Name: Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-05-19T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator at JoVE.com

저자는 실험 지원에 대해 Takahito Wada와 Saiko Yoshida (일본 도쿄 도쿄 대학)에게 감사의 말을 전합니다. 이 연구는 Y.H.에 대한 다음과 같은 보조금으로 자금을 지원받았습니다: 도쿄 대학 우수 젊은 연구원 프로그램의 연구 보조금; 일본 과학 진흥회 (JSPS) KAKENHI 초기 경력 과학자 보조금, 보조금 번호 19K17976; 일본 응용 효소학 재단의 미래 당뇨병 연구(FFDR)의 선두주자에 대한 보조금, 보조금 번호 17F005; 약리학 연구 재단의 보조금; 의학 및 제약 연구를 위한 모치다 기념 재단의 보조금; MSD 생명 과학 재단의 보조금; 다이와 증권 건강 재단의 보조금; 도쿄 생화학 연구 재단의 보조금; 다케다 과학 재단 (Takeda Science Foundation)의 생명 과학 연구 보조금; SENSHIN Medical Research Foundation의 보조금.

이 프로토콜에 설명된 모든 동물 실험은 도쿄 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받았으며 도쿄 대학의 기관 지침에 따라 수행되었습니다.
1. 효소액 및 배지의 제조
<ol><li>7-8주령 마우스의 사타구니 백색 지방 조직 양쪽(좌우, 약 150mg)과 효소 용액 2.5mL를 해리기의 튜브 C에 넣습니다.</li>
	<li>소 태아 혈청(FBS) 또는 항생제가 없는 Dulbecco's modified...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

<ol>
	<li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Hotamisligil, G. S., Shargill, N. S., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+expression+of+tumor+necrosis+factor-alpha:+direct+role+in+obesity-linked+insulin+resistance.">Adipose expression of tumor necrosis factor-alpha: direct role in obesity-linked insulin resistance.</a> Science. 259 (5091), 87-91 (1993).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue.">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li><li>Kajimura, S., Saito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+era+in+brown+adipose+tissue+biology:+Molecular+control+of+brown+fat+development+and+energy+homeostasis.">A new era in brown adipose tissue biology: Molecular control of brown fat development and energy homeostasis.</a> Annual Review of Physiology. 76, 225-249 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and+human.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and human.</a> Cell. 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Loos, R. J. F., Yeo, G. S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+obesity:+from+discovery+to+biology.">The genetics of obesity: from discovery to biology.</a> Nature Reviews Genetics. 23 (2), 120-133 (2022).</li><li>Loos, R. J. F., Yeo, G. S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bigger+picture+of+FTO-the+first+GWAS-identified+obesity+gene.">The bigger picture of FTO-the first GWAS-identified obesity gene.</a> Nature Reviews Endocrinology. 10 (1), 51-61 (2014).</li><li>Hiraike, Y., Yang, C. T., Liu, W. J., Yamada, T., Lee, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FTO+obesity+variant-exercise+interaction+on+changes+in+body+weight+and+BMI:+The+Taiwan+biobank+study.">FTO obesity variant-exercise interaction on changes in body weight and BMI: The Taiwan biobank study.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 106 (9), e3673-e3681 (2021).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+activity+attenuates+the+genetic+predisposition+to+obesity+in+20,000+men+and+women+from+EPIC-Norfolk+prospective+population+study.">Physical activity attenuates the genetic predisposition to obesity in 20,000 men and women from EPIC-Norfolk prospective population study.</a> PLoS Medicine. 7 (8), e1000332 (2010).</li><li>Claussnitzer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FTO+obesity+variant+circuitry+and+adipocyte+browning+in+humans.">FTO obesity variant circuitry and adipocyte browning in humans.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (10), 895-907 (2015).</li><li>Tontonoz, P., Hu, E., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+adipogenesis+in+fibroblasts+by+PPAR+gamma+2,+a+lipid-activated+transcription+factor.">Stimulation of adipogenesis in fibroblasts by PPAR gamma 2, a lipid-activated transcription factor.</a> Cell. 79 (7), 1147-1156 (1994).</li><li>Seale, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+brown+fat+determination+by+PRDM16.">Transcriptional control of brown fat determination by PRDM16.</a> Cell Metabolism. 6 (1), 38-54 (2007).</li><li>Seale, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PRDM16+controls+a+brown+fat/skeletal+muscle+switch.">PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch.</a> Nature. 454 (7207), 961-967 (2008).</li><li>Rajakumari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EBF2+determines+and+maintains+brown+adipocyte+identity.">EBF2 determines and maintains brown adipocyte identity.</a> Cell Metabolism. 17 (4), 562-574 (2013).</li><li>Shapira, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EBF2+transcriptionally+regulates+brown+adipogenesis+via+the+histone+reader+DPF3+and+the+BAF+chromatin+remodeling+complex.">EBF2 transcriptionally regulates brown adipogenesis via the histone reader DPF3 and the BAF chromatin remodeling complex.</a> Genes and Development. 31 (7), 660-673 (2017).</li><li>Hiraike, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFIA+co-localizes+with+PPAR&#947;+and+transcriptionally+controls+the+brown+fat+gene+program.">NFIA co-localizes with PPAR&#947; and transcriptionally controls the brown fat gene program.</a> Nature Cell Biology. 19 (9), 1081-1092 (2017).</li><li>Hiraike, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFIA+differentially+controls+adipogenic+and+myogenic+gene+program+through+distinct+pathways+to+ensure+brown+and+beige+adipocyte+differentiation.">NFIA differentially controls adipogenic and myogenic gene program through distinct pathways to ensure brown and beige adipocyte differentiation.</a> PLoS Genetics. 16 (9), e1009044 (2020).</li><li>Hiraike, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFIA+determines+the+cis-effect+of+genetic+variation+on+Ucp1+expression+in+murine+thermogenic+adipocytes.">NFIA determines the cis-effect of genetic variation on Ucp1 expression in murine thermogenic adipocytes.</a> iScience. 25 (8), 104729 (2022).</li><li>Villanueva, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+subtype-selective+recruitment+of+TLE3+or+Prdm16+by+PPAR&#947;+specifies+lipid+storage+versus+thermogenic+gene+programs.">Adipose subtype-selective recruitment of TLE3 or Prdm16 by PPAR&#947; specifies lipid storage versus thermogenic gene programs.</a> Cell Metabolism. 17 (3), 423-435 (2013).</li><li>Pearson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+TLE3+promotes+the+mitochondrial+program+in+beige+adipocytes+and+improves+glucose+metabolism.">Loss of TLE3 promotes the mitochondrial program in beige adipocytes and improves glucose metabolism.</a> Genes and Development. 33 (13-14), 747-762 (2019).</li><li>Shao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zfp423+maintains+white+adipocyte+identity+through+suppression+of+the+beige+cell+thermogenic+gene+program.">Zfp423 maintains white adipocyte identity through suppression of the beige cell thermogenic gene program.</a> Cell Metabolism. 23 (6), 1167-1184 (2016).</li><li>Green, H., Kehinde, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sublines+of+mouse+3T3+cells+that+accumulate+lipid.">Sublines of mouse 3T3 cells that accumulate lipid.</a> Cell. 1 (3), 113-116 (1974).</li><li>Green, H., Kehinde, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+established+preadipose+cell+line+and+its+differentiation+in+culture+II.+Factors+affecting+the+adipose+conversion.">An established preadipose cell line and its differentiation in culture II. Factors affecting the adipose conversion.</a> Cell. 5 (1), 19-27 (1975).</li><li>Green, H., Kehinde, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+heritable+changes+leading+to+increased+adipose+conversion+in+3T3+cells.">Spontaneous heritable changes leading to increased adipose conversion in 3T3 cells.</a> Cell. 7 (1), 105-113 (1976).</li><li>Aune, U. L., Ruiz, L., Kajimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+differentiation+of+stromal+vascular+cells+to+beige/brite+cells.">Isolation and differentiation of stromal vascular cells to beige/brite cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50191 (2013).</li><li>Galmozzi, A., Kok, B. P., Saez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+differentiation+of+primary+white+and+brown+preadipocytes+from+newborn+mice.">Isolation and differentiation of primary white and brown preadipocytes from newborn mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (167), e62005 (2021).</li><li>Priya, N., Sarcar, S., Majumdar, A. S., SundarRaj, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explant+culture:+a+simple,+reproducible,+efficient+and+economic+technique+for+isolation+of+mesenchymal+stromal+cells+from+human+adipose+tissue+and+lipoaspirate.">Explant culture: a simple, reproducible, efficient and economic technique for isolation of mesenchymal stromal cells from human adipose tissue and lipoaspirate.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 8 (9), 706-716 (2014).</li><li>Lockhart, R. A., Aronowitz, J. A., Dos-Anjos Vilaboa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+freshly+isolated+human+adipose+stromal+cells+for+clinical+applications.">Use of freshly isolated human adipose stromal cells for clinical applications.</a> Aesthetic Surgery Journal. 37, S4-S8 (2017).</li><li>Morita, S., Kojima, T., Kitamura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plat-E:+an+efficient+and+stable+system+for+transient+packaging+of+retroviruses.">Plat-E: an efficient and stable system for transient packaging of retroviruses.</a> Gene Therapy. 7 (12), 1063-1066 (2000).</li><li>Li, Y., Fromme, T., Klingenspor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meaningful+respirometric+measurements+of+UCP1-mediated+thermogenesis.">Meaningful respirometric measurements of UCP1-mediated thermogenesis.</a> Biochimie. 134, 56-61 (2017).</li><li>Hiraike, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+immunoprecipitation+with+mouse+adipocytes+using+hypotonic+buffer+to+enrich+nuclear+fraction+before+fixation.">Chromatin immunoprecipitation with mouse adipocytes using hypotonic buffer to enrich nuclear fraction before fixation.</a> STAR Protocols. 4 (1), 102093 (2023).</li><li>Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+white+adipocyte+progenitor+cells+in+vivo.">Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo.</a> Cell. 135 (2), 240-249 (2008).</li></ol>

여기에서 우리는 지방전구세포를 얻고 시험관 내에서 지방세포 분화를 수행하기 위해 쥐 지방 조직으로부터 SVF를 분리하기 위한 프로토콜을 설명했습니다. 콜라게나제 분해를 위한 조직 해리제의 사용은 실험 변형을 감소시키고 오염 위험을 줄이며 재현성을 증가시켰습니다. 이 절차는 제시된 프로토콜 내에서 중요한 단계이지만 프로세스는 고도로 자동화되어 있으며 최적화가 필요하지...

지방 조직 생물학은 전 세계적으로 비만과 제2형 당뇨병의 유병률이 증가함에 따라 점점 더 많은 관심을 받고 있습니다1. 지방 세포는 기아 시 방출되는 지질 방울의 형태로 과도한 에너지를 저장합니다. 또한, 지방 조직은 내분비 기관으로 작용하고 다른 조직과 소통함으로써 전신 에너지 항상성을 유지한다 2,3. 흥미롭게도, 과도한 지방 조직(비만)과 지방 손실(지방이영양증)은 모두 인슐린 저항성 및 당뇨병과 관련이 있습니다1. 지방세포는 흰색, 갈색, 베이지색의 세 가지 유형으로 나뉩니다1. 백색 지방세포는 주로 과잉 에너지를 지질로 저장하는 반면, 갈색 및 베이지색 지방세포는 미토콘드리아 분리 단백질-1(Ucp1)을 통해 열의 형태로 에너지를 발산합니다.1,4. 특히, 베이지색 지방세포("유도성" 갈색 지방세포라고도 함)는 차가운 자극 또는 교감신경 자극에 반응하여 백색 지방세포에 나타나며, "고전적인" 갈색 지방세포와 겹치지만 구별되는 유전자 발현 패턴을 보인다5. 최근, 갈색 및 베이지색 지방세포는 "에너지 섭취 억제"보다는 "에너지 소산 향상"을 목표로 하는 항비만 및 항당뇨병 치료의 잠재적 표적으로 예상되었습니다4. 이를 뒷받침하는 바로는, 인간에서 FTO 비만 변이체 rs1421085의 위험 대립유전자는 일반적인 변이체 6,7 중에서 더 높은 체질량 지수(BMI)와 가장 강한 연관성을 나타내고 다양한 유전자-환경 상호작용8,9을 나타내며, 베이지색 지방세포 분화 및 기능을 음성적으로 조절하는 것으로 보고되었다10. 과산화소체 증식제 활성화 수용체 γ(PPARγ)은 지방생성의 마스터 전사 조절인자로 알려져 있으며, 지방세포 분화에 필요하고 충분하다11. 전사 조절인자, 예컨대 PRD1-BF1-RIZ1 상동 도메인 16 (PRDM16), 초기 b 세포 인자 2 (EBF2) 및 핵 인자 I-A (NFIA)는 갈색 및 베이지색 지방세포 분화 및 기능에 결정적이다 12,13,14,15,16,17,18. 반면에, 백색 지방 세포 유전자 프로그래밍은 트랜스듀신 유사 인핸서 단백질 3 (TLE3) 및 징크 핑거 단백질 423 (ZFP423) 19,20,21과 같은 전사 조절자를 필요로합니다.
체외 모델 시스템을 통해 지방 세포의 기능과 기능 장애의 기초가 되는 메커니즘에 대한 이해를 향상시키는 것을 목표로 하는 분자 연구를 수행할 수 있습니다. 3T3-L1 및 3T3-F442A와 같은 공개적으로 이용 가능하고 불멸화된 지방전구세포 세포주 가 존재하지만22,23,24, 1차 지방전구세포의 배양 및 지방세포로의 분화는 생체내 지방생성을 연구하는 데 더 적합한 모델이 될 것이다. 쥐 지방 조직으로부터 기질 혈관 분획 (SVF)을 분리하는 것은 1 차 지방 전구 세포를 얻는 잘 알려진 방법이다25,26. 그러나 일반적으로 튜브 랙이 있는 박테리아 셰이커를 사용하여 수행되는 지방 조직의 콜라게나제 분해는 실험적 변형을 초래할 수 있으며 오염되기 쉽습니다27,28. 여기에서는 SVF를 더 쉽게 분리하기 위해 콜라게나제 소화를 위해 부드러운 MACS(Magnetic-Activated Cell Sorting) 조직 해리기를 사용하는 대체 프로토콜을 설명합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm dish</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>3010-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adipose Tissue Dissociation Kit, mouse and rat</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-105-808</td>
			<td>contents: Enzyme D, Enzyme R, Enzyme A and Buffer A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#181;m</td>
			<td>BD falcon</td>
			<td>#352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen coated dishes, 100 mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>#356450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen coated dishes, 60 mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>#354401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen I Coat Microplate 6 well</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>4810-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Wako</td>
			<td>041-18861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Forceps</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors, blunt/sharp</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors, sharp/sharp</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, GlutaMAX supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10565-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS C Tubes</td>
			<td>Milteny Biotec</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACSOcto Dissociator with Heaters</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humulin R Injection U-100</td>
			<td>Eli Lilly</td>
			<td>872492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7378-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutylmethylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>17018-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11668-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin Sulfate</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>146-08871&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td>31985-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBABE-neo largeTcDNA (SV40)</td>
			<td>Add gene</td>
			<td>#1780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum-E (Plat-E) Retroviral Packaging Cell Line</td>
			<td>cell biolab</td>
			<td>RV-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>12996-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Sybr Green Master Mix</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReverTra Ace qPCR RT Master Mix</td>
			<td>TOYOBO</td>
			<td>#FSQ-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit (250)</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosiglitazone</td>
			<td>Wako</td>
			<td>180-02653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T2877-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.05%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

semi-automated isolation of the stromal vascular fraction from murine white adipose tissue using a tissue dissociator

흰색, 갈색 및 베이지색 지방세포 분화에 대한 시험관 내 연구를 통해 지방세포의 세포 자율 기능과 그 메커니즘을 조사할 수 있습니다. 불멸화 된 백색 지방 전구 세포 세포주는 공개적으로 이용 가능하며 널리 사용됩니다. 그러나 외부 신호에 대한 반응으로 백색 지방 조직에서 베이지색 지방세포의 출현은 공개적으로 이용 가능한 백색 지방세포 세포주를 사용하여 완전히 재현하기 어렵습니다. 쥐 지방 조직으로부터 기질 혈관 분획 (SVF)의 분리는 일반적으로 1 차 지방 전구 세포를 얻고 지방 세포 분화를 수행하기 위해 실행됩니다. 그러나 손으로 지방 조직을 다듬고 콜라게나제를 분해하면 실험적 변형이 발생할 수 있으며 오염되기 쉽습니다. 여기에서 우리는 실험 변형을 줄이고 오염을 줄이며 재현성을 높이기 위해 SVF를 더 쉽게 분리하기 위해 콜라게나제 소화를 위한 조직 해리기를 활용하는 수정된 반자동 프로토콜을 제시합니다. 얻어진 지방전구세포와 분화된 지방세포는 기능적 및 기계론적 분석에 사용할 수 있습니다.

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

이 프로토콜은 지방 세포 분화를 유도한 후 7일 후에 완전히 분화된 지질이 함유된 지방 세포를 생성합니다. 지방세포 분화 정도는 트리글리세리드 및 지질의 오일 레드 오 염색(도 1A) 또는 지방세포 생성의 마스터 조절인자인 Pparg 및 이의 표적 Fabp4와 같은 지방세포 유전자의 qPCR-RT를 이용한 mRNA 발현 분석에 의해 평가될 수 있다(도 1B). <em...

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Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

이 프로토콜은 지방전구세포를 얻고 시험관 내에서 지방세포 분화를 달성하기 위해 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 분획(SVF)의 반자동 분리를 설명합니다. 콜라게나제 분해를 위해 조직 해리제를 사용하면 실험 변동이 줄어들고 재현성이 높아집니다.

조직 해리기를 사용하여 쥐 백색 지방 조직에서 기질 혈관 분획의 반자동 분리

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...

우리는 열의 형태로 에너지를 발산하는 갈색 및 베이지색 지방세포의 아형에 관심이 있는 반면, 백색 지방세포는 일반적으로 에너지 섭취를 억제하는 것이 아니라 에너지 소비를 촉진하여 비만과 당뇨병에 대한 새로운 치료법을 개발하는 것이 목표입니다. 우리는 전사 인자인 NFI를 게놈 차원의 개방형 염색질 분석에 의해 갈색 지방세포 분화의 중요한 조절자로 확인했습니다. NFI와 지방 생성의 마스터 전사 조절자인 PPAR-감마는 갈색 지방 특이적 강화제로 공동 국소화됩니다.마우스 지방 조직으로부터 기질 혈관 분획을 분리하는 과정에서, 지방 조직의 수동 다짐 및 콜라게나제 소화는 실험적 가변성 및 오염을 초래할 수 있다. 우리의 방법은 콜라게나제 소화를 위해 조직 해리제를 사용하여 SVF 분리를 용이하게 하고 실험 가변성과 오염을 줄이며 재현성을 향상시킵니다. 개별적으로 분화된 지방세포를 이용한 실험은 본 분야의 연구에 빠뜨릴 수 없습니다.우리의 프로토콜은 후속 지방 세포 분화를 위해 쉽고 재현 가능한 SVF 분리를 제공하고 우리 커뮤니티에서 연구를 가속화할 것입니다. 현재 우리는 기능 마우스 모델의 이득 및 손실을 사용하여 체중 및 포도당과 같은 전신 대사의 NFI의 역할을 조사하고 있습니다. 우리는 또한 가까운 장래에 각 다운스트림 경로에 대한 NFI의 다른 약리학적 활성화를 탐구할 것입니다.