Name: evaluating the immune response of a nanoemulsion adjuvant vaccine against methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) infection
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection at JoVE.com

Это исследование было поддержано No 2021YFC2302603 Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая, No 32070924 и 32000651 NSFC и No 2019jcyjA-msxmx0159 Проектной программы Фонда естественных наук Чунцина.

Эксперименты на животных проводились на основе руководства по использованию и уходу за подопытными животными и были одобрены Комитетом по благополучию и этике лабораторных животных Третьего военно-медицинского университета. Для настоящего исследования были использованы самки мыше?...

<ol>
	<li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus.">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li><li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus:+molecular+characterization,+evolution,+and+epidemiology.">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020 (2018).</li><li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+antibiotic+resistance:+the+most+critical+pathogens.">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310 (2021).</li><li>Goull&#233;, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aluminum+and+vaccines:+Current+state+of+knowledge.">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li><li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+adjuvants:+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity.">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li><li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+safety:+myths+and+misinformation.">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372 (2020).</li><li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion:+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability.">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li><li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines.">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li><li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability.">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052 (2019).</li><li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection.">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212 (2013).</li><li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine.">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li><li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Pharmacopoeia. , 1088 (2020).</li><li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils.">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477 (2022).</li><li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia.">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li><li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme-iron+acquisition+in+fungi.">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li><li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections.">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li><li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W/O+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption.">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li><li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoemulsion:+Concepts,+development+and+applications+in+drug+delivery.">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li><li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers.">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li><li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not.">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li><li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+vaccine+technologies.">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li><li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines.">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919 (2018).</li><li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccine+development:+status+and+future.">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li><li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock.">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li></ol>

IsdB, поверхностный белок, закрепленный на клеточной стенке бактерий и регулируемый железом, играет важную роль в процессе получения гемового железа15. Hla, альфа-токсин, является одним из наиболее эффективных бактериальных токсинов, известных в MRSA, и может образовыв?...

Метициллин-резистентный золотистый стафилококк (MRSA) является условно-патогенным микроорганизмом с одним из самых высоких показателей инфицирования в отделенияхинтенсивной терапии (ОИТ) 1, кардиологических отделениях и ожоговых отделениях во всем мире. MRSA демонстрирует высокие показатели инфицирования, смертности и широкой лекарственной устойчивости, что представляет большие трудности в клиническом лечении2. В Глобальном приоритетном списке устойчивых к антибиотикам бактерий, опубликованном Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в 2017 году, MRSA был включен в наиболее критическую категорию3. Поэтому срочно необходима вакцина против инфекции MRSA.
Алюминиевый адъювант используется уже давно, а вспомогательный механизм адъюванта относительно чист, безопасен, эффективен и хорошо переносится4. Алюминиевые адъюванты в настоящее время являются широко используемым типом адъюванта. Обычно считается, что антигены, адсорбированные на частицах соли алюминия, могут улучшить стабильность и повысить способность места инъекции поглощать антигены, обеспечивая хорошую абсорбцию и медленное высвобождение5. В настоящее время основным недостатком алюминиевых адъювантов является то, что они не обладают адъювантным эффектом или проявляют лишь слабое адъювантное действие на некоторые антигены-кандидаты в вакцину6. Кроме того, алюминиевые адъюванты индуцируют IgE-опосредованные реакции гиперчувствительности5. Поэтому необходимо разработать новые адъюванты для стимуляции более сильного иммунного ответа.
Наноэмульсионные адъюванты представляют собой коллоидные дисперсионные системы, состоящие из масла, воды, поверхностно-активных веществ и поверхностно-активных веществ7. Кроме того, адъюванты являются термодинамически стабильными и изотропными, могут быть автоклавированы или стабилизированы высокоскоростным центрифугированием и могут образовываться спонтанно в мягких условиях приготовления. Несколько эмульсионных адъювантов (таких как серии MF59, NB001-002, AS01-04 и т. д.) в настоящее время представлены на рынке или находятся на стадии клинических исследований, но их размеры частиц превышают 160нм 8. Следовательно, преимущества наноразмерных (1-100 нм) лекарственных препаратов (т.е. большая удельная поверхность, малый размер частиц, поверхностный эффект, высокая поверхностная энергия, эффект малого размера и эффект макроквантового туннелирования) не могут быть полностью использованы. В настоящем протоколе сообщается, что новый адъювант, основанный на технологии наноэмульсии, с размером диаметра 1-100 нм проявляет хорошую адъювантную активность9. Мы протестировали белок антигена вакцины рекомбинационной субъединицы HI (мутант α-гемолизина [Hla] и ион Fe, определяющий поверхностный фактор B [IsdB], субъединица N2, белок слияния активных фрагментов N2); Был создан ряд процедур для изучения физических свойств и стабильности, оценки ее специфического ответа антител после внутримышечного введения и проверки защитного эффекта вакцины с использованием модели системной инфекции мыши.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5424-Small high speed centrifugeFA-45-24-11</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5424000495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Corning Incorporated, USA</td>
			<td>CLS3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Dimension FastScan</td>
			<td>BRUKER, Germany&#160;</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol lamp</td>
			<td>Shenzhen Yibaxun Technology Co.,China</td>
			<td>YBS-AA-11408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c mice&#160;</td>
			<td>Beijing HFK Bioscience Co. Ltd.&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td>Fuzhou Maixin Biotechnology Development Company,China</td>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad 6.0 microplate reader</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BL21 Competent Cell</td>
			<td>Merck millipore,Germany</td>
			<td>70232-3CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-100G</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>B2064-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5811000398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie bright blue G-250 staining solution</td>
			<td>MIKX,China</td>
			<td>DB236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decolorization solution</td>
			<td>BOSTER,China</td>
			<td>AR0163-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-heating standing-temperature cultivator HH-B11-420</td>
			<td>Shanghai Yuejin Medical Device Factory, China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>Beijing Liuyi Instrument Factory, China</td>
			<td>DYCZ-25D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel image</td>
			<td>Tanon, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione-Sepharose Resin GST</td>
			<td>Mei5bio,China</td>
			<td>affinity chromatography resin</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2SO4</td>
			<td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD,China</td>
			<td>7664-93-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HI recombinant protein</td>
			<td>Third Military Medical University,China</td>
			<td>110-27-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP -Goat Anti-Mouse IgG</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03002R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG2a</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03003R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP- Goat anti-mouse IgG2b</td>
			<td>Biodragon, China</td>
			<td>BF03004R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculation loop</td>
			<td>Haimen Feiyue Co.,LTD,China</td>
			<td>YR-JZH-1UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsdB and Hla clones</td>
			<td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl nutmeg (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>SEPPIC, France</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl- &#946;-D-1-mercaptogalactopyranoside</td>
			<td>fdbio,China</td>
			<td>FD3278-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB bouillon culture-medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lnfrared physiotherapy lamp</td>
			<td>Guangzhou Runman Medical Equipment Co.,China</td>
			<td>7600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature refrigerated centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern NANO ZS</td>
			<td>Malvern Instruments Ltd., UK</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MH(A) medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MH(B) medium</td>
			<td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td>
			<td>02-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro plate washing machine 405 LSRS</td>
			<td>Bio Tek Instruments,Inc Highland&#160; Park,USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-TBC Compact Film Transfer Instrument</td>
			<td>BeiJingDongFangRuiLi Co.,LTD,China</td>
			<td>1658030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MMC packing</td>
			<td>TOSOH(SHANGHAI)CO.,LTD</td>
			<td>0022818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRSA252</td>
			<td>USA, ATCC</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New FlashTM Protein any KD PAGE Protein electrophoresis gel kit</td>
			<td>DAKEWE, China</td>
			<td>8012011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>biosharp, China</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR, Amplifier</td>
			<td>Thermal Cycler, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGEX-target gene recombinant plasmid</td>
			<td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td>
			<td>B3528G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td>G-CLONE, China</td>
			<td>CS1231-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>3120000844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyoxyethylated castor oil (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>Aladdin, China</td>
			<td>K400327-1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody</td>
			<td>Laboratory homemade:from immunized mice with positive sera</td>
			<td>null</td>
			<td>See Reference 11 for details</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propylene glycol (pharmaceutic adjuvant)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>P4347-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Marker</td>
			<td>Thermo Scientufuc, USA</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF TRANSFER MEMBRANE</td>
			<td>Invitrogen,USA</td>
			<td>88518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL,Japan</td>
			<td>JSM-IT800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pentobarbital</td>
			<td>Merck,Germany</td>
			<td>Tc-P8411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talos L120C TEM</td>
			<td>Thermo Fisher, USA</td>
			<td>null</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB color solution</td>
			<td>TIAN GEN, China</td>
			<td>PA107-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turtle kits</td>
			<td>Xiamen Bioendo Technology Co.,LTD</td>
			<td>ES80545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Macklin, China</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating the immune response of a nanoemulsion adjuvant vaccine against methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) infection

Наноэмульсионные адъювантные вакцины привлекли большое внимание из-за их небольшого размера частиц, высокой термической стабильности и способности вызывать иммунные реакции. Тем не менее, создание ряда всеобъемлющих протоколов для оценки иммунного ответа новой наноэмульсионной адъювантной вакцины имеет жизненно важное значение. Таким образом, в этой статье представлена строгая процедура определения физико-химических характеристик вакцины (с помощью просвечивающей электронной микроскопии [TEM], атомно-силовой микроскопии [AFM] и динамического рассеяния света [DLS]), стабильности антигена и системы вакцины (с помощью высокоскоростного центрифужного теста, теста термодинамической стабильности, SDS-PAGE и вестерн-блоттинга) и специфического иммунного ответа (IgG1, IgG2a и IgG2b). Используя этот подход, исследователи могут точно оценить защитный эффект новой наноэмульсионной адъювантной вакцины на летальной модели MRSA252 мыши. С помощью этих протоколов может быть идентифицирован наиболее перспективный адъювант для наноэмульсионной вакцины с точки зрения эффективного адъювантного потенциала. Кроме того, эти методы могут помочь оптимизировать новые вакцины для будущей разработки.

Проведена оценка протокола приготовления наноэмульсионной адъювантной вакцины и испытаний этой вакцины in vitro и in vivo. TEM, AFM и DLS были использованы для определения важных характеристик дзета-потенциала и размера частиц на поверхности этого образца (рис. 1). SDS-PAGE и ...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection at JoVE.com

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA Infection

Настоящий протокол подготавливает и оценивает физические свойства, иммунный ответ и защитный эффект in vivo новой наноэмульсионной адъювантной вакцины.

Оценка иммунного ответа наноэмульсионной адъювантной вакцины против метициллин-резистентной инфекции золотистого стафилококка (MRSA)

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

Продемонстрированный протокол подчеркнул прямой и эффективный экспериментальный подход и подробные шаги к эффектам иммунного ответа новых вирусных адъювантов. Этот протокол предоставляет исследованиям не только в основном иммунный метод оценки адъювантной вакцины, но также может определять их массовую стабильность. Для начала возьмите 10 миллиграмм на миллилитр рабочего раствора белка-антигена MRSA HI и к нему последовательно добавьте три вспомогательных вещества: изопропилмиристат, полиоксиэтиленкасторовое масло и пропиленгликоль, поддерживая соотношение масс один к шести к трем.Хорошо перемешайте смесь, затем постепенно добавляйте стерилизованную чистую воду, чтобы достичь объема системы в 10 миллилитров. Чтобы приготовить наноэмульсионную вакцину методом низкоэнергетического эмульгирования, перемешайте ее при 500 оборотах в минуту и 25 градусах Цельсия в течение примерно 20 минут. Впоследствии наноэмульсионную вакцину, содержащую один миллиграмм на миллилитр белка, получают в виде прозрачной прозрачной жидкости.Для антигенного покрытия иммуноферментного анализа или планшета ИФА разбавьте антиген белка HI до 10 мкг на миллилитр с помощью раствора для покрытия и добавьте 100 микролитров разбавленного антигена на лунку в планшет ИФА. Инкубируйте тарелку при четырех градусах Цельсия в течение ночи. После инкубации вымойте тарелку 300 микролитрами ПБСТ на лунку.Запечатайте лунки 300 микролитрами герметизирующего раствора на лунку в течение двух часов при 37 градусах Цельсия, затем разбавьте три микролитра сыворотки мышей из каждой экспериментальной группы 100 раз, добавив 297 микролитров PBST, и встряхните разбавленную сыворотку. Добавьте 100 микролитров разбавленной сыворотки на лунку в планшет ИФА с покрытием для каждого образца сыворотки. Аналогичным образом, разбавьте положительную и отрицательную контрольные сыворотки в 100 раз PBST, добавив четыре микролитра положительной или отрицательной контрольной сыворотки к 396 микролитрам PBST с последующим вихревым перемешиванием.Чтобы выполнить разведение в двойном соотношении, добавьте 200 микролитров предварительно разбавленной экспериментальной сыворотки в первый ряд планшета ИФА с покрытием, затем добавьте 100 микролитров PBST во все лунки, кроме тех, которые находятся в первом и 12-м рядах. Затем отрегулируйте пипеточный пистолет на 100 микролитров и перенесите 100 микролитров сыворотки из первого ряда во второй ряд, содержащий PBST. Перемешайте содержимое во втором ряду 10 раз с помощью пипетки.Аналогично выполняют от одного до двух последовательных разведений сыворотки до 11 ряда. После этого слейте 100 микролитров жидкости из ряда 11. Добавьте 100 микролитров разбавленной отрицательной и положительной сыворотки в каждую соответствующую лунку в строке 12 после шаблона образца.Запечатайте планшет ИФА полиэтиленовой пленкой и выдерживайте при температуре 37 градусов Цельсия в течение одного часа. Между тем, разбавьте вторичные антитела против мышиного IgG HRP в 10 000 раз, добавив PBST. После часовой инкубации промойте планшет ИФА 300 микролитрами PBST на лунку, чтобы очистить несвязанные антитела, затем добавьте 100 микролитров разбавленного вторичного антитела в каждую лунку и инкубируйте планшет при 37 градусах Цельсия в течение 40 минут.Промойте пластину 300 микролитрами PBST на лунку, затем добавьте 100 микролитров раствора для проявления цвета TMB в каждую лунку. Поставьте тарелки при температуре 37 градусов Цельсия и вдали от света на 10 минут. После чего немедленно прекратите реакцию 50 микролитрами двух молярных серных кислот.Определите оптическую плотность или значения OD на расстоянии 415 нанометров с помощью ферментного маркера в течение 15 минут после завершения. Физические характеристики новой наноэмульсионной вакцины были проанализированы с помощью просвечивающей электронной микроскопии и атомно-силовой микроскопии. Динамическое рассеяние света использовалось для определения распределения частиц по размерам и дзета-потенциала образца.SDS-PAGE и вестерн-блоттинг показали, что количество антигена в осадке и надосадочной жидкости значительно не уменьшилось после центрифугирования, что указывает на то, что вакцина была структурно интактной, специфичной и иммуногенной. Наноэмульсионная адъювантная вакцина значительно увеличила общие титры антител IgG, IgG1 и IgG2a у мышей. Иммуногенность белковой вакцины значительно улучшилась.Значения OD IgG2b в сыворотке крови на 450 нанометрах были самыми высокими, когда PBS использовался в разведении от одного до 5000. Летальная модель мышей MRSA 252 показала, что наноэмульсионная вакцина показала хороший защитный эффект и эффективно ингибировала бактериальную инфекцию MRS A 252, улучшая выживаемость инфицированных мышей. Приготовление наноэмульсии и добавление сыворотки в растение являются наиболее важными.Кроме того, при обнаружении титра антител следует обратить внимание на корректный более широкий и жидкостный выход. Помимо адъювантов, этот метод также может быть использован для иммунной эволюции других математических массивов, таких как пластмассы или системы доставки.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis

The Use of Drip Flow and Rotating Disk Reactors for Staphylococcus aureus Biofilm Analysis

Использование потоков для слива воды и вращающихся дисков для реакторов Золотистый стафилококк Биопленка Анализ

Most microbes in nature are thought to exist as surface-associated communities in biofilms.1  Bacterial biofilms are encased within a matrix and attached ...

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus MRSA

Подкожный Заражение метициллину Staphylococcus Aureus устойчивы (MRSA)

MRSA is a worldwide threat to public health, and MRSA skin and soft-tissue infections now account for more than half of all soft-tissue infections in the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Введение в паразитических наездников<em&gt; Drosophila</em&gt; И противопаразитарной иммунного ответа

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus MRSA in Rat

Экспериментальная модель Эндокардит метициллин устойчивый<em&gt; Золотистый стафилококк</em&gt; (MRSA) у крыс

Endovascular infections, including endocarditis, are life-threatening infectious syndromes1-3. Staphylococcus aureus is the most common world-wide cause ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Количественные измерения иммунного ответа и сна в<em&gt; Drosophila</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source

Золотистый стафилококк рост использования человеческого гемоглобина в качестве источника железа

S. aureus is a pathogenic bacterium that requires iron to  carry out vital metabolic functions and cause disease. The most abundant  reservoir of iron ...

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

??????????? ??? ??? ??????????? ??????????????? ??????? ????????? ??? ????? I ?? V ? ??????????-??????????<em&gt; ?????????? ???????????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro анализ MyD88-опосредованной клеточного иммунного ответа на вирус Западного Нила мутантный штамм инфекции

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Genotyping of Staphylococcus aureus by Ribosomal Spacer PCR (RS-PCR)

Genotyping of Staphylococcus aureus by Ribosomal Spacer PCR RS-PCR

генотипирование<em&gt; Стафилококк</em&gt; рибосомальным Spacer ПЦР (RS-PCR)

The ribosomal spacer PCR (RS-PCR) is a highly resolving and robust genotyping method for S. aureus that allows a high throughput at moderate costs and is, ...

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

Методика изучения горизонтальных генного переноса в<em&gt; Стафилококк</em

One important feature of the major opportunistic human pathogen Staphylococcus aureus is its extraordinary ability to rapidly acquire resistance to ...