Name: noninvasive intratracheal lipopolysaccharide instillation in mice
Uploaded: 2023-03-31T13:40:00
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इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (संख्या: 81903902), चीन पोस्टडॉक्टरल साइंस फाउंडेशन (संख्या: 2019 एम 663457), सिचुआन विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम (संख्या: 2020वाईजे0172), और टीसीएम के चेंगदू विश्वविद्यालय के जिंगलिन स्कॉलर रिसर्च प्रीमोशन प्रोजेक्ट (संख्या: QJRC2022053) द्वारा समर्थित किया गया था।

पशु प्रयोग प्रोटोकॉल की समीक्षा की गई और चेंगदू यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन (रिकॉर्ड नंबर 2021-11) की प्रबंधन समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। वर्तमान अध्ययन के लिए नर सी 57 / बीएल चूहों (20-25 ग्राम, ...

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	<li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+human+amnion+epithelial+cells+through+endotracheal+instillation+against+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+mice.">Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice.</a> Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).</li><li>Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+lung+injury:+A+clinical+and+molecular+review.">Acute lung injury: A clinical and molecular review.</a> Archives of Pathology and Lab Medicine. 140 (4), 345-350 (2016).</li><li>Ware, L. B., Matthay, M. 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(149), e59999 (2019).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT6+inhibits+ferroptosis+and+alleviates+acute+lung+injury+by+regulating+P53/SLC7A11+pathway.">STAT6 inhibits ferroptosis and alleviates acute lung injury by regulating P53/SLC7A11 pathway.</a> Cell Death &amp; Disease. 13 (6), 530 (2022).</li><li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+operational+tolerance+and+generation+of+regulatory+cells+after+intratracheal+delivery+of+alloantigen+combined+with+nondepleting+anti-CD4+monoclonal+antibody.">Induction of operational tolerance and generation of regulatory cells after intratracheal delivery of alloantigen combined with nondepleting anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 76 (9), 1305-1314 (2003).</li><li>Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+mammalian+target+of+rapamycin+(mTOR)+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide+(LPS)+-induced+acute+lung+injury+(ALI).">Activation of mammalian target of rapamycin (mTOR) in a murine model of lipopolysaccharide (LPS) -induced acute lung injury (ALI).</a> Peking Union Medical College. , (2010).</li><li>Lv, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tenuigenin+ameliorates+acute+lung+injury+by+inhibiting+NF-&#954;B+and+MAPK+signalling+pathways.">Tenuigenin ameliorates acute lung injury by inhibiting NF-&#954;B and MAPK signalling pathways.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. 216, 43-51 (2015).</li><li>Yang, H., Lv, H., Li, H., Ci, X., Peng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oridonin+protects+LPS-induced+acute+lung+injury+by+modulating+Nrf2-mediated+oxidative+stress+and+Nrf2-independent+NLRP3+and+NF-&#954;B+pathways.">Oridonin protects LPS-induced acute lung injury by modulating Nrf2-mediated oxidative stress and Nrf2-independent NLRP3 and NF-&#954;B pathways.</a> Cell Communication and Signaling. 17 (1), 62 (2019).</li><li>Im, G. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+acute+lung+injury+mice+model+established+by+intranasal+and+intratracheal+instillation+of+lipopolysaccharide.">Comparison of acute lung injury mice model established by intranasal and intratracheal instillation of lipopolysaccharide.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (02), 222-227 (2022).</li><li>Luckow, B., Lehmann, M. 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प्रारंभ में, हमने श्वासनली19 के स्थान का पता लगाने के लिए मौखिक गुहा के अंदर देखा। हालांकि, इस प्रक्रिया के दौरान, हमने पाया कि सी 57 / बीएल चूहों की श्वासनली संकीर्ण है, जिससे एंडोस्कोप20 ज...

तीव्र फेफड़ों की चोट (एएलआई) एक सामान्य नैदानिक सिंड्रोम है। विभिन्न रोगजनक कारकों के तहत, फेफड़ों के उपकला कोशिकाओं और संवहनी एंडोथेलियल कोशिकाओं के शारीरिक अवरोध के विघटन से वायुकोशीय पारगम्यता में वृद्धि होती है, जिससे फेफड़ों के अनुपालन, फुफ्फुसीय एडिमा और गंभीर हाइपोक्सिमिया1 में कमी आती है। तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (एआरडीएस) एएलआई का सबसे गंभीर रूप है। अनियंत्रित सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव क्षति को एएलआई और अधिक गंभीर एआरडीएस2 का मुख्य कारण माना जाता है। जब आघात के कारण वायुकोशीय उपकला कोशिकाएं सीधे घायल हो जाती हैं, तो वायुकोशीय मैक्रोफेज की भड़काऊ प्रतिक्रिया श्रृंखला सक्रिय हो जाती है, जिससे फेफड़ों में सूजनहो जाती है। विश्व स्तर पर, प्रति वर्ष तीव्र एआरडीएस वाले 3 मिलियन से अधिक रोगी हैं, और वे गहन देखभाल इकाई प्रवेश के लगभग 10% के लिए जिम्मेदार हैं; इसके अतिरिक्त, गंभीर मामलों में मृत्यु दर 46% 4,5,6 जितनी अधिक है। इसलिए, इसके रोगजनन का अध्ययन करने के लिए एएलआई का एक उपयुक्त पशु मॉडल स्थापित करने की आवश्यकता है। एएलआई के अध्ययन में माउस सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला प्रयोगात्मक जानवर है क्योंकि इसका श्वसन पथ एएलआई अध्ययन के लिए मानव श्वसन पथ को अच्छी तरह से अनुकरण कर सकता है। इसके अलावा, एएलआई बड़े पैमाने पर भड़काऊ कोशिका घुसपैठ, फुफ्फुसीय संवहनी पारगम्यता में वृद्धि और फुफ्फुसीय एडिमा के रूप में प्रकट होता है। सीरम में भड़काऊ साइटोकिन्स में परिवर्तन और फेफड़ों के सूखे-गीले वजन अनुपात एएलआई7 की डिग्री को दर्शाते हैं।
वर्तमान में, चूहों में एलपीएस-प्रेरित एएलआई मॉडलिंग के मुख्य तरीकों में इंट्रानेसल और सर्जिकल श्वासनली इंटुबैशन 8,9 शामिल हैं। यहां, हम नॉनइनवेसिव ऑरोफरीन्जियल इंटुबैशन के माध्यम से एलपीएस को श्वासनली में पहुंचाने के लिए एक नई विधि का प्रस्ताव करते हैं। यह विधि माउस की श्वासनली को खोजने के लिए एक रोशन इंटुबेटर का उपयोग करती है और फिर एलपीएस को श्वासनली और फेफड़े में पहुंचाती है। यह विधि प्रसव की इंट्रानेसल विधि की तुलना में फेफड़ों में एलपीएस को अधिक सटीक रूप से पहुंचाती है। सर्जिकल श्वासनली इंटुबैशन की तुलना में, इस विधि को सर्जरी की आवश्यकता नहीं होती है, घाव पैदा करने से बचता है, और चूहों में दर्द को कम करताहै10. इसलिए, इस विधि का उपयोग ALI के अधिक विश्वसनीय माउस मॉडल को स्थापित करने के लिए किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharide</td>
			<td>MERK</td>
			<td>L4130</td>
			<td>LPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter Syringes</td>
			<td>SHANGHAI GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD</td>
			<td>10028505008124</td>
			<td>To deliver LPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse cannula</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>803-03008-00</td>
			<td>Mouse cannula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse intubation kit</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>903-03027-00</td>
			<td>Including a base, a riser, a intubator, a surgical forceps and some strings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Biosharp life science</td>
			<td>BS-XG-03</td>
			<td>To verify the success of intubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Beijing Chemical Co., China</td>
			<td>20220918</td>
			<td>To anesthetize mice</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive intratracheal lipopolysaccharide instillation in mice

लिपोपॉलेसेकेराइड (एलपीएस) या एंडोटॉक्सिन द्वारा प्रेरित तीव्र फेफड़ों की चोट (एएलआई) माउस मॉडल अभी भी तीव्र फेफड़ों की चोट या तीव्र सूजन के पशु अध्ययन में सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले मॉडल में से एक है। तीव्र फेफड़ों की चोट माउस मॉडल में वर्तमान में सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले तरीके एलपीएस के श्वासनली जलसेक के लिए एलपीएस और ट्रेकियोस्टोमी का एक इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन हैं। हालांकि, पूर्व विधि में फेफड़ों के लक्ष्यीकरण की कमी होती है और अन्य अंगों को नुकसान होता है, और बाद की विधि ऑपरेटिव आघात, संक्रमण जोखिम और कम जीवित रहने की दर को प्रेरित करती है। यहां, हम चूहों में एलपीएस इंस्टिलेशन के लिए एक नॉनइनवेसिव ऑरोफरीन्जियल एंडोट्रेकियल इंटुबैशन विधि की सिफारिश करते हैं। इस विधि में, एलपीएस को एंडोट्रेकियल इंटुबैशन के लिए एक उपकरण की मदद से फेफड़ों में डालने के लिए ऑरोफरीन्जियल गुहा के माध्यम से श्वासनली में गैर-आक्रामक रूप से पेश किया जाता है। यह विधि न केवल फेफड़ों के लक्ष्यीकरण का आश्वासन देती है, बल्कि जानवरों में क्षति और मृत्यु के जोखिम से भी बचती है। हम उम्मीद करते हैं कि यह दृष्टिकोण तीव्र फेफड़ों की चोट के क्षेत्र में व्यापक रूप से उपयोग किया जाएगा।

चूहों में एलपीएस इंस्टिलेशन के लिए प्रस्तावित विधि को एलपीएस इंजेक्शन के 12 घंटे बाद भड़काऊ साइटोकिन टीएनएफ -α और फेफड़ों के सूखे-गीले वजन अनुपात की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करके सत्यापित क...

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Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice

यहां, हम नॉनइनवेसिव ऑरोफरीन्जियल एंडोट्रेकियल इंटुबैशन के माध्यम से इंट्राट्रेकियल लिपोपॉलेसेकेराइड (एलपीएस) वितरण के लिए एक प्रोटोकॉल का प्रस्ताव करते हैं। यह विधि पशु के लिए शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के आघात को कम करती है और एलपीएस को श्वासनली और फिर फेफड़ों तक सटीक रूप से पहुंचाती है।

चूहों में नॉनइनवेसिव इंट्राट्राचेल लिपोपॉलेसेकेराइड इंस्टिलेशन

The acute lung injury (ALI) mouse model induced by lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin is still among the most commonly used models in animal studies of ...

हमारा प्रोटोकॉल श्वासनली से फेफड़ों तक एलपीएस की एक नई गैर-आक्रामक वितरण विधि का प्रस्ताव करता है, अधिक सटीक रूप से। जो लोग पहली बार इस विधि की कोशिश कर रहे हैं, उन्हें श्वासनली की स्थिति खोजने में बहुत प्रयास करना चाहिए। इंटुबैशन प्लेटफॉर्म तैयार करने के लिए, स्ट्रिंग को दो छेदों के माध्यम से पारित करें और इसके सिरों को राइजर के शीर्ष पर छोटे प्रोट्रूशियंस से बांधें।इसके बाद, पेपरक्लिप के प्रत्येक छोर पर दो रबर बैंड संलग्न करें और उन्हें राइजर की पीठ पर टेप करें। अंत में, राइजर को 90 डिग्री के कोण पर आधार पर ठीक करें। कैनुला को एक कैनुला पेन पर इकट्ठा करें, और पेन की लाइट चालू करें।इसके बाद, 70% अल्कोहल का उपयोग करके छोटे सर्जिकल फोर्सेस और पाश्चर पिपेट को कीटाणुरहित करें। परीक्षण यौगिक समाधान तैयार करने के लिए, पीएच 7.2 पीबीएस के एक मिलीलीटर में तीन मिलीग्राम लिपोपॉलेसेकेराइड, या एलपीएस जोड़ें। इसके बाद, सामान्य खारा के एक मिलीलीटर में 10 मिलीग्राम पेंटोबार्बिटल सोडियम घोलें, और 0.45-माइक्रोमीटर सिरिंज फिल्टर का उपयोग करके समाधान को फ़िल्टर करें।इंटुबैशन प्लेटफॉर्म पर एनेस्थेटाइज्ड माउस रखें। फिर स्ट्रिंग के साथ शीर्ष सामने के दांतों को ठीक करें, और रबर बैंड के साथ दो फोरफुट को ठीक करें। चिमटी का उपयोग करके, जीभ को बाहर खींचें और इसे पकड़ें।कैनुला को धीरे-धीरे मुंह के साथ मैंडिबुलर एपिग्लोटिस में धकेलें। कैनुला पेन की रोशनी के साथ श्वासनली का पता लगाएं और धीरे-धीरे इसमें कैनुला डालें। फिर इंटुबैशन पेन को वापस ले लें, कैनुला को अंदर छोड़ दें।पाश्चर पिपेट को कैनुला जोड़ में डालें और सिर दबाएं। सफल एंडोट्राचेल इंटुबैशन के बाद, फ्लैट-हेड माइक्रोसिरिंज का उपयोग करके, प्रवेशनी के माध्यम से तैयार एलपीएस समाधान को तीन मिलीग्राम प्रति किलोग्राम खुराक पर स्थापित करें। एक बार समाप्त होने के बाद, माइक्रोसिरिंज और कैनुला को बाहर निकालें।इंटुबैशन प्लेटफॉर्म से माउस निकालें और इसे ठीक करने के लिए एक अलग पिंजरे में रखें। माउस की श्वसन स्थिति का निरीक्षण करें जब तक कि यह ठीक न हो जाए और होश में न आ जाए। एलपीएस श्वासनली के 12 घंटे बाद, एक भड़काऊ साइटोकिन, टीएनएफ-अल्फा और फेफड़ों के सूखे-गीले वजन अनुपात की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन किया गया और अन्य श्वास विधियों की तुलना की गई।रिक्त नियंत्रण समूह की तुलना में नॉनइनवेसिव ऑरोफरीन्जियल इंटुबैशन समूह में सीरम टीएनएफ-अल्फा का स्तर काफी बढ़ गया था। फेफड़ों के शुष्क-गीले वजन अनुपात में भी वृद्धि हुई थी, जो सर्जिकल श्वासनली इंटुबैशन समूह के समान स्तर तक पहुंच गया था। श्वासनली के स्थान का पता लगाने की प्रक्रिया में श्वासनली को खरोंचना महत्वपूर्ण नहीं है।तकनीक का उपयोग अन्य दवाओं को वितरित करने के लिए भी किया जा सकता है जिन्हें फेफड़ों तक गैर-आक्रामक तरीके से पहुंचने की आवश्यकता होती है।

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