumbromid utspädd vid 1 till 50 och låt sedan proverna ligga på is i en timme, skyddade från ljus. Efter att ha tvättat sporerna och definierat grindarna som visas tidigare, ändra parametrarna för filterdetektor tre på x-axeln och filterdetektor fem på Y-axeln i punktdiagrammet. Metoden med att räkna pärlor detekterade två gånger 10 till den tredje sporen per mikroliter i autoklavsporprover.En etidiumbromidfärgning av autoklavsporprover visade högre genomsnittlig fluorescensintensitet än färgning av icke-autoklaverade sporer, vilket tyder på större färgning av genetiskt material. Autoklavens sporyta, tillsammans med APC-märkt, anti-human interleukin 10-antikropp, visade större kopplingseffektivitet jämfört med de icke-autoklaverade sporerna. Förekomsten av sporer permeabla för etidiumbromid indikerade möjlig förekomst av grodda sporer i den totala populationen.Baserat på flödescytometrianalyserna observerades att den fluorescerande antikroppen uppvisade en högre andel koppling till de vilande sporerna jämfört med de grodda. Dessutom, när koncentrationen av fluorescerande antikroppar ökade, observerades en ökning av andelen kopplade sporer och genomsnittlig fluorescensintensitet. Det är viktigt att utföra en grundlig homogenisering av de nuvarande pärlorna för att säkerställa exakta avläsningar genom flödescytometri och noggrann räkning av sporer.Genom att standardisera koncentrationen av antigener som är fästa vid sporer analyserar kanadensiska studier användningen av sporer som vaccinantikroppar.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifiering av fettsyror i<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Rekombinant Proteinuttryck, Kristallisation och Biofysiska Studier av a<em&gt; Bacillus</em&gt; -konserverad nukleotidpyrofosforylas, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Beredning av Keratin hydrolysat från kyckling fjädrar och dess tillämpning i kosmetika

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Korrekturläsning och DNA reparation Assay använder Single Nucleotide förlängning och MALDI-TOF-masspektrometri.

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analys av proteinveckning, Transport och nedbrytning i levande celler av radioaktiva puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Studie om metabolismen av sex systemiska insekticider i en nyetablerad cell SUS pension kultur härledd från Tea (Camellia sinensis L.) Lämnar

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Label-fri immunoprecipitation masspektrometri arbetsflöde för storskalig nukleär Interactome profilering

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Stegvis doseringsprotokoll för ökat dataflöde i etikettfria Impedansbaserade GPCR-analyser

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glykosylasanalys av Matrix-assisterad laserdesorption/joniseringStid för flygning Masspektrometrianalys

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Analysera interaktionen mellan fluorescerande märkta proteiner med konstgjorda fosfolipidmikrovesiklar med hjälp av kvantitativ flödescytometri

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...