Name: evaluating the immune response of a nanoemulsion adjuvant vaccine against methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) infection
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection at JoVE.com

इस शोध को चीन के राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास कार्यक्रम के नंबर 2021 वाईएफसी 2302603, एनएसएफसी के नंबर 32070924 और 32000651 और चोंगकिंग के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन प्रोजेक्ट प्रोग्राम के नंबर 2019 jcyja-msxmx0159 द्वारा समर्थित किया गया था।

पशु प्रयोग प्रयोगात्मक जानवरों के उपयोग और देखभाल पर मैनुअल के आधार पर आयोजित किए गए थे और तीसरे सैन्य चिकित्सा विश्वविद्यालय की प्रयोगशाला पशु कल्याण और नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किए गए थे। वर्...

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	<li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus.">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li><li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus:+molecular+characterization,+evolution,+and+epidemiology.">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020 (2018).</li><li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+antibiotic+resistance:+the+most+critical+pathogens.">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310 (2021).</li><li>Goull&#233;, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aluminum+and+vaccines:+Current+state+of+knowledge.">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li><li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+adjuvants:+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity.">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li><li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines.">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li><li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability.">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052 (2019).</li><li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection.">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212 (2013).</li><li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine.">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li><li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Pharmacopoeia. , 1088 (2020).</li><li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils.">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477 (2022).</li><li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia.">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li><li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme-iron+acquisition+in+fungi.">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li><li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections.">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li><li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W/O+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption.">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li><li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion:+Concepts,+development+and+applications+in+drug+delivery.">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li><li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers.">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li><li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not.">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li><li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+vaccine+technologies.">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li><li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines.">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919 (2018).</li><li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccine+development:+status+and+future.">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li><li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock.">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li></ol>

आईएसडीबी, एक जीवाणु कोशिका भित्ति-लंगर और लौह-विनियमित सतह प्रोटीन, हीम आयरन15 प्राप्त करने की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एचएलए, अल्फा विष, एमआरएसए में ज्ञात सबसे प्र?...

मेथिसिलिन प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (एमआरएसए) एक अवसरवादी रोगज़नक़ है जो दुनिया भर में एक गहन देखभाल इकाई (आईसीयू) वार्ड1, कार्डियोलॉजी विभागों और बर्न विभागों में उच्चतम संक्रमण दर में से एक है। एमआरएसए संक्रमण, मृत्यु दर और व्यापक दवा प्रतिरोध की उच्च दर प्रदर्शित करता है, जो नैदानिक उपचार में बड़ी कठिनाइयों को प्रस्तुत करताहै। 2017 में विश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) द्वारा जारी एंटीबायोटिक प्रतिरोधी बैक्टीरिया की वैश्विक प्राथमिकता सूची में, एमआरएसए को सबसे महत्वपूर्ण श्रेणी3 में सूचीबद्ध किया गया था। इसलिए एमआरएसए संक्रमण के खिलाफ एक टीका तत्काल आवश्यक है।
एल्यूमीनियम सहायक का उपयोग लंबे समय से किया गया है, और सहायक सहायक तंत्र अपेक्षाकृत स्पष्ट, सुरक्षित, प्रभावी और अच्छी तरह से सहन किया जाताहै। एल्यूमीनियम सहायक वर्तमान में एक व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्रकार के सहायक हैं। आमतौर पर यह माना जाता है कि एल्यूमीनियम नमक कणों पर अधिशोषित एंटीजन स्थिरता में सुधार कर सकते हैं और एंटीजन को लेने के लिए इंजेक्शन साइट की क्षमता को बढ़ा सकते हैं, अच्छा अवशोषण और धीमी गतिसे रिलीज प्रदान करते हैं। वर्तमान में, एल्यूमीनियम सहायक दवाओं का मुख्य नुकसान यह है कि उनके पास एक सहायक प्रभाव की कमी है या कुछ वैक्सीन उम्मीदवार एंटीजन6 पर केवल एक कमजोर सहायक प्रभाव प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, एल्यूमीनियम सहायक आईजीई-मध्यस्थता अतिसंवेदनशीलताप्रतिक्रियाओं को प्रेरित करते हैं। इसलिए, एक मजबूत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रोत्साहित करने के लिए नवीन सहायक विकसित करना आवश्यक है।
नैनोइमल्शन सहायक कोलाइडल फैलाव प्रणाली हैं जो तेल, पानी, सर्फेक्टेंट और कोसर्फेक्टेंट7 से बनी होती हैं। इसके अलावा, सहायक थर्मोडायनामिक रूप से स्थिर और आइसोट्रोपिक हैं, उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा आटोक्लेव या स्थिर किए जा सकते हैं, और हल्के तैयारी की स्थिति में अनायास बन सकते हैं। कई इमल्शन सहायक (जैसे एमएफ 59, एनबी001-002 श्रृंखला, एएस01-04 श्रृंखला, आदि) वर्तमान में बाजार में या नैदानिक अनुसंधान चरण में हैं, लेकिन उनके कण आकार 160 एनएम8 से अधिक हैं। इसलिए, नैनोस्केल (1-100 एनएम) औषधीय तैयारी (यानी, बड़े विशिष्ट सतह क्षेत्र, छोटे कण आकार, सतह प्रभाव, उच्च सतह ऊर्जा, छोटे आकार के प्रभाव और मैक्रो क्वांटम टनलिंग प्रभाव) के फायदे पूरी तरह से शोषण नहीं किया जा सकता है। वर्तमान प्रोटोकॉल में, 1-100 एनएम के व्यास आकार के साथ नैनोइमल्शन तकनीक पर आधारित एक नवीन सहायक को अच्छीसहायक गतिविधि प्रदर्शित करने के लिए रिपोर्ट किया गया है। हमने पुनर्संयोजन सबयूनिट वैक्सीन एंटीजन प्रोटीन एचआई (α-हेमोलिसिन उत्परिवर्ती [एचएलए] और फे आयन सतह निर्धारण कारक बी [आईएसडीबी] सबयूनिट एन 2 सक्रिय टुकड़ा संलयन प्रोटीन) का परीक्षण किया; भौतिक गुणों और स्थिरता की जांच करने, इंट्रामस्क्युलर प्रशासन के बाद इसकी विशिष्ट एंटीबॉडी प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने और माउस प्रणालीगत संक्रमण मॉडल का उपयोग करके वैक्सीन के सुरक्षात्मक प्रभाव का परीक्षण करने के लिए प्रक्रियाओं की एक श्रृंखला स्थापित की गई थी।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5424-Small high speed centrifugeFA-45-24-11</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5424000495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Corning Incorporated, USA</td>
			<td>CLS3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Dimension FastScan</td>
			<td>BRUKER, Germany&#160;</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol lamp</td>
			<td>Shenzhen Yibaxun Technology Co.,China</td>
			<td>YBS-AA-11408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c mice&#160;</td>
			<td>Beijing HFK Bioscience Co. Ltd.&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td>Fuzhou Maixin Biotechnology Development Company,China</td>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad 6.0 microplate reader</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BL21 Competent Cell</td>
			<td>Merck millipore,Germany</td>
			<td>70232-3CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-100G</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>B2064-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5811000398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie bright blue G-250 staining solution</td>
			<td>MIKX,China</td>
			<td>DB236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decolorization solution</td>
			<td>BOSTER,China</td>
			<td>AR0163-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-heating standing-temperature cultivator HH-B11-420</td>
			<td>Shanghai Yuejin Medical Device Factory, China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>Beijing Liuyi Instrument Factory, China</td>
			<td>DYCZ-25D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel image</td>
			<td>Tanon, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione-Sepharose Resin GST</td>
			<td>Mei5bio,China</td>
			<td>affinity chromatography resin</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2SO4</td>
			<td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD,China</td>
			<td>7664-93-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HI recombinant protein</td>
			<td>Third Military Medical University,China</td>
			<td>110-27-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP -Goat Anti-Mouse IgG</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03002R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03003R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03004R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculation loop</td>
			<td>Haimen Feiyue Co.,LTD,China</td>
			<td>YR-JZH-1UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsdB and Hla clones</td>
			<td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl nutmeg (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>SEPPIC, France</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl- &#946;-D-1-mercaptogalactopyranoside</td>
			<td>fdbio,China</td>
			<td>FD3278-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB bouillon culture-medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lnfrared physiotherapy lamp</td>
			<td>Guangzhou Runman Medical Equipment Co.,China</td>
			<td>7600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature refrigerated centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern NANO ZS</td>
			<td>Malvern Instruments Ltd., UK</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MH(A) medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MH(B) medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro plate washing machine 405 LSRS</td>
			<td>Bio Tek Instruments,Inc Highland&#160; Park,USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-TBC Compact Film Transfer Instrument</td>
			<td>BeiJingDongFangRuiLi Co.,LTD,China</td>
			<td>1658030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MMC packing</td>
			<td>TOSOH(SHANGHAI)CO.,LTD</td>
			<td>0022818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRSA252</td>
			<td>USA, ATCC</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New FlashTM Protein any KD PAGE Protein electrophoresis gel kit</td>
			<td>DAKEWE, China</td>
			<td>8012011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>biosharp, China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR, Amplifier</td>
			<td>Thermal Cycler, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGEX-target gene recombinant plasmid</td>
			<td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td>
			<td>B3528G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td>G-CLONE, China</td>
			<td>CS1231-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>3120000844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyoxyethylated castor oil (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>Aladdin, China</td>
			<td>K400327-1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody</td>
			<td>Laboratory homemade:from immunized mice with positive sera</td>
			<td>null</td>
			<td>See Reference 11 for details</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propylene glycol (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>P4347-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Marker</td>
			<td>Thermo Scientufuc, USA</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF TRANSFER MEMBRANE</td>
			<td>Invitrogen,USA</td>
			<td>88518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL,Japan</td>
			<td>JSM-IT800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pentobarbital</td>
			<td>Merck,Germany</td>
			<td>Tc-P8411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talos L120C TEM</td>
			<td>Thermo Fisher, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB color solution</td>
			<td>TIAN GEN, China</td>
			<td>PA107-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turtle kits</td>
			<td>Xiamen Bioendo Technology Co.,LTD</td>
			<td>ES80545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Macklin, China</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating the immune response of a nanoemulsion adjuvant vaccine against methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) infection

नैनोइमल्शन सहायक टीकों ने अपने छोटे कण आकार, उच्च थर्मल स्थिरता और वैध प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने की क्षमता के कारण व्यापक ध्यान आकर्षित किया है। हालांकि, एक नोवेल नैनोइमल्शन एडजुवेंट वैक्सीन की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए व्यापक प्रोटोकॉल की एक श्रृंखला स्थापित करना महत्वपूर्ण है। इसलिए, इस लेख में एक वैक्सीन की भौतिक रासायनिक विशेषताओं (ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी [टीईएम], परमाणु बल माइक्रोस्कोपी [एएफएम], और गतिशील प्रकाश प्रकीर्णन [डीएलएस]), वैक्सीन एंटीजन और सिस्टम की स्थिरता (एक उच्च गति सेंट्रीफ्यूज परीक्षण, एक थर्मोडायनामिक स्थिरता परीक्षण, एसडीएस-पेज और पश्चिमी धब्बा द्वारा), और विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (आईजीजी 1, आईजीजी 2 ए, और आईजीजी 2 बी)। इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, शोधकर्ता एक घातक MRSA252 माउस मॉडल में एक नए नैनोइमल्शन सहायक वैक्सीन के सुरक्षात्मक प्रभाव का सटीक मूल्यांकन कर सकते हैं। इन प्रोटोकॉल के साथ, प्रभावी सहायक क्षमता के मामले में सबसे आशाजनक नैनोइमल्शन वैक्सीन सहायक की पहचान की जा सकती है। इसके अलावा, विधियां भविष्य के विकास के लिए नए टीकों को अनुकूलित करने में मदद कर सकती हैं।

नैनोइमल्शन एडजुवेंट वैक्सीन तैयार करने के प्रोटोकॉल और इस वैक्सीन के इन विट्रो और विवो परीक्षणों का मूल्यांकन किया गया था। इस नमूने की सतह पर जेटा क्षमता और कण आकार की महत्वपूर्ण विशेषताओं को ?...

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Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection

वर्तमान प्रोटोकॉल एक नए नैनोइमल्शन सहायक वैक्सीन के भौतिक गुणों, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और विवो सुरक्षात्मक प्रभाव को तैयार और मूल्यांकन करता है।

मेथिसिलिन प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (एमआरएसए) संक्रमण के खिलाफ एक नैनोइमल्शन सहायक वैक्सीन की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

प्रदर्शित प्रोटोकॉल ने प्रत्यक्ष और प्रभावी प्रयोगात्मक दृष्टिकोण और नोवेल वायरल एडजुवेंट के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्रभावों के लिए विस्तृत कदमों को रेखांकित किया। यह प्रोटोकॉल अनुसंधान को न केवल सहायक वैक्सीन के लिए मूल रूप से प्रतिरक्षा मूल्यांकन विधि प्रदान करता है, बल्कि उनकी द्रव्यमान स्थिरता भी निर्धारित कर सकता है। शुरू करने के लिए, एमआरएसए एचआई एंटीजन प्रोटीन के 10 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर कामकाजी समाधान लें, और इसमें, क्रमिक रूप से तीन एक्सीपिएंट्स, आइसोप्रोपिल माइरिस्टेट, पॉलीऑक्सीएथिलीन कैस्टर ऑयल और प्रोपलीन ग्लाइकोल जोड़ें, एक से छह का द्रव्यमान अनुपात बनाए रखते हुए तीन है।मिश्रण को अच्छी तरह से हिलाएं, फिर धीरे-धीरे 10 मिलीलीटर की प्रणाली मात्रा तक पहुंचने के लिए निष्फल शुद्ध पानी जोड़ें। कम ऊर्जा पायसीकरण विधि द्वारा नैनोइमल्शन वैक्सीन तैयार करने के लिए, इसे लगभग 20 मिनट के लिए 500 रोटेशन प्रति मिनट और 25 डिग्री सेल्सियस पर हिलाएं। इसके बाद, एक मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर प्रोटीन युक्त नैनोइमल्शन वैक्सीन को एक स्पष्ट पारदर्शी तरल के रूप में प्राप्त किया जाता है।एंजाइम लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख या एलिसा प्लेट की एंटीजन कोटिंग के लिए, कोटिंग समाधान के साथ एचआई प्रोटीन एंटीजन को 10 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर तक पतला करें, और एलिसा प्लेट में प्रति अच्छी तरह से पतला एंटीजन के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। प्लेट को रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन बाद, प्लेट को प्रति अच्छी तरह से 300 माइक्रोलीटर पीबीएसटी के साथ धो लें।कुओं को 37 डिग्री सेल्सियस पर दो घंटे के लिए प्रति कुएं 300 माइक्रोलीटर सीलिंग समाधान के साथ सील करें, फिर प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह से चूहों के सीरम के तीन माइक्रोलीटर को 297 माइक्रोलीटर पीबीएसटी जोड़कर 100 बार पतला करें, और पतला सीरम भंवर करें। प्रत्येक सीरम नमूने के लिए लेपित एलिसा प्लेट में प्रति अच्छी तरह से 100 माइक्रोलीटर पतला सीरम जोड़ें। इसी तरह, पीबीएसटी के 396 माइक्रोलीटर में सकारात्मक या नकारात्मक नियंत्रण सीरम के चार माइक्रोलीटर जोड़कर पीबीएसटी के साथ सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण सीरम को 100 बार पतला करें, इसके बाद भंवर मिश्रण करें।डबल अनुपात कमजोर पड़ने के लिए, लेपित एलिसा प्लेट की पहली पंक्ति में पहले से पतला प्रयोगात्मक सीरम के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें, फिर पंक्ति एक और 12 को छोड़कर सभी कुओं में 100 माइक्रोलीटर पीबीएसटी जोड़ें। इसके बाद, पिपेट गन को 100 माइक्रोलीटर में समायोजित करें और 100 माइक्रोलीटर सीरम को पहली पंक्ति से दूसरी पंक्ति में स्थानांतरित करें जिसमें पीबीएसटी है। पिपेट गन का उपयोग करके दूसरी पंक्ति में सामग्री को 10 बार मिलाएं।इसी तरह, सीरम टिल पंक्ति 11 के लगातार दो कमजोर पड़ने के लिए एक प्रदर्शन करें। एक बार ऐसा करने के बाद, पंक्ति 11 से 100 माइक्रोलीटर तरल फेंक दें। नमूना टेम्पलेट के बाद पंक्ति 12 में प्रत्येक संबंधित कुएं में 100 माइक्रोलीटर पतला नकारात्मक और सकारात्मक सीरम जोड़ें।एलिसा प्लेट को प्लास्टिक की चादर के साथ सील करें और एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। इस बीच, पीबीएसटी जोड़कर द्वितीयक एंटीबॉडी एंटी-माउस आईजीजी एचआरपी को 10,000 बार पतला करें। एक घंटे की इनक्यूबेशन के बाद, अनबाउंड एंटीबॉडी को साफ करने के लिए एलिसा प्लेट को प्रति अच्छी तरह से 300 माइक्रोलीटर पीबीएसटी से धो लें, फिर प्रत्येक कुएं में 100 माइक्रोलीटर पतला सेकेंडरी एंटीबॉडी जोड़ें और प्लेट को 40 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।प्लेट को प्रति अच्छी तरह से 300 माइक्रोलीटर पीबीएसटी के साथ धोएं, फिर प्रत्येक कुएं में 100 माइक्रोलीटर टीएमबी रंग विकास समाधान जोड़ें। प्लेटों को 37 डिग्री सेल्सियस पर रखें और 10 मिनट के लिए प्रकाश से दूर रखें। जिसके बाद, दो मोलर सल्फ्यूरिक एसिड के 50 माइक्रोलीटर के साथ प्रतिक्रिया को तुरंत समाप्त करें।समाप्ति के 15 मिनट के भीतर एक एंजाइम मार्कर का उपयोग करके 415 नैनोमीटर पर ऑप्टिकल घनत्व या ओडी मूल्यों का पता लगाएं। ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और परमाणु बल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके नोवेल नैनोइमल्शन वैक्सीन की भौतिक विशेषताओं का विश्लेषण किया गया था। कण आकार वितरण और नमूने की ज़ेटा क्षमता निर्धारित करने के लिए गतिशील प्रकाश प्रकीर्णन का उपयोग किया गया था।एसडीएस-पेज और वेस्टर्न ब्लॉटिंग से पता चला है कि सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद अवक्षेप और सतह पर तैरनेवाले में एंटीजन की मात्रा में काफी देरी नहीं हुई, यह दर्शाता है कि टीका संरचनात्मक रूप से बरकरार, विशिष्ट और इम्युनोजेनिक था। नैनोइमल्शन एडजुवेंट वैक्सीन ने चूहों के कुल आईजीजी, आईजीजी 1 और आईजीजी 2 ए एंटीबॉडी टिटर्स में काफी वृद्धि की। प्रोटीन वैक्सीन की इम्युनोजेनेसिटी में काफी सुधार हुआ था।450 नैनोमीटर पर सीरम आईजीजी 2 बी ओडी मान उच्चतम थे जब पीबीएस का उपयोग 5,000 कमजोर पड़ने पर किया गया था। एमआरएसए 252 चूहों के घातक मॉडल ने प्रतिबिंबित किया कि नैनोइमल्शन वैक्सीन ने एक अच्छा सुरक्षात्मक प्रभाव दिखाया और एमआरएस ए 252 के साथ जीवाणु संक्रमण को प्रभावी ढंग से रोक दिया, जिससे संक्रमित चूहों की जीवित रहने की दर में सुधार हुआ। नैनोइमल्शन की तैयारी और पौधे में सीरम को जोड़ना सबसे महत्वपूर्ण है।इसके अलावा, जहां एंटीबॉडी टिटर का पता चलता है, किसी को व्यापक और तरल-आधारित आउट को सही करने पर ध्यान देना चाहिए। सहायक दवाओं के अलावा, इस विधि का उपयोग अन्य गणित सरणियों, जैसे प्लास्टिक या वितरण प्रणालियों के प्रतिरक्षा विकास के लिए भी किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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