Name: improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry
Uploaded: 2023-06-30T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Bu çalışma kısmen Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES)-Finance Code 001 tarafından finanse edilmiştir; Governo do Estado do Amazonas, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas-FAPEAM'ın kaynaklarıyla Amazonas; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Yazarlar, Sağlık Araçlarında Teknolojik Gelişme Programı'na tesislerinin kullanımı için PDTIS-FIOCRUZ'a teşekkür eder.

Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, aletler ve yazılımlarla ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Akış sitometrisi ayarı
<ol><li>Bir bilgisayara bağlı akış sitometresinin optik parametrelerinin hizalanması<ol><li>Sitometre yazılımına giriş yapın.</li>
		<li>Yazılım çalışma alanından Sitometre | Başlatın ve birkaç dakika bekleyin | Temiz mod | Sıvıları oturtun. NOT: Numune...

<ol>
	<li>McKenney, P. T., Driks, A., Eichenberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Bacillus+subtilis+endospore:+assembly+and+functions+of+the+multilayered+coat.">The Bacillus subtilis endospore: assembly and functions of the multilayered coat.</a> Nature Reviews. Microbiology. 11 (1), 33-44 (2013).</li><li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+probiotics.">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiology. 28 (2), 214-220 (2011).</li><li>Ricca, E., Baccigalupi, L., Cangiano, G., De Felice, M., Isticato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+vaccine+delivery+by+non-recombinant+spores+of+Bacillus+subtilis.">Mucosal vaccine delivery by non-recombinant spores of Bacillus subtilis.</a> Microbial Cell Factories. 13, 115 (2014).</li><li>Falahati-Pour, S. K., Lotfi, A. S., Ahmadian, G., Baghizadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+recombinant+organophosphorus+hydrolase+on+spores+of+Bacillus+subtilis.">Covalent immobilization of recombinant organophosphorus hydrolase on spores of Bacillus subtilis.</a> Journal of Applied Microbiology. 118 (4), 976-988 (2015).</li><li>Harrold, Z., Hertel, M., Gorman-Lewis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Bacillus+subtilis+spore+isolation+and+quantifying+spore+harvest+purity.">Optimizing Bacillus subtilis spore isolation and quantifying spore harvest purity.</a> Journal of Microbiological Methods. 87 (3), 325-329 (2011).</li><li>Nicholson, W. L., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation,+germination+and+outgrowth.">Sporulation, germination and outgrowth.</a> Molecular biological methods for Bacillus. , (1990).</li><li>Mora-Uribe, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+adherence+of+Clostridium+difficile+spores:+the+integrity+of+the+outermost+layer+affects+adherence+properties+of+spores+of+the+epidemic+strain+R20291+to+components+of+the+intestinal+mucosa.">Characterization of the adherence of Clostridium difficile spores: the integrity of the outermost layer affects adherence properties of spores of the epidemic strain R20291 to components of the intestinal mucosa.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 6, 99 (2016).</li><li>Paidhungat, M., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ger+proteins+in+nutrient+and+nonnutrient+triggering+of+spore+germination+in+Bacillus+subtilis.">Role of ger proteins in nutrient and nonnutrient triggering of spore germination in Bacillus subtilis.</a> Journal of Bacteriology. 182 (9), 2513-2519 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C., Spritzler, J., Wilkening, C., Nicholson, J., O'Gorman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.+Site+Investigators+and+The+NIAID+DAIDS+New+Technologies+Evaluation+Group.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Site Investigators and The NIAID DAIDS New Technologies Evaluation Group.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Godfrey, A., Alsharif, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+enumeration+of+viable+spores+by+flow+cytometry.">Rapid enumeration of viable spores by flow cytometry.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Karava, M., Bracharz, F., Kabisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+isolation+of+Bacillus+subtilis+spores+using+cell+sorting+and+automated+gating.">Quantification and isolation of Bacillus subtilis spores using cell sorting and automated gating.</a> PLoS ONE. 14 (7), e021989 (2019).</li><li>Genovese, M., Poulain, E., Doppler, F., Toussaint, R., Boyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+spore+enumeration+using+flow+cytometry:+A+proof+of+concept+for+probiotic+application.">Bacillus spore enumeration using flow cytometry: A proof of concept for probiotic application.</a> Journal of Microbiological Methods. 190, 106336 (2021).</li><li>Trunet, C., Ngo, H., Coroller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+permeabilization+and+activity+recovery+of+Bacillus+spores+in+adverse+conditions+for+growth.">Quantifying permeabilization and activity recovery of Bacillus spores in adverse conditions for growth.</a> Food Microbiology. 81, 115-120 (2019).</li><li>Tehri, N., Kumar, N., Raghu, H., Vashishth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+bacterial+spore+germination.">Biomarkers of bacterial spore germination.</a> Annals of Microbiology. 68, 513-523 (2018).</li><li>Isticato, R., Ricca, E., Baccigalupi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+adsorption+as+a+nonrecombinant+display+system+for+enzymes+and+antigens.">Spore adsorption as a nonrecombinant display system for enzymes and antigens.</a> Journal of Visualized Experiments. 145, e59102 (2019).</li><li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killed+Bacillus+subtilis+spores+as+a+mucosal+adjuvant+for+an+H5N1+vaccine.">Killed Bacillus subtilis spores as a mucosal adjuvant for an H5N1 vaccine.</a> Vaccine. 30 (22), 3266-3277 (2012).</li></ol>

Kolonilerin plaka sayımı gibi geleneksel yöntemler sadece zaman alıcı olmakla kalmaz, aynı zamanda canlı hücrelere ihtiyaç duyar ve inaktive edilmiş sporların miktarının belirlenmesine izin vermez5. Petroff-Hausser odası alternatif bir metodolojidir, ancak bunu gerçekleştirmek için deneyimli bir mikroskopist gerektirir. Akış sitometrisinin bu amaç için yararlı bir alternatif olduğu kanıtlanmıştır.
Genovese ve ark.12 , <...

Bacillus subtilis, çevresel koşullar hücre büyümesine izin vermediğinde hareketsiz sporlar üretebilen, çubuk şeklinde, gram pozitif bir bakteridir1. Sporlar son derece kararlı hücre formlarıdır ve B. subtilis de dahil olmak üzere çeşitli türlerin sporları, insan ve hayvan kullanımı için probiyotik olarak yaygın olarak kullanılmaktadır2. Direnç ve güvenlik özellikleri nedeniyle, heterolog proteinler sergileyen B. subtilis sporu, bir mukozal adjuvan, bir aşı dağıtım sistemi ve bir enzim immobilizasyon platformu olarak önerilmiştir 3,4.
 B. subtilis'ten spor elde etmek için, özel bir kültür ortamı kullanarak besin yoksunluğuna maruz bırakmak gerekir. Bu sporları elde ettikten ve saflaştırdıktan sonra, test verimliliğini artırmak için bunları ölçmek gerekir 5,6. Bu nedenle, elde edilen sporların konsantrasyonunu analiz etmek için belirli yöntemler uygulanır. Plaka sayma ve sayma odası olarak da bilinen Petroff-Hausser odası kullanılabilir. İkincisi başlangıçta kan hücrelerinin konsantrasyonunu belirlemek için geliştirilmiştir; Ancak mikrobiyoloji alanında spor sayımı için kullanmak mümkündür 7,8. Hücre sayımı için kullanılan standart yöntem olmasına rağmen, bu yöntem tamamen manuel olduğundan ve doğruluğu operatörün deneyimine bağlı olduğundan okuma zahmetlidir.
Akış sitometrisi tabanlı (FC) analizler daha önce Bacillus spp.'nin etiketli hücrelerini tespit etmek için hızlı, güvenilir ve spesifik yaklaşımlar olarak önerilmiştir. Akış sitometrisi sayım boncuklarının kullanımı, rutin muayenelerde (CD4 ve CD8 T lenfositlerinin mutlak sayımı) hücre sayımında ve akış sitometrisi9 kullanılarak tespit edilebilen ve sayılabilen partikülleri içeren araştırmaların geliştirilmesinde tekrarlanabilirliği garanti etmiştir. Godjafrey ve Alsharif, etiketlenmemiş sporların FC miktar tayini için sayma boncuklarının kullanılmasını önerdi10. Bacillus spp.'de sporülasyonun izlenmesi için akım sitometrisinin kullanımı tanımlanmıştır.spor DNA'sınıetiketleyerek 10,11,12,13. Yine başka bir çalışma, spor yüzeyindeki floresan etiketli proteinlerin miktarını değerlendirmek için FC'yi kullandı15.
Bu çalışma, akış sitometrisi kullanılarak olay sayımına göre bir tekrarlanabilirlik standardı sağlamak için ticari sayma boncuklarını kullanmayı amaçlamıştır. Burada, spor sayımını iyileştirmek ve spor yüzeyindeki floresan etiketli antikorların bağlanma verimliliğini değerlendirmek için FC'de hücre sayımı için sayma boncuklarının kullanılmasını öneriyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) (EDC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>341006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(N-hydroxysuccinimide) (NHS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human fluorescent antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>501410</td>
			<td>APC anti-human IL-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse fluorescent antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td>Alexa Fluor Plus 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto II</td>
			<td>&#160;BD</td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit (use with BD FACSDiva software v 6.x)</td>
			<td>BD</td>
			<td>642412</td>
			<td>Quality control reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software v. 6.1.3</td>
			<td>BD</td>
			<td>643629</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge MegaFuge 8R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75007213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>340334</td>
			<td>TruCount Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent Microsope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Ludwig Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Microtubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352008</td>
			<td>5 mL polystyrene tube, 12 x 75 mm, without lid, non-sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improvement of bacillus subtilis spore enumeration and label analysis in flow cytometry

Bacillus subtilis'in sporları, farklı biyoteknolojik ve immünolojik uygulamalar için zaten önerilmiştir; Bununla birlikte, sporların yüzeyinde hareketsiz hale getirilen antijenlerin miktar tayinleri ile birlikte tespitini iyileştiren metodolojilerin geliştirilmesine artan bir ihtiyaç vardır. Akış sitometrisine dayalı analizler daha önce B. subtilis'in etiketli hücrelerini tespit etmek için hızlı, güvenilir ve spesifik yaklaşımlar olarak önerilmiştir. Burada, sporun yüzeyindeki bir floresan antikorun (FA) görüntüleme verimliliğini değerlendirmek ve sayma boncukları kullanarak spor sayısını ölçmek için akış sitometrisinin kullanılmasını öneriyoruz.
Bunun için DNA markörü olarak etidyum bromür ve yüzey markörü olarak sporlara bağlı allofikosiyanin (APC) etiketli antikor kullandık. Sporların miktarının belirlenmesi, sayma boncukları kullanılarak gerçekleştirildi, çünkü bu teknik hücrelerin tespitinde yüksek doğruluk gösteriyor. Etiketli sporlar, eşleşmeyi doğrulayan bir akış sitometresi kullanılarak analiz edildi. Sonuç olarak, DNA etiketlemesinin, çimlenmiş sporların tespiti için akış sitometrisi ile miktar tayininin doğruluğunu geliştirdiği gösterilmiştir. Etidyum bromürün hareketsiz sporları etiketleyemediği gözlemlendi; Bununla birlikte, bu teknik, yüzeylerine bağlı floresan proteini ile sporların sayısının daha kesin bir şekilde belirlenmesini sağlar, böylece sporların farklı uygulamalarda biyoteknolojik bir platform olarak kullanımına odaklanan çalışmaların geliştirilmesine yardımcı olur.

Otoklavlanmış spor (AS) örneklerinde sırasıyla sayım boncukları ve Petroff-Hausser yöntemi kullanılarak 2 × 103 spor/μl ve 1 × 103 spor/μl tespit edildi (Şekil 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65141/65141fig01.jpg"> Şekil 1: Sporların miktarının belirlenmesinin genel şeması. (A) EtBr ile etiketlenmiş ...

Watch this Scientific Journal Video about Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry at JoVE.com

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Bu protokol, etidyum bromür ile etiketlenmiş bakteri sporlarını ölçmek için akış sitometrisinin kullanımına ve boncuk saymaya odaklanır. Yöntem ayrıca, bozulmamış sporların yüzeyindeki proteinlerin kovalent bağlanmasını analiz etmek için de etkilidir.

Flow Sitometride Bacillus subtilis Spor Sayımı ve Etiket Analizinin İyileştirilmesi

The spores of Bacillus subtilis have already been proposed for different biotechnological and immunological applications; however, there is an increasing ...

Geleneksel yöntemler kullanılarak Bacillus subtilis sporlarının hücre sayacı zahmetli bir iş olabilir, çünkü bu yöntemler tamamen manuel olabilir ve doğrulukları operatörün deneyimine bağlı olabilir. Bu protokol, hareketsiz ve çimlenen sporların sayımını mümkün kılar. Ek olarak, teknik, yüzeyindeki floresan proteinlerin başa çıkma yüzdesini belirlemeyi de mümkün kılar.Bu protokolde yer alan kurulum adımı göz önüne alındığında, vizyon, tesisler ve teknik anlayış ve bu uygulamadaki özenin detayı ile gösterilmektedir. Sitometre yazılımına giriş yaparak başlayın. Yazılım çalışma alanında Sitometre'yi ve ardından Fluidic Startup'ı seçin.Ardından Temizleme Modları'nı seçin. Ve son olarak, SIT Flush'ı başlatın. 50 mikrolitre otoklav sporu alın ve bunları ışıktan korunarak 30 dakika boyunca hacimce% 0.05 seyreltme faktöründe etidyum bromür ile inkübe edin.Sporları 17.949 G'de 10 dakika santrifüjleyerek ve PBS'de tekrar süspanse ederek PBS ile üç kez yıkayın. Ardından, üreticinin seyreltme önerilerini izleyerek 10 mikrolitre boncuk ekleyin ve numuneyi bir akış sitometresi kullanarak analiz edin. Negatif kontrolü referans olarak kullanarak parçacıkların morfo-metrik ve floresan özelliklerine dayalı geçit stratejisini tanımlayın.Ardından tüpü yavaşça karıştırın. Akış sitometresi probuna takın ve Al'a tıklayın. Lazer gücünü ayarlamak için, sitometre penceresindeki parametreler sekmesine gidin, ileri saçılımı 375'e ve yan saçılımı 275'e ayarlayın.Ardından eşik sekmesini seçin ve 500 olarak ayarlayın. Ardından, otofloresansı ortadan kaldırmak için yalnızca sporları içeren boyasız numuneyi analiz edin. Parametre sekmesinde, kontrollerde floresan kullanarak negatif ve pozitif popülasyonları ayırt etmek için filtre dedektörü üçünün voltajlarını 603'e ve filtre dedektörü beşin voltajlarını 538'e ayarlayın.Ardından Telafiye'ye tıklayın ve filtre dedektörü 5'e 3 kurulum ofsetini bire ayarlayın. Cihazı alım için yapılandırmak üzere Deneme'yi seçin, deneme düzenini seçin ve alımı 30.000 olay olarak ayarlayın. Parametreleri ayarladıktan sonra, akış sitometresinde etiketlenmiş ve boncuk içeren numuneler için veri alın.50 mikrolitre sporu 17.949 G'de 10 dakika santrifüjleyin. Daha sonra, 25 mikrolitre 1-etil-3-3-dimetilaminopropil karbodiimid kullanarak sporları tekrar askıya alın ve 15 dakika inkübe edin. Daha sonra, spor süspansiyonuna 50 milimolar konsantrasyonda 25 mikrolitre N-hidroksisülfosüksinimid ekleyin.Spor süspansiyonunu oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Sporları daha önce gösterildiği gibi santrifüj ederek PBS ile üç kez yıkayın. Numunelere floresan protein ekleyin ve gece boyunca 15 santigrat derecede inkübe edin.1 ila 50 arasında seyreltilmiş etidyum bromür mililitresine 10 miligram ekleyin, ardından numuneleri ışıktan koruyarak bir saat buz üzerinde bırakın. Sporları yıkadıktan ve kapıları daha önce gösterildiği gibi tanımladıktan sonra, nokta grafiğinin x ekseninde filtre dedektörü üç ve Y ekseninde filtre dedektörü beş parametrelerini değiştirin. Sayım boncukları yöntemi, otoklav spor örneklerinde mikrolitre başına iki kez 10 ila üçüncü spor tespit etti.Otoklav spor örneklerinin etidyum bromür boyaması, otoklavlanmamış sporların boyanmasından daha yüksek ortalama floresan yoğunluğu gösterdi ve bu da genetik materyalin daha fazla boyandığını gösterdi. Otoklav spor yüzeyi, APC etiketli, anti-insan interlökin 10 antikoru ile birleştiğinde, otoklavlanmamış sporlara kıyasla daha fazla eşleşme etkinliği gösterdi. Etidyum bromüre geçirgen sporların varlığı, toplam popülasyonda çimlenmiş sporların olası varlığını göstermiştir.Akış sitometrisi analizlerine dayanarak, floresan antikorun çimlenmiş olanlara kıyasla hareketsiz sporlarla daha yüksek bir bağlanma yüzdesi gösterdiği gözlendi. Ayrıca, floresan antikorların konsantrasyonu arttıkça, birleştirilmiş sporların yüzdesinde ve ortalama floresan yoğunluğunda bir artış gözlenmiştir. Akış sitometrisi ve sporların doğru sayımı yoluyla hassas okumalar sağlamak için mevcut boncukların kapsamlı bir homojenizasyonunun yapılması önemlidir.Spora bağlı antijenlerin konsantrasyonunu standartlaştıran Kanada çalışmaları, sporun aşı antikorları olarak kullanımını analiz etmektedir.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Improvement of Bacillus subtilis Spore Enumeration and Label Analysis in Flow Cytometry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Yağ Asitlerinin Tanımlanması içinde<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Birliğin Rekombinant Protein Ekspresyonu, Kristalleştirilmesi ve Biyofiziksel Araştırmaları<em&gt; Bacillus</em&gt; - Konserve Nükleotid Pyrophosphorylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Keratin hidrolizat tavuk tüyleri ve kozmetik kendi uygulamasında hazırlanması

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Proofreading ve DNA onarım tahlil tek nükleotid uzama ve MALDI-TOF Kütle spektrometresi analizi ile

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Protein katlanması, taşıma ve canlı hücreler radyoaktif darbe Chase tarafından bozulması Analizi

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling

Büyük Ölçekli Nükleer Etkileşimom Profilleme için Etiketsiz İmmünoprekütle Spektrometresi İş Akışı

Immunoaffinity purification mass spectrometry (IP-MS) has emerged as a robust quantitative method of identifying protein-protein interactions. This ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Label-Free Empedans Tabanlı GPCR Denemelerinde Artırılmış İş İlerletme Protokolü

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Matris Yardımlı Lazer Desorpsiyonu/İyonizasyon ile Urasil-DNA Glikozilaz Testi Uçuş Süresi Kütle Spektrometrisi Analizi

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

Floresan Etiketli Proteinlerin Yapay Fosfolipid Mikrovezikülleri ile Etkileşiminin Kantitatif Akış Sitometrisi Kullanılarak Analiz Edilmesi

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...