Name: isolation, culture, and characterization of primary dermal fibroblasts from human keloid tissue
Uploaded: 2023-07-28T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Culture, and Characterization of Primary Dermal Fibroblasts from Human Keloid Tissue at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado por subsídios da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (números de concessão 81903189 e 82073418) e da Fundação de Ciência e Tecnologia de Guangzhou (número de bolsa 202102020025).

Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa do Hospital de Dermatologia da Southern Medical University (2020081). O consentimento informado dos pacientes foi obtido antes da coleta de tecidos dos indivíduos.
1. Preparo
NOTA: Os seguintes procedimentos devem ser realizados em um ambiente estéril sob um armário de segurança biológica.
<ol><li>Preparar o meio de cultura completo adicionando 10% de soro fetal bovino (FBS) e 1% de ...

<ol>
	<li>Zhu, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+of+Chinese+keloid+patients+identifies+novel+causative+genes.">Genome-wide analysis of Chinese keloid patients identifies novel causative genes.</a> Annals Of Translational Medicine. 10 (16), 883 (2022).</li><li>Feng, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+regulatory+factors+and+therapeutic+targets+in+keloid+fibrosis.">Biomechanical regulatory factors and therapeutic targets in keloid fibrosis.</a> Frontiers in Pharmacology. 13, 906212 (2022).</li><li>Cohen, A. J., Nikbakht, N., Uitto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keloid+disorder:+Genetic+basis,+gene+expression+profiles,+and+immunological+modulation+of+the+fibrotic+processes+in+the+skin.">Keloid disorder: Genetic basis, gene expression profiles, and immunological modulation of the fibrotic processes in the skin.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. , (2022).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+advances+in+the+selection+of+adjuvant+radiotherapy+regimens+for+keloid.">Current advances in the selection of adjuvant radiotherapy regimens for keloid.</a> Frontiers in Medicine. 9, 1043840 (2022).</li><li>Ghadiri, S. J., Kloczko, E., Flohr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+treatments+in+the+management+of+keloids+and+hypertrophic+scars:+A+critically+appraised+topic.">Topical treatments in the management of keloids and hypertrophic scars: A critically appraised topic.</a> British Journal of Dermatology. 187 (6), 855-856 (2022).</li><li>Neves, L. M. G., Wilgus, T. A., Bayat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro,+ex+vivo,+and+in+vivo+approaches+for+investigation+of+skin+scarring:+Human+and+animal+models.">In vitro, ex vivo, and in vivo approaches for investigation of skin scarring: Human and animal models.</a> Advances in Wound Care. 12 (2), 97-116 (2023).</li><li>Supp, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studies+of+keloid+scarring.">Animal models for studies of keloid scarring.</a> Advances in Wound Care. 8 (2), 77-89 (2019).</li><li>K&#252;nzel, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonic-augmented+primary+adult+fibroblast+isolation.">Ultrasonic-augmented primary adult fibroblast isolation.</a> Journal of Visualized Experiments. (149), e59858 (2019).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+explants+culture+method:+Sustainable+isolation+of+keloid+fibroblasts+with+primary+characteristics.">An improved explants culture method: Sustainable isolation of keloid fibroblasts with primary characteristics.</a> Journal of Cosmetic Dermatology. 21 (12), 7131-7139 (2022).</li><li>Philippeos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+single-cell+transcriptional+profiling+identifies+functionally+distinct+human+dermal+fibroblast+subpopulations.">Spatial and single-cell transcriptional profiling identifies functionally distinct human dermal fibroblast subpopulations.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 811-825 (2018).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+sulfide+suppresses+skin+fibroblast+proliferation+via+oxidative+stress+alleviation+and+necroptosis+inhibition.">Hydrogen sulfide suppresses skin fibroblast proliferation via oxidative stress alleviation and necroptosis inhibition.</a> Medicine and Cellular Longevity. 2022, 7434733 (2022).</li><li>Zhou, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nintedanib+inhibits+keloid+fibroblast+functions+by+blocking+the+phosphorylation+of+multiple+kinases+and+enhancing+receptor+internalization.">Nintedanib inhibits keloid fibroblast functions by blocking the phosphorylation of multiple kinases and enhancing receptor internalization.</a> Acta Pharmacologica Sinica. 41 (9), 1234-1245 (2020).</li><li>Wang, X. M., Liu, X. M., Wang, Y., Chen, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+transcription+factor+3+(ATF3)+regulates+cell+growth,+apoptosis,+invasion+and+collagen+synthesis+in+keloid+fibroblast+through+transforming+growth+factor+beta+(TGF-beta)/SMAD+signaling+pathway.">Activating transcription factor 3 (ATF3) regulates cell growth, apoptosis, invasion and collagen synthesis in keloid fibroblast through transforming growth factor beta (TGF-beta)/SMAD signaling pathway.</a> Bioengineered. 12 (1), 117-126 (2021).</li><li>Sato, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+medium+obtained+from+amnion-derived+mesenchymal+stem+cell+culture+prevents+activation+of+keloid+fibroblasts.">Conditioned medium obtained from amnion-derived mesenchymal stem cell culture prevents activation of keloid fibroblasts.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (2), 390-398 (2018).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+explant+culture:+An+improved+method+for+consistently+harvesting+homogeneous+populations+of+keloid+fibroblasts.">Long-term explant culture: An improved method for consistently harvesting homogeneous populations of keloid fibroblasts.</a> Bioengineered. 13 (1), 1565-1574 (2022).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+glucose+metabolism+and+cell+function+in+keloid+fibroblasts+under+hypoxia.">Altered glucose metabolism and cell function in keloid fibroblasts under hypoxia.</a> Redox Biology. 38, 101815 (2021).</li><li>Fan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+transcriptome+integration+analysis+reveals+the+correlation+between+mesenchymal+stromal+cells+and+fibroblasts.">Single-cell transcriptome integration analysis reveals the correlation between mesenchymal stromal cells and fibroblasts.</a> Frontiers in Genetics. 13, 798331 (2022).</li><li>Yao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+control+of+PDGFR&#945;+regulates+the+fibroblast-to-myofibroblast+transition+in+wound+healing.">Temporal control of PDGFR&#945; regulates the fibroblast-to-myofibroblast transition in wound healing.</a> Cell Reports. 40 (7), 111192 (2022).</li><li>Domdey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consecutive+dosing+of+UVB+irradiation+induces+loss+of+ABCB5+expression+and+activation+of+EMT+and+fibrosis+proteins+in+limbal+epithelial+cells+similar+to+pterygium+epithelium.">Consecutive dosing of UVB irradiation induces loss of ABCB5 expression and activation of EMT and fibrosis proteins in limbal epithelial cells similar to pterygium epithelium.</a> Stem Cell Research. 40, 102936 (2022).</li><li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+tubular+epithelial+cell+necroptosis+promotes+tubulointerstitial+fibrosis+in+patients+with+chronic+kidney+disease.">Renal tubular epithelial cell necroptosis promotes tubulointerstitial fibrosis in patients with chronic kidney disease.</a> FASEB Journal. 36 (12), e22625 (2022).</li><li>Korosec, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+identity+and+location+within+the+dermis+determine+the+function+of+papillary+and+reticular+fibroblasts+in+human+skin.">Lineage identity and location within the dermis determine the function of papillary and reticular fibroblasts in human skin.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (2), 342-351 (2019).</li></ol>

A obtenção de fibroblastos primários a partir de tecidos queloides é uma base crítica para futuras pesquisas. Até o momento, existem dois métodos para aquisição de fibroblastos primários: digestão enzimática e cultura de explantes11,12,13,14. Entretanto, ambos os métodos tradicionais apresentam limitações, como suscetibilidade à contaminação, mistura com outros tipos de célul...

O queloide, doença fibroproliferativa, manifesta-se como o crescimento contínuo de placas que frequentemente invadem a pele normal circundante sem autolimitação e causam vários graus de prurido, dor e cargas estéticas e psicológicas para os pacientes1. Os fibroblastos, células primárias envolvidas nos queloides, desempenham papel essencial na formação e desenvolvimento dessa doença por proliferação excessiva, produção redundante de matriz extracelular e desorganização de colágenos 2,3. No entanto, a patogênese subjacente permanece obscura, e um método terapêutico eficaz para queloide ainda está faltando; portanto, há uma necessidade urgente de novas pesquisas 4,5.
Como não existe um modelo animal ideal para a pesquisa de queloide in vivo6,7, a construção de um modelo in vitro por meio da aquisição de fibroblastos primários de tecidos queloides pode oferecer viabilidade e confiabilidade para a pesquisa de queloide 2,6. As células primárias são aquelas derivadas diretamente do tecido vivo, e é geralmente reconhecido que essas células podem se assemelhar mais ao estado fisiológico e ao background genético de múltiplos indivíduos em comparação com linhagens celulares 8,9. A cultura de células primárias fornece um meio poderoso para estudar o crescimento e o metabolismo das células, bem como outros fenótipos celulares.
Atualmente, existem dois métodos para aquisição de fibroblastos primários: digestão enzimática e cultura de explantes. Entretanto, vários obstáculos têm sido identificados para a obtenção de fibroblastos primários, tais como o risco de contaminação por várias bactérias ou fungos, a mistura com outros tipos de células que não são facilmente removidas, o longo período do ciclo de cultura, as subsequentes mudanças nas características celulares em relação às células originais, e assim por diante9. Portanto, o desenvolvimento de um processo viável e eficaz para a obtenção de fibroblastos primários é a base para novos estudos e aplicações. Este estudo descreve um protocolo otimizado para extração de fibroblastos primários de tecidos queloides que podem fornecer fibroblastos puros e viáveis de forma eficaz e constante.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL sterile centrifuge tube</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>CFT002015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tube</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>8076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% polyformaldehyde</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0099</td>
			<td>Cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tube</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>8081</td>
			<td>Put keloid tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor-555 goat anti-rabbit IgG&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Alexa&#160;Fluor&#160;555&#160;</td>
			<td>second antibody for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti human CD90</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>B301002</td>
			<td>Identify the purity of fibroblasts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody diluent</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological safety cabinet&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1300 series A2</td>
			<td>Isolation and culture cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>aladdin</td>
			<td>B265993</td>
			<td>Blocking for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide incubator</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>CCL-170B-8</td>
			<td>Using for culturing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell cryotubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>43513</td>
			<td>Store the cells in low temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifugal machine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>ST 16R</td>
			<td>Discard supernatant&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C1006</td>
			<td>Stain the cellular nucleus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>196055</td>
			<td>Using for preserving cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td>Culture medium solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>BI</td>
			<td>04-001-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD FACSCelesta</td>
			<td>Observing the identity of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>frozen box</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>&#160;5100-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE Ts2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>AIR-HD25</td>
			<td>Observing the immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFR-&#945; antibody</td>
			<td>CST</td>
			<td>3174T</td>
			<td>First antibody for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin-Am solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1410</td>
			<td>Add in culture medium solution to avoid contamination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petri dish</td>
			<td>JETBIOFIL</td>
			<td>7556</td>
			<td>Culture fibroblasts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C10010500BT</td>
			<td>Culture medium solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit (DAIE) mAB IgG XR (R) Isotuge Control (PE)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>5742S</td>
			<td>As a control for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round coverslip</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>801007</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X 100</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8200</td>
			<td>Punch holes in the cell membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200072</td>
			<td>Used for passaging cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab8978</td>
			<td>First antibody for immunofluorescence staining assay</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, culture, and characterization of primary dermal fibroblasts from human keloid tissue

Os fibroblastos, o principal tipo celular no tecido queloide, desempenham um papel essencial na formação e desenvolvimento dos queloides. O isolamento e a cultura de fibroblastos primários derivados de tecido queloide são a base para novos estudos da função biológica e dos mecanismos moleculares dos queloides, bem como novas estratégias terapêuticas para o seu tratamento. O método tradicional de obtenção de fibroblastos primários apresenta limitações, como mau estado celular, mistura com outros tipos de células e suscetibilidade à contaminação. Este trabalho descreve um protocolo otimizado e facilmente reprodutível que poderia reduzir a ocorrência de possíveis problemas na obtenção de fibroblastos. Neste protocolo, os fibroblastos podem ser observados 5 dias após o isolamento e atingem quase 80% de confluência após 10 dias de cultura. Em seguida, os fibroblastos são passados e verificados usando PDGFRα e anticorpos vimentina para ensaios de imunofluorescência e CD90 para citometria de fluxo. Em conclusão, fibroblastos de tecido queloide podem ser facilmente adquiridos através deste protocolo, o que pode fornecer uma fonte abundante e estável de células em laboratório para pesquisa de queloide.

A linha do tempo do protocolo está resumida na Figura 1A. Algumas imagens representativas do processo de isolamento são mostradas na Figura 2; a epiderme e as camadas adiposas foram cuidadosamente removidas, e a camada da derme foi separada em pequenos fragmentos de 3-4 mm2, que foram inoculados nas placas de Petri.
Como mostrado na Figura 3A, vários crescimentos de fibroblastos dos peda...

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Isolation, Culture, and Characterization of Primary Dermal Fibroblasts from Human Keloid Tissue

Este estudo descreve um protocolo otimizado para o estabelecimento de fibroblastos primários a partir de tecidos queloides que podem fornecer de forma eficaz e constante fibroblastos puros e viáveis.

Isolamento, Cultura e Caracterização de Fibroblastos Dérmicos Primários de Tecido Queloide Humano

Fibroblasts, the major cell type in keloid tissue, play an essential role in the formation and development&#160;of keloids. The isolation and culture of ...

O isolamento e a cultura de fibroblastos primários derivados de tecido queloide são a base para novos estudos de queloides. Fibroblastos de tecido queloide podem ser facilmente adquiridos através deste protocolo, que pode fornecer uma fonte abundante e estável de células em laboratório para pesquisa de queloide. Comece usando pinças estéreis para colocar o tecido queloide em um tubo de centrífuga estéril de 50 mililitros contendo 10 a 25 mililitros de PBS suplementado com 1% de PSA.Enquanto isso, adicione quatro mililitros de solução PBS PSA a cada poço de uma placa de seis poços. Agora retire o tecido do tubo e lave duas vezes com solução de PBS PSA. Usando um par de pinças estéreis, transfira o tecido sequencialmente de um poço para o outro.Em seguida, remova as camadas adiposa e epidérmica com tesoura cirúrgica, deixando a derme intocada. Use uma tesoura para dissecar a derme aparada em três a cinco pedaços de milímetros quadrados e transfira as peças para o próximo poço com um par de pinças estéreis. Lave as peças em solução PBS PSA.Usando pinças esterilizadas, coloque de 10 a 30 pedaços de tecido da derme espaçados menos de cinco milímetros em placas de Petri. Coloque os pratos de cabeça para baixo em uma incubadora até os pedaços secarem e grude no prato. Em seguida, adicione sete mililitros de DMEM suplementado com 10%FBS e 1%PSA, e incube os pratos como antes.Após três dias, substituir metade do sobrenadante por meio de cultura completo. Observar os fibroblastos diariamente sob aumento microscópico de 40X. Retirar os pedaços de tecido no meio de cultura quando os fibroblastos atingirem 90% de confluência.Lave os fibroblastos em PBS e adicione dois mililitros de solução estéril de tripsina EDTA. Depois de incubar as células em uma incubadora umedecida, bata suavemente na placa de cultura e observe-a ao microscópio. Adicione dois mililitros de meio completo para terminar a digestão uma vez que a maioria das células se desprenderam.Agora transfira a suspensão da célula para um tubo centrífugo estéril de 15 mililitros e centrifugue o tubo a 300G por três minutos à temperatura ambiente. Descarte o sobrenadante cuidadosamente e ressuspenda o pellet celular em meio completo. Semeando os fibroblastos em uma placa de cultura celular de nove centímetros e incubar em uma incubadora umedificada.Para realizar a análise de imunofluorescência após cultivar os fibroblastos em lamínulas redondas e incubá-los em anticorpos primários e secundários, adicionar 50 microlitros de solução de DAPI à lâmina de vidro para corar os núcleos celulares. Coloque as lamínulas lavadas sobre lâminas de vidro usando pinças. Finalmente, transfira as amostras para uma caixa escura úmida para microscopia fluorescente.Crescimentos de fibroblastos do tecido foram observados cinco dias após o processamento. Os fibroblastos apresentaram altas taxas de proliferação e atingiram confluência após 10 dias. Os fibroblastos tinham corpos celulares alongados e fusiformes, os quais estavam alinhados em feixes em alta confluência.A coloração por imunofluorescência retornou imunofluorescência vermelha positiva dos fibroblastos e imunofluorescência azul do núcleo celular. Os ensaios por citometria de fluxo mostraram positividade para CD90 em quase todos os fibroblastos. Este estudo descreveu um método otimizado e forneceu instruções claras para resolver os desafios existentes e aumentar a chance de sucesso para o isolamento e cultura de fibroblastos de queloide.

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