Name: evaluating the immune response of a nanoemulsion adjuvant vaccine against methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) infection
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection at JoVE.com

تم دعم هذا البحث من قبل رقم 2021YFC2302603 من البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين ، ورقم 32070924 و 32000651 من NSFC ، ورقم 2019jcyjA-msxmx0159 من برنامج مشروع مؤسسة العلوم الطبيعية في تشونغتشينغ.

أجريت التجارب على الحيوانات بناء على دليل استخدام ورعاية التجارب وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية وأخلاقيات المختبر التابعة للجامعة الطبية العسكرية الثالثة. تم استخدام إناث الفئران Balb / c ، بعمر 6-8 أسابيع ، في هذه الدراسة. تم الحصول على الحيوانات من مصادر تجارية (انظر جدول المواد</...

<ol>
	<li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus.">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li><li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus:+molecular+characterization,+evolution,+and+epidemiology.">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020 (2018).</li><li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+antibiotic+resistance:+the+most+critical+pathogens.">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310 (2021).</li><li>Goull&#233;, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aluminum+and+vaccines:+Current+state+of+knowledge.">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li><li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+adjuvants:+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity.">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li><li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+safety:+myths+and+misinformation.">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372 (2020).</li><li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion:+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability.">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li><li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines.">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li><li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability.">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052 (2019).</li><li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection.">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212 (2013).</li><li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine.">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li><li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Pharmacopoeia. , 1088 (2020).</li><li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils.">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477 (2022).</li><li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia.">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li><li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme-iron+acquisition+in+fungi.">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li><li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections.">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li><li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W/O+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption.">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li><li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion:+Concepts,+development+and+applications+in+drug+delivery.">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li><li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers.">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li><li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not.">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li><li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+vaccine+technologies.">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li><li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines.">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919 (2018).</li><li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccine+development:+status+and+future.">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li><li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock.">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li></ol>

يلعب IsdB ، وهو بروتين سطحي مثبت على جدار الخلية البكتيرية وينظمه الحديد ، دورا مهما في عملية الحصول على حديدالهيم 15. Hla ، سم ألفا ، هو من بين السموم البكتيرية الأكثر فعالية المعروفة في MRSA ، ويمكن أن تشكل المسام في الخلايا حقيقية النواة وتتداخل مع الالتصاق والخلايا الظه...

المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين (MRSA) هي أحد مسببات الأمراض الانتهازية مع واحدة من أعلى معدلات الإصابة في أجنحة وحدة العناية المركزة(ICU) 1 وأقسام أمراض القلب وأقسام الحروق في جميع أنحاء العالم. تظهر MRSA معدلات عالية من العدوى والوفيات ومقاومة واسعة للأدوية ، مما يمثل صعوبات كبيرة في العلاج السريري2. في قائمة الأولويات العالمية للبكتيريا المقاومة للمضادات الحيوية الصادرة عن منظمة الصحة العالمية (WHO) في عام 2017 ، تم إدراج MRSA في الفئة3 الأكثر أهمية. لذلك هناك حاجة ماسة إلى لقاح ضد عدوى MRSA.
تم استخدام مادة الألومنيوم المساعدة لفترة طويلة ، والآلية المساعدة المساعدة واضحة نسبيا وآمنة وفعالة وجيدة التحمل4. المواد المساعدة الألومنيوم هي حاليا نوع من المواد المساعدة المستخدمة على نطاق واسع. يعتقد عموما أن المستضدات الممتصة على جزيئات ملح الألومنيوم يمكن أن تحسن الاستقرار وتعزز قدرة موقع الحقن على امتصاص المستضدات ، مما يوفر امتصاصا جيدا وإطلاقا بطيئا5. في الوقت الحالي ، يتمثل العيب الرئيسي للمواد المساعدة المصنوعة من الألومنيوم في أنها تفتقر إلى تأثير مساعد أو تظهر فقط تأثيرا مساعدا ضعيفا على بعض المستضدات المرشحة للقاح6. بالإضافة إلى ذلك ، تحفز المواد المساعدة المصنوعة من الألومنيوم تفاعلات فرط الحساسية بوساطة IgE5. لذلك ، من الضروري تطوير مواد مساعدة جديدة لتحفيز استجابة مناعية أقوى.
المواد المساعدة للمستحلب النانوي هي أنظمة تشتت غروية تتكون من الزيت والماء والمواد الخافضة للتوتر السطحي والمواد الخافضة للتوتر السطحي7. بالإضافة إلى ذلك ، فإن المواد المساعدة مستقرة ديناميكيا حراريا ومتباينة الخواص ، ويمكن تعقيمها أو تثبيتها عن طريق الطرد المركزي عالي السرعة ، ويمكن تشكيلها تلقائيا في ظل ظروف تحضير معتدلة. العديد من المواد المساعدة للمستحلب (مثل MF59 ، سلسلة NB001-002 ، سلسلة AS01-04 ، إلخ) موجودة حاليا في السوق أو في مرحلة البحث السريري ، لكن أحجام جسيماتها أكبر من 160 نانومتر8. لذلك ، لا يمكن استغلال مزايا المستحضرات الطبية النانوية (1-100 نانومتر) (أي مساحة سطح محددة كبيرة ، وحجم الجسيمات الصغير ، وتأثير السطح ، والطاقة السطحية العالية ، وتأثير الحجم الصغير ، وتأثير الأنفاق الكمومية الكلية) بشكل كامل. في البروتوكول الحالي ، تم الإبلاغ عن مادة مساعدة جديدة تعتمد على تقنية المستحلب النانوي بحجم قطر 1-100 نانومتر لإظهار نشاط مساعد جيد9. اختبرنا بروتين مستضد لقاح الوحدة الفرعية لإعادة التركيب HI (α-hemolysin mutant [Hla] وعامل تحديد سطح أيون الحديد B [IsdB] الوحدة الفرعية N2 بروتين اندماج الشظايا النشط) ؛ تم وضع سلسلة من الإجراءات لفحص الخصائص الفيزيائية والاستقرار ، وتقييم استجابة الأجسام المضادة المحددة بعد الإعطاء العضلي ، واختبار التأثير الوقائي للقاح باستخدام نموذج العدوى الجهازية للفئران.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5424-Small high speed centrifugeFA-45-24-11</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5424000495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Corning Incorporated, USA</td>
			<td>CLS3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Dimension FastScan</td>
			<td>BRUKER, Germany&#160;</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol lamp</td>
			<td>Shenzhen Yibaxun Technology Co.,China</td>
			<td>YBS-AA-11408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c mice&#160;</td>
			<td>Beijing HFK Bioscience Co. Ltd.&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td>Fuzhou Maixin Biotechnology Development Company,China</td>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad 6.0 microplate reader</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BL21 Competent Cell</td>
			<td>Merck millipore,Germany</td>
			<td>70232-3CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-100G</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>B2064-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5811000398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie bright blue G-250 staining solution</td>
			<td>MIKX,China</td>
			<td>DB236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decolorization solution</td>
			<td>BOSTER,China</td>
			<td>AR0163-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-heating standing-temperature cultivator HH-B11-420</td>
			<td>Shanghai Yuejin Medical Device Factory, China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>Beijing Liuyi Instrument Factory, China</td>
			<td>DYCZ-25D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel image</td>
			<td>Tanon, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione-Sepharose Resin GST</td>
			<td>Mei5bio,China</td>
			<td>affinity chromatography resin</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2SO4</td>
			<td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD,China</td>
			<td>7664-93-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HI recombinant protein</td>
			<td>Third Military Medical University,China</td>
			<td>110-27-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP -Goat Anti-Mouse IgG</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03002R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03003R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03004R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculation loop</td>
			<td>Haimen Feiyue Co.,LTD,China</td>
			<td>YR-JZH-1UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsdB and Hla clones</td>
			<td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl nutmeg (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>SEPPIC, France</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl- &#946;-D-1-mercaptogalactopyranoside</td>
			<td>fdbio,China</td>
			<td>FD3278-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB bouillon culture-medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lnfrared physiotherapy lamp</td>
			<td>Guangzhou Runman Medical Equipment Co.,China</td>
			<td>7600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature refrigerated centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern NANO ZS</td>
			<td>Malvern Instruments Ltd., UK</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MH(A) medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MH(B) medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro plate washing machine 405 LSRS</td>
			<td>Bio Tek Instruments,Inc Highland&#160; Park,USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-TBC Compact Film Transfer Instrument</td>
			<td>BeiJingDongFangRuiLi Co.,LTD,China</td>
			<td>1658030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MMC packing</td>
			<td>TOSOH(SHANGHAI)CO.,LTD</td>
			<td>0022818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRSA252</td>
			<td>USA, ATCC</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New FlashTM Protein any KD PAGE Protein electrophoresis gel kit</td>
			<td>DAKEWE, China</td>
			<td>8012011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>biosharp, China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR, Amplifier</td>
			<td>Thermal Cycler, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGEX-target gene recombinant plasmid</td>
			<td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td>
			<td>B3528G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td>G-CLONE, China</td>
			<td>CS1231-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>3120000844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyoxyethylated castor oil (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>Aladdin, China</td>
			<td>K400327-1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody</td>
			<td>Laboratory homemade:from immunized mice with positive sera</td>
			<td>null</td>
			<td>See Reference 11 for details</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propylene glycol (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>P4347-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Marker</td>
			<td>Thermo Scientufuc, USA</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF TRANSFER MEMBRANE</td>
			<td>Invitrogen,USA</td>
			<td>88518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL,Japan</td>
			<td>JSM-IT800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pentobarbital</td>
			<td>Merck,Germany</td>
			<td>Tc-P8411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talos L120C TEM</td>
			<td>Thermo Fisher, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB color solution</td>
			<td>TIAN GEN, China</td>
			<td>PA107-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turtle kits</td>
			<td>Xiamen Bioendo Technology Co.,LTD</td>
			<td>ES80545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Macklin, China</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating the immune response of a nanoemulsion adjuvant vaccine against methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) infection

جذبت اللقاحات المساعدة للمستحلب النانوي اهتماما واسعا بسبب صغر حجم الجسيمات واستقرارها الحراري العالي وقدرتها على تحفيز استجابات مناعية صحيحة. ومع ذلك ، فإن إنشاء سلسلة من البروتوكولات الشاملة لتقييم الاستجابة المناعية للقاح مساعد مستحلب نانوي جديد أمر حيوي. لذلك ، تحتوي هذه المقالة على إجراء صارم لتحديد الخصائص الفيزيائية والكيميائية للقاح (عن طريق المجهر الإلكتروني النافذ [TEM] ، ومجهر القوة الذرية [AFM] ، وتشتت الضوء الديناميكي [DLS]) ، واستقرار مستضد اللقاح والنظام (عن طريق اختبار الطرد المركزي عالي السرعة ، واختبار الاستقرار الديناميكي الحراري ، و SDS-PAGE ، واللطخة الغربية) ، والاستجابة المناعية المحددة (IgG1 ، IgG2a و IgG2b). باستخدام هذا النهج ، يمكن للباحثين تقييم دقيق للتأثير الوقائي للقاح مساعد مستحلب نانوي جديد في نموذج فأر MRSA252 قاتل. باستخدام هذه البروتوكولات ، يمكن تحديد مساعد اللقاح النانوي الواعد من حيث إمكانات المساعدة الفعالة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تساعد الطرق في تحسين اللقاحات الجديدة للتطوير المستقبلي.

تم تقييم بروتوكول تحضير اللقاح المساعد للمستحلب النانوي والاختبارات المختبرية وفي الجسم الحي لهذا اللقاح. تم استخدام TEM و AFM و DLS لتحديد الخصائص المهمة لجهد زيتا وحجم الجسيمات على سطح هذه العينة (الشكل 1). أظهر SDS-PAGE والنشاف الغربي أن كمية المستضد في المادة المترسبة...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection at JoVE.com

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection

يعد البروتوكول الحالي ويقيم الخصائص الفيزيائية والاستجابة المناعية والتأثير الوقائي في الجسم الحي للقاح مساعد مستحلب نانوي جديد.

تقييم الاستجابة المناعية للقاح مساعد مستحلب نانوي ضد عدوى المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين (MRSA)

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

أكد البروتوكول الموضح على النهج التجريبي المباشر والفعال والخطوات التفصيلية لتأثيرات الاستجابة المناعية للمواد المساعدة الفيروسية الجديدة. يوفر هذا البروتوكول للبحث ليس فقط طريقة تقييم مناعية أساسية للقاح المساعد ولكن يمكنه أيضا تحديد استقرار كتلتها. للبدء ، خذ 10 ملليغرام لكل ملليلتر من محلول العمل من بروتين مستضد MRSA HI ، وأضف إليه بالتتابع السواغات الثلاثة ، الآيزوبروبيل ميريستات ، زيت الخروع البولي أوكسي إيثيلين ، والبروبيلين غليكول ، مع الحفاظ على نسبة كتلة من واحد إلى ستة إلى ثلاثة.حرك الخليط جيدا ، ثم أضف الماء النقي المعقم تدريجيا للوصول إلى حجم نظام 10 ملليلتر. لتحضير لقاح المستحلب النانوي بطريقة الاستحلاب منخفضة الطاقة ، قم بتحريكه بمعدل 500 دورة في الدقيقة و 25 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة تقريبا. بعد ذلك ، يتم الحصول على لقاح المستحلب النانوي الذي يحتوي على ملليغرام واحد لكل ملليلتر من البروتين كسائل شفاف واضح.بالنسبة لطلاء المستضد لمقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم أو لوحة ELISA ، قم بتخفيف مستضد بروتين HI إلى 10 ميكروغرام لكل ملليلتر بمحلول طلاء ، وأضف 100 ميكرولتر من المستضد المخفف لكل بئر في لوحة ELISA. احتضان اللوحة عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. بعد الحضانة ، اغسل اللوحة ب 300 ميكرولتر من PBST لكل بئر.سد الآبار ب 300 ميكرولتر من محلول الختم لكل بئر لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية ، ثم تمييع ثلاثة ميكرولتر من مصل الفئران من كل مجموعة تجريبية 100 مرة بإضافة 297 ميكرولتر من PBST ، ودوامة المصل المخفف. أضف 100 ميكرولتر من المصل المخفف لكل بئر في لوحة ELISA المطلية لكل عينة مصل. وبالمثل ، قم بتخفيف أمصال التحكم الإيجابية والسلبية 100 مرة باستخدام PBST عن طريق إضافة أربعة ميكرولترات من مصل التحكم الإيجابي أو السلبي إلى 396 ميكرولتر من PBST ، متبوعا بخلط الدوامة.لإجراء تخفيف مزدوج النسبة ، أضف 200 ميكرولتر من المصل التجريبي المخفف مسبقا إلى الصف الأول من لوحة ELISA المطلية ، ثم أضف 100 ميكرولتر من PBST إلى جميع الآبار ، باستثناء تلك الموجودة في الصفين الأول و 12. بعد ذلك ، اضبط مسدس الماصة على 100 ميكرولتر ونقل 100 ميكرولتر من المصل من الصف الأول إلى الصف الثاني الذي يحتوي على PBST. امزج المحتوى في الصف الثاني 10 مرات باستخدام مسدس الماصة.وبالمثل ، فإن إجراء واحد هو تخفيفان متتاليان للمصل حتى الصف 11. بمجرد الانتهاء من ذلك ، تخلص من 100 ميكرولتر من السائل من الصف 11. أضف 100 ميكرولتر من المصل السلبي والموجب المخفف إلى كل بئر مقابل في الصف 12 باتباع نموذج العينة.أغلق لوحة ELISA بغلاف بلاستيكي واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. وفي الوقت نفسه ، تمييع الأجسام المضادة الثانوية المضادة للفأر IgG HRP 10،000 مرة عن طريق إضافة PBST. بعد الحضانة لمدة ساعة واحدة ، اغسل لوحة ELISA ب 300 ميكرولتر من PBST لكل بئر لتنظيف الأجسام المضادة غير المنضمة ، ثم أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المخفف إلى كل بئر واحتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة.اغسل الطبق ب 300 ميكرولتر من PBST لكل بئر ، ثم أضف 100 ميكرولتر من محلول تطوير ألوان TMB إلى كل بئر. ضع الألواح على حرارة 37 درجة مئوية وبعيدا عن الضوء لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، قم بإنهاء التفاعل على الفور باستخدام 50 ميكرولترا من حمض الكبريتيك المولي.اكتشف الكثافة الضوئية أو قيم OD عند 415 نانومتر باستخدام علامة الإنزيم في غضون 15 دقيقة بعد الإنهاء. تم تحليل الخصائص الفيزيائية للقاح المستحلب النانوي الجديد باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ ومجهر القوة الذرية. تم استخدام تشتت الضوء الديناميكي لتحديد توزيع حجم الجسيمات وجهد زيتا للعينة.أظهر SDS-PAGE والنشاف الغربي أن كمية المستضد في المادة المترسبة والطافية لم تؤجل بشكل كبير بعد الطرد المركزي ، مما يشير إلى أن اللقاح كان سليما من الناحية الهيكلية ومحددا ومناعيا. زاد اللقاح المساعد للمستحلب النانوي بشكل كبير من إجمالي عيار الأجسام المضادة IgG و IgG1 و IgG2a للفئران. تم تحسين مناعة لقاح البروتين بشكل ملحوظ.كانت قيم مصل IgG2b OD عند 450 نانومتر أعلى عند استخدام PBS عند تخفيف واحد إلى 5،000. يعكس النموذج القاتل لفئران MRSA 252 أن لقاح المستحلب النانوي أظهر تأثيرا وقائيا جيدا ويثبط بشكل فعال العدوى البكتيرية ب MRS A 252 ، مما يحسن معدل بقاء الفئران المصابة. يعد تحضير المستحلب النانوي وإضافة المصل إلى النبات من أهم الأمور.أيضا ، عند الكشف عن عيار الأجسام المضادة ، ينبغي للمرء أن ينتبه إلى تصحيح أوسع والسائل خارج. إلى جانب المواد المساعدة ، يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة للتطور المناعي لمصفوفات الرياضيات الأخرى ، مثل البلاستيك أو أنظمة التوصيل.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis

The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis

استخدام الري بالتنقيط وتدفق مفاعلات الأقراص الدوارة ل المكورات العنقودية الذهبية التحليل بيوفيلم

Most microbes in nature are thought to exist as surface-associated communities in biofilms.1  Bacterial biofilms are encased within a matrix and attached ...

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus MRSA

تحت الجلد من العدوى المكورات العنقودية المذهبة المقاومة للميثيسيلين (MRSA)

MRSA is a worldwide threat to public health, and MRSA skin and soft-tissue infections now account for more than half of all soft-tissue infections in the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

مقدمة لالدبابير الطفيلية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; والاستجابة المناعية Antiparasite

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus MRSA in Rat

نموذج تجريبي من التهاب الشغاف مقاومة مثسلين<em&gt; المكورات العنقودية الذهبية</em&gt; (MRSA) في الجرذ

Endovascular infections, including endocarditis, are life-threatening infectious syndromes1-3. Staphylococcus aureus is the most common world-wide cause ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

قياس كمية الاستجابة المناعية والنوم في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

المكورات العنقودية الذهبية النمو باستخدام الهيموجلوبين الإنسان باعتبارها المصدر الحديد

S. aureus is a pathogenic bacterium that requires iron to  carry out vital metabolic functions and cause disease. The most abundant  reservoir of iron ...

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

?????? PCR ????? ??????? ?? ?????????? ????? ???????? ????? ?? ????? ??? ?????? ?? ????????? ??????<em&gt; ???????? ????????? ???????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

في تحليل المختبر من الاستجابة المناعية الخلوية بوساطة Myd88 لفيروس غرب النيل المسخ سلالة العدوى

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Genotyping of Staphylococcus aureus by Ribosomal Spacer PCR (RS-PCR)

Genotyping of Staphylococcus aureus by Ribosomal Spacer PCR RS-PCR

التنميط الجيني ل<em&gt; المكورات العنقودية الذهبية</em&gt; من جانب خاص بالريبوسوم فاصل PCR (RS-PCR)

The ribosomal spacer PCR (RS-PCR) is a highly resolving and robust genotyping method for S. aureus that allows a high throughput at moderate costs and is, ...

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

منهجية لدراسة نقل أفقي جين في<em&gt; المكورات العنقودية الذهبية</em

One important feature of the major opportunistic human pathogen Staphylococcus aureus is its extraordinary ability to rapidly acquire resistance to ...