Name: isolation, culture, and characterization of primary dermal fibroblasts from human keloid tissue
Uploaded: 2023-07-28T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Culture, and Characterization of Primary Dermal Fibroblasts from Human Keloid Tissue at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (bevillingsnumre 81903189 og 82073418) og Science and Technology Foundation of Guangzhou (bevillingsnummer 202102020025).

Denne undersøgelse blev godkendt af det institutionelle bedømmelsesudvalg på Dermatology Hospital, Southern Medical University (2020081). Der blev indhentet informeret patientsamtykke, før væv blev indsamlet fra individerne.
1. Forberedelse
BEMÆRK: Følgende procedurer skal udføres i et sterilt miljø under et biologisk sikkerhedsskab.
<ol><li>Forbered komplet dyrkningsmedium ved at tilsætte 10% føtalt bovint serum (FBS) og 1% penicillin-...

<ol>
	<li>Zhu, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+of+Chinese+keloid+patients+identifies+novel+causative+genes.">Genome-wide analysis of Chinese keloid patients identifies novel causative genes.</a> Annals Of Translational Medicine. 10 (16), 883 (2022).</li><li>Feng, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+regulatory+factors+and+therapeutic+targets+in+keloid+fibrosis.">Biomechanical regulatory factors and therapeutic targets in keloid fibrosis.</a> Frontiers in Pharmacology. 13, 906212 (2022).</li><li>Cohen, A. J., Nikbakht, N., Uitto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keloid+disorder:+Genetic+basis,+gene+expression+profiles,+and+immunological+modulation+of+the+fibrotic+processes+in+the+skin.">Keloid disorder: Genetic basis, gene expression profiles, and immunological modulation of the fibrotic processes in the skin.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. , (2022).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+advances+in+the+selection+of+adjuvant+radiotherapy+regimens+for+keloid.">Current advances in the selection of adjuvant radiotherapy regimens for keloid.</a> Frontiers in Medicine. 9, 1043840 (2022).</li><li>Ghadiri, S. J., Kloczko, E., Flohr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+treatments+in+the+management+of+keloids+and+hypertrophic+scars:+A+critically+appraised+topic.">Topical treatments in the management of keloids and hypertrophic scars: A critically appraised topic.</a> British Journal of Dermatology. 187 (6), 855-856 (2022).</li><li>Neves, L. M. G., Wilgus, T. A., Bayat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro,+ex+vivo,+and+in+vivo+approaches+for+investigation+of+skin+scarring:+Human+and+animal+models.">In vitro, ex vivo, and in vivo approaches for investigation of skin scarring: Human and animal models.</a> Advances in Wound Care. 12 (2), 97-116 (2023).</li><li>Supp, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studies+of+keloid+scarring.">Animal models for studies of keloid scarring.</a> Advances in Wound Care. 8 (2), 77-89 (2019).</li><li>K&#252;nzel, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonic-augmented+primary+adult+fibroblast+isolation.">Ultrasonic-augmented primary adult fibroblast isolation.</a> Journal of Visualized Experiments. (149), e59858 (2019).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+explants+culture+method:+Sustainable+isolation+of+keloid+fibroblasts+with+primary+characteristics.">An improved explants culture method: Sustainable isolation of keloid fibroblasts with primary characteristics.</a> Journal of Cosmetic Dermatology. 21 (12), 7131-7139 (2022).</li><li>Philippeos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+single-cell+transcriptional+profiling+identifies+functionally+distinct+human+dermal+fibroblast+subpopulations.">Spatial and single-cell transcriptional profiling identifies functionally distinct human dermal fibroblast subpopulations.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 811-825 (2018).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+sulfide+suppresses+skin+fibroblast+proliferation+via+oxidative+stress+alleviation+and+necroptosis+inhibition.">Hydrogen sulfide suppresses skin fibroblast proliferation via oxidative stress alleviation and necroptosis inhibition.</a> Medicine and Cellular Longevity. 2022, 7434733 (2022).</li><li>Zhou, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nintedanib+inhibits+keloid+fibroblast+functions+by+blocking+the+phosphorylation+of+multiple+kinases+and+enhancing+receptor+internalization.">Nintedanib inhibits keloid fibroblast functions by blocking the phosphorylation of multiple kinases and enhancing receptor internalization.</a> Acta Pharmacologica Sinica. 41 (9), 1234-1245 (2020).</li><li>Wang, X. M., Liu, X. M., Wang, Y., Chen, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+transcription+factor+3+(ATF3)+regulates+cell+growth,+apoptosis,+invasion+and+collagen+synthesis+in+keloid+fibroblast+through+transforming+growth+factor+beta+(TGF-beta)/SMAD+signaling+pathway.">Activating transcription factor 3 (ATF3) regulates cell growth, apoptosis, invasion and collagen synthesis in keloid fibroblast through transforming growth factor beta (TGF-beta)/SMAD signaling pathway.</a> Bioengineered. 12 (1), 117-126 (2021).</li><li>Sato, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+medium+obtained+from+amnion-derived+mesenchymal+stem+cell+culture+prevents+activation+of+keloid+fibroblasts.">Conditioned medium obtained from amnion-derived mesenchymal stem cell culture prevents activation of keloid fibroblasts.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (2), 390-398 (2018).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+explant+culture:+An+improved+method+for+consistently+harvesting+homogeneous+populations+of+keloid+fibroblasts.">Long-term explant culture: An improved method for consistently harvesting homogeneous populations of keloid fibroblasts.</a> Bioengineered. 13 (1), 1565-1574 (2022).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+glucose+metabolism+and+cell+function+in+keloid+fibroblasts+under+hypoxia.">Altered glucose metabolism and cell function in keloid fibroblasts under hypoxia.</a> Redox Biology. 38, 101815 (2021).</li><li>Fan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+transcriptome+integration+analysis+reveals+the+correlation+between+mesenchymal+stromal+cells+and+fibroblasts.">Single-cell transcriptome integration analysis reveals the correlation between mesenchymal stromal cells and fibroblasts.</a> Frontiers in Genetics. 13, 798331 (2022).</li><li>Yao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+control+of+PDGFR&#945;+regulates+the+fibroblast-to-myofibroblast+transition+in+wound+healing.">Temporal control of PDGFR&#945; regulates the fibroblast-to-myofibroblast transition in wound healing.</a> Cell Reports. 40 (7), 111192 (2022).</li><li>Domdey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consecutive+dosing+of+UVB+irradiation+induces+loss+of+ABCB5+expression+and+activation+of+EMT+and+fibrosis+proteins+in+limbal+epithelial+cells+similar+to+pterygium+epithelium.">Consecutive dosing of UVB irradiation induces loss of ABCB5 expression and activation of EMT and fibrosis proteins in limbal epithelial cells similar to pterygium epithelium.</a> Stem Cell Research. 40, 102936 (2022).</li><li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+tubular+epithelial+cell+necroptosis+promotes+tubulointerstitial+fibrosis+in+patients+with+chronic+kidney+disease.">Renal tubular epithelial cell necroptosis promotes tubulointerstitial fibrosis in patients with chronic kidney disease.</a> FASEB Journal. 36 (12), e22625 (2022).</li><li>Korosec, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+identity+and+location+within+the+dermis+determine+the+function+of+papillary+and+reticular+fibroblasts+in+human+skin.">Lineage identity and location within the dermis determine the function of papillary and reticular fibroblasts in human skin.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (2), 342-351 (2019).</li></ol>

Opnåelse af primære fibroblaster fra keloidvæv er et kritisk grundlag for yderligere forskning. Indtil nu har der været to metoder til erhvervelse af primære fibroblaster: enzymfordøjelse og eksplantatkultur11,12,13,14. Begge traditionelle metoder har imidlertid begrænsninger, såsom modtagelighed for forurening, blanding med andre typer celler, en lang dyrkningsperiode og en lav succesr...

Keloid, en fibroproliferativ sygdom, manifesterer sig som den kontinuerlige vækst af plaques, der ofte invaderer den omgivende normale hud uden selvbegrænsning og forårsager forskellige grader af kløe, smerte og kosmetiske og psykologiske byrder for patienter1. Fibroblaster, de primære celler involveret i keloider, spiller en væsentlig rolle i dannelsen og udviklingen af denne sygdom gennem overdreven spredning, overflødig ekstracellulær matrixproduktion og uorganiserede kollagener 2,3. Den underliggende patogenese forbliver imidlertid uklar, og der mangler stadig en effektiv terapeutisk metode til keloid; Der er derfor et presserende behov for yderligere forskning 4,5.
Da der ikke er nogen ideel dyremodel for keloidforskning in vivo 6,7, kan opbygning af en in vitro-model ved at erhverve primære fibroblaster fra keloidvæv tilbyde gennemførlighed og pålidelighed for keloidforskning 2,6. Primære celler er dem, der stammer direkte fra levende væv, og det er almindeligt anerkendt, at disse celler mere kan ligne den fysiologiske tilstand og genetiske baggrund hos flere individer sammenlignet med cellelinjer 8,9. Dyrkning af primære celler giver et stærkt middel til at studere vækst og metabolisme af celler såvel som andre cellefænotyper.
På nuværende tidspunkt er der to metoder til erhvervelse af primære fibroblaster: enzymfordøjelse og explantkultur. Imidlertid er der identificeret flere hindringer for opnåelse af primære fibroblaster, såsom risikoen for forurening med forskellige bakterier eller svampe, blanding med andre typer celler, der ikke let fjernes, den lange periode af dyrkningscyklussen, de efterfølgende ændringer i celleegenskaberne sammenlignet med de oprindelige celler osv9. Derfor er udvikling af en gennemførlig og effektiv proces til opnåelse af primære fibroblaster grundlaget for yderligere undersøgelser og applikationer. Denne undersøgelse beskriver en optimeret protokol til ekstraktion af primære fibroblaster fra keloidvæv, der effektivt og støt kan tilvejebringe rene og levedygtige fibroblaster.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL sterile centrifuge tube</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>CFT002015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tube</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>8076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% polyformaldehyde</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0099</td>
			<td>Cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tube</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>8081</td>
			<td>Put keloid tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor-555 goat anti-rabbit IgG&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Alexa&#160;Fluor&#160;555&#160;</td>
			<td>second antibody for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti human CD90</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>B301002</td>
			<td>Identify the purity of fibroblasts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody diluent</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological safety cabinet&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1300 series A2</td>
			<td>Isolation and culture cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>aladdin</td>
			<td>B265993</td>
			<td>Blocking for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide incubator</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>CCL-170B-8</td>
			<td>Using for culturing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell cryotubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>43513</td>
			<td>Store the cells in low temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifugal machine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>ST 16R</td>
			<td>Discard supernatant&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C1006</td>
			<td>Stain the cellular nucleus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>196055</td>
			<td>Using for preserving cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td>Culture medium solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>BI</td>
			<td>04-001-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD FACSCelesta</td>
			<td>Observing the identity of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>frozen box</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>&#160;5100-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE Ts2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>AIR-HD25</td>
			<td>Observing the immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFR-&#945; antibody</td>
			<td>CST</td>
			<td>3174T</td>
			<td>First antibody for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-Am solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1410</td>
			<td>Add in culture medium solution to avoid contamination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petri dish</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>7556</td>
			<td>Culture fibroblasts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C10010500BT</td>
			<td>Culture medium solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit (DAIE) mAB IgG XR (R) Isotuge Control (PE)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>5742S</td>
			<td>As a control for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round coverslip</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>801007</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X 100</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8200</td>
			<td>Punch holes in the cell membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200072</td>
			<td>Used for passaging cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab8978</td>
			<td>First antibody for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, culture, and characterization of primary dermal fibroblasts from human keloid tissue

Fibroblaster, den vigtigste celletype i keloidvæv, spiller en væsentlig rolle i dannelsen og udviklingen af keloider. Isolering og dyrkning af primære fibroblaster afledt af keloidvæv er grundlaget for yderligere undersøgelser af keloidernes biologiske funktion og molekylære mekanismer samt nye terapeutiske strategier til behandling af dem. Den traditionelle metode til opnåelse af primære fibroblaster har begrænsninger, såsom dårlig cellulær tilstand, blanding med andre typer celler og modtagelighed for forurening. Dette papir beskriver en optimeret og let reproducerbar protokol, der kan reducere forekomsten af mulige problemer ved opnåelse af fibroblaster. I denne protokol kan fibroblaster observeres 5 dage efter isolering og nå næsten 80% sammenløb efter 10 dages kultur. Derefter passeres fibroblasterne og verificeres ved anvendelse af PDGFRα- og vimentinantistoffer til immunofluorescensassays og CD90-antistoffer til flowcytometri. Afslutningsvis kan fibroblaster fra keloidvæv let erhverves gennem denne protokol, som kan give en rigelig og stabil kilde til celler i laboratoriet til keloidforskning.

Protokollens tidslinje er opsummeret i figur 1A. Nogle repræsentative billeder af isolationsprocessen er vist i figur 2; Epidermis og fedtlagene blev omhyggeligt fjernet, og dermislaget blev adskilt i små fragmenter på 3-4 mm2, som blev inokuleret i petriskålene.
Som vist i figur 3A blev der observeret flere fibroblastudvækst af vævsstykkerne under mikroskopet 5 dage efter behandling....

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Culture, and Characterization of Primary Dermal Fibroblasts from Human Keloid Tissue at JoVE.com

Isolation, Culture, and Characterization of Primary Dermal Fibroblasts from Human Keloid Tissue

Denne undersøgelse beskriver en optimeret protokol til etablering af primære fibroblaster fra keloidvæv, der effektivt og støt kan tilvejebringe rene og levedygtige fibroblaster.

Isolering, kultur og karakterisering af primære dermale fibroblaster fra humant keloidvæv

Fibroblasts, the major cell type in keloid tissue, play an essential role in the formation and development&#160;of keloids. The isolation and culture of ...

Isolering og dyrkning af primære fibroblaster afledt af keloidvæv er grundlaget for yderligere undersøgelser af keloider. Fibroblaster fra keloidvæv kan let erhverves gennem denne protokol, som kan give en rigelig og stabil kilde til celler i laboratoriet til keloidforskning. Begynd med at bruge sterile pincet til at placere keloidvævet i et 50 ml sterilt centrifugerør indeholdende 10 til 25 ml PBS suppleret med 1% PSA.I mellemtiden tilsættes fire ml PBS PSA-opløsning til hver brønd i en seks-brøndplade. Tag nu vævet ud af røret, og vask to gange med PBS PSA-opløsning. Brug et par sterile tang til at overføre vævet sekventielt fra den ene brønd til den næste.Fjern derefter fedt- og epidermislagene med kirurgisk saks, og lad dermis være uberørt. Brug en saks til at dissekere den trimmede dermis i tre til fem kvadratmillimeter stykker og overfør stykkerne til den næste brønd med et par sterile tang. Stykkerne vaskes i PBS PSA-opløsning.Brug steriliserede tang til at placere 10 til 30 dermisvævsstykker med mindre end fem millimeter mellemrum i petriskåle. Placer opvasken på hovedet i en inkubator, indtil stykkerne tørrer og holder fast i fadet. Derefter tilsættes syv milliliter DMEM suppleret med 10% FBS og 1% PSA, og inkuber opvasken som før.Efter tre dage erstattes halvdelen af supernatanten med et komplet næringssubstrat. Overhold fibroblasterne dagligt under 40X mikroskopisk forstørrelse. Fjern vævsstykkerne i kulturmediet, når fibroblasterne når 90% sammenløb.Vask fibroblasterne i PBS og tilsæt to ml steril trypsin EDTA-opløsning. Efter inkubation af cellerne i en befugtet inkubator skal du forsigtigt trykke på kulturskålen og observere den under mikroskopet. Tilsæt to milliliter komplet medium for at afslutte fordøjelsen, når de fleste celler har løsnet sig.Overfør nu cellesuspensionen til et 15 ml sterilt centrifugerør og centrifuger røret ved 300G i tre minutter ved stuetemperatur. Supernatanten kasseres forsigtigt, og cellepelletsen opslæmmes igen i hele mediet. Frø fibroblasterne i en ni centimeter cellekulturskål og inkuber i en befugtet inkubator.For at udføre immunofluorescerende analyse efter dyrkning af fibroblasterne på runde dæksler og inkubation af dem i primære og sekundære antistoffer, tilsættes 50 mikroliter DAPI-opløsning til glasobjektglasset for at plette de cellulære kerner. Placer de vaskede dæksler på glasskinner ved hjælp af tang. Overfør til sidst prøverne til en våd mørk kasse til fluorescerende mikroskopi.Fibroblastudvækst af vævet blev observeret fem dage efter behandling. Fibroblasterne viste høje spredningshastigheder og nåede sammenløb efter 10 dage. Fibroblasterne havde aflange og spindellignende cellelegemer, som var justeret i bundter ved høj sammenløb.Immunofluorescerende farvning returnerede positiv rød immunfluorescens af fibroblasterne og blå immunofluorescens af den cellulære kerne. Flowcytometriske assays viste CD90-positivitet i næsten alle fibroblaster. Denne undersøgelse har beskrevet en optimeret metode og givet klare instruktioner til at løse eksisterende udfordringer og øge chancen for succes for isolering og kultur af keloid fibroblaster.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Eksperimentel Generering af Carcinoma-associerede fibroblaster (cafeer) fra Human brystkirtler fibroblaster

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

Hud Punch Biopsi Eksplantation Culture for Udledning af primære humane fibroblaster

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

Isolering af cardiomyocyte Kerner fra Post-mortem Tissue

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

Anvendelsen af ​​primære humane fibroblaster til overvågning Mitochondriale fænotyper i Field af Parkinsons sygdom

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

Isolation, Kultur og Imaging for Human Føtal pankreascelle Clusters

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Et tredimensionalt Tissue Culture Model til Study Primary human knoglemarv og dens Maligne

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Primær Culture of Human vestibulær schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Isolering og funktionel karakterisering af human Ventrikulær kardiomyocytter fra Fresh Kirurgiske Prøver

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...