Name: Автор в центре внимания: Усовершенствованная методика обнаружения триметиламинов в медицине животного происхождения с помощью газовой хроматографии и тандемной квадрупольной масс-спектрометрии
Uploaded: 2023-03-10T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (82173991) и Сычуаньской научно-технической программы (2022YFS0442).

В таблице 1 приведена информация о лекарственных материалах Pheretima, Periplaneta americana и Hirudo. Они были идентифицированы профессором Сюй Жуньчунем из Чэндуского университета традиционной китайской медицины как высушенные тела Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. и...

Обнаружение триметиламинов в медицине животного происхождения с помощью Headspace GC-MS

<ol>
	<li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+basis+of+stench+of+animal+medicine:+a+review.">Material basis of stench of animal medicine: a review.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).</li><li>Deng, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+on+formation+and+taste-masking+technology+of+stench+of+animal+medicines.">Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).</li><li>Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+populations+and+the+volatilome+associated+to+meat+spoilage.">Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage.</a> Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).</li><li>Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contaminants+of+poultry+meat:+sources,+species,+and+dynamics.">Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics.</a> Microorganisms. 5 (3), 50 (2017).</li><li>Bali&#241;o-Zuazo, L., Barranco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+liquid+chromatography-mass+spectrometric+method+for+the+simultaneous+determination+of+trimethylamine,+dimethylamine+and+methylamine+in+fishery+products.">A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products.</a> Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-efficient+trimethylamine+gas+sensor+based+on+Au+nanoparticles+sensitized+WO3+nanosheets+for+rapid+assessment+of+seafood+freshness.">Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness.</a> Food Chemistry. 392, 133318 (2022).</li><li>Bota, G. M., Harrington, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+detection+of+trimethylamine+in+meat+food+products+using+ion+mobility+spectrometry.">Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry.</a> Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).</li><li>Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivatization-free+determination+of+short-chain+volatile+amines+in+human+plasma+and+urine+by+headspace+gas+chromatography-mass+spectrometry.">Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062 (2020).</li><li>Mitsubayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine+biosensor+with+flavin-containing+monooxygenase+type+3+(FMO3)+for+fish-freshness+analysis.">Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis.</a> Sensors &amp; Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).</li><li>National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GB 5009. 179-2016. , 12 (2016).</li><li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+material+basis+and+processing+principle+of+fishy+smell+of+Pheretima+aspergillum+by+electronic+nose+and+HS-GC-MS.">Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).</li><li>Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+on+changes+of+volatile+components+in+Gecko+before+and+after+processing+by+HS-SPME-GC-MS.">Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).</li><li>Yoshiharu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Odor olfactory measurement. , (2004).</li><li>Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+sulfur+dioxide+residues+in+sulfur+fumigated+Chinese+herbs+with+headspace+gas+chromatography.">Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).</li></ol>

Лекарственные препараты животного происхождения получают из всего организма, органов или тканей, физиологических или патологических продуктов, выделений или выделений, а также продуктов переработки животных. ТМА является важным источником рыбного запаха в лекарствах животного прои?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated from:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
Haozhou Huang2 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin3 
Xiaoming Bao4 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
JiaBao Liao2 
Haozhou Huang3 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin4 
Xiaoming Bao5 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd 
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Shimadzu (China) Co., Ltd

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated.

Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Лечению болезней человека с использованием продуктов, полученных из частей животных и/или их побочных продуктов (здесь именуемых лекарствами животного происхождения), уделяется повышенное внимание. Они играют важную роль в лечении рака, сердечно-сосудистых заболеваний, цирроза печени, мастита и других заболеваний, обладая преимуществами сильного эффекта, небольшой дозировки и значительной и специфической клинической эффективности. Однако лекарства животного происхождения, как правило, имеют ярко выраженный рыбный запах, который сильно влияет на комплаентность пациентов и особенно неблагоприятен для детей 1,2. Рыбный запах в основном исходит от белков, аминокислот, жиров и других веществ, содержащихся в лекарстве, которые разлагаются путем окисления жирных кислот, разложения аминокислот и другими способами с образованием различных веществ с рыбным запахом 2,3,4. Среди них триметиламин (ТМА) представляет собой летучий газ с рыбным запахом, который широко распространен в гниющих или гнилых продуктах животного происхождения5.
До сих пор для обнаружения ТМА в окружающей среде, пищевых продуктах и моче широко использовались газовая хроматография (ГХ), жидкостная хроматография (ЖХ), ионная хроматография, спектрофотометрия, жидкостная хромато-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) и сенсорные методы 6,7,8,9. Ввиду низкой загрязненности колонки ГХ и системы впрыска, а также высокой чувствительности, воспроизводимости и низкого предела обнаружения (0,1-1 мг/кг) для анализа пищевых продуктов и биологического анализа был отдан предпочтение методу газовой хромато-масс-спектрометрии в свободном пространстве (HS-GC-MS)8. В настоящее время только в Китае установлен национальный стандарт для ТМА в пищевых продуктах, и HS-GC-MS является первым методом в стандарте GB5009.179-201610. Поэтому для выявления ТМА в медицине животного происхождения был выбран вышеуказанный метод HS-GC-MS. На ранней стадии наша исследовательская группа обнаружила, что стандарт обнаружения HS-GC-MS для ТМА в пищевых продуктах может обнаруживать рыбный запах в нескольких лекарствах животного происхождения. В сочетании с результатами исследований11,12 можно доказать, что ТМА является распространенным ключевым веществом рыбного запаха в лекарствах животного происхождения. Тем не менее, было обнаружено, что воспроизводимость экспериментальных результатов была низкой, и были такие проблемы, как побег ТМА и плохая стабильность, которые не могли быть проверены методологией. Это могло быть связано с тем, что щелочь вводилась во флакон свободного пространства, и быстрая кислотно-щелочная реакция приводила к повышению давления во флаконе, таким образом, ТМА выходила из поры инъекции, препятствуя стабильному и точному обнаружению ТМА. Таким образом, в данном исследовании был предложен усовершенствованный метод обнаружения газовой хроматографии с тандемной квадрупольной масс-спектрометрией (HS-GC-MS/MS) для решения этих проблем.
Протокол улучшает предварительную обработку образца за счет разделения кислотно-щелочных реагентов в предварительной обработке с помощью твердого парафина, хорошего материала для фазового перехода твердой и жидкой фаз. По мере того, как парафин медленно разжижался с повышением температуры термостатической печи, ТМА также медленно высвобождался в герметичном флаконе, избегая повышения давления, вызванного бурной и быстрой кислотно-щелочной реакцией, и обеспечивая стабильное и точное обнаружение ТМА. Кроме того, инжекция свободного пространства в сочетании с режимами множественного мониторинга реакций (MRM) в ГХ-МС/МС эффективно подавляла матричные химические интерференции и обеспечивала достоверность результатов. Результаты методологической валидации доказали, что линейность, точность испытаний и скорость восстановления усовершенствованного метода обнаружения могут соответствовать требованиям, с хорошей воспроизводимостью и высокой чувствительностью.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter Trading (China) Co.</td>
			<td>SSC-2-0213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chinese herbal medicine grinder</td>
			<td>Zhejiang Yongkang Xi&#39;an Hardware and Pharmaceutical Factory</td>
			<td>HX-200K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection oven</td>
			<td>Sanyo Electric Co., Ltd</td>
			<td>MOV-112F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decapper for 20 mm Aluminum caps</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>V1750004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>AUW220D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatography mass spectrometry</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>TQ-8050 NX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headspace Vial</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>25760200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Shanghai biaomo Factory</td>
			<td>FJ200-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preassembled Cap</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>L4150050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample sieve</td>
			<td>Zhenxing Sieve Factory</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SH-Volatile Amine</td>
			<td>Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd</td>
			<td>227-3626-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022101401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid paraffin wax</td>
			<td>Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory</td>
			<td>20221112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022102001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylamine hydrochloride</td>
			<td>Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>AF22022108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-pure water system</td>
			<td>Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd</td>
			<td>UPR-11-5T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved technique for trimethylamine detection in animal-derived medicine by headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry

Лекарственные препараты животного происхождения обладают отличительными характеристиками и значительными лечебными эффектами, но большинство из них имеют явный рыбный запах, что приводит к плохой комплаентности клинических пациентов. Триметиламин (ТМА) является одним из ключевых компонентов рыбного запаха в медицине животного происхождения. Трудно точно идентифицировать ТМА с помощью существующего метода обнаружения из-за повышенного давления во флаконе свободного пространства, вызванного быстрой кислотно-щелочной реакцией после добавления щелочи, что приводит к выходу ТМА из флакона с свободным пространством, что замедляет прогресс в исследовании рыбного запаха лекарств животного происхождения. В этом исследовании мы предложили метод контролируемого детектирования, который вводил слой парафина в качестве изолирующего слоя между кислотой и щелочью. Скорость производства ТМА можно эффективно контролировать, медленно разжижая слой парафина с помощью термостатического нагрева печи. Этот метод показал удовлетворительную линейность, точность экспериментов и восстановление с хорошей воспроизводимостью и высокой чувствительностью. Она оказывала техническую поддержку дезодорации лекарственных средств животного происхождения.

Treating human diseases by utilizing products derived from animal parts and/or their by-products (referred to here as animal-derived medicines) is receiving increased attention. They play an important role in treating cancer, cardiovascular disease, liver cirrhosis, mastitis, and other diseases, with the advantages of a strong effect, small dosage, and significant and specific clinical efficacy. However, animal-derived medicines generally have a prominent fishy odor, which greatly affects patients&#39; compliance, and are especially unfavorable for children1,2. The fishy odor mainly comes from the proteins, amino acids, fats, and other substances contained in the medicine, which are decomposed through fatty acid oxidation, amino acid degradation, and other ways to produce a variety of substances with a fishy odor2,3,4. Among them, trimethylamine (TMA) is a volatile gas with a fishy odor that widely exists in rotting or rotten animal-derived foods5.
Until now, gas chromatography (GC), liquid chromatography (LC), ion chromatography, spectrophotometry, liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and sensor methods have commonly been used to detect TMA in the environment, food, and urine6,7,8,9. In view of the low contamination of the GC column and injection system, as well as the high sensitivity, reproducibility, and low detection limit (0.1-1 mg/kg), the headspace gas chromatography-mass spectrometry (HS-GC-MS) method was preferred for food and biological analysis8. At present, only China has established a national standard for TMA in food, and HS-GC-MS is the first method in the GB5009.179-2016 standard10. Therefore, the above HS-GC-MS method was selected to detect TMA in animal-derived medicine. In the early stage, our research group found that the HS-GC-MS detection standard for TMA in food could detect the fishy odor in several animal-derived medicines. Combined with the results of the studies11,12, it could be proved that TMA is the common key substance of fishy odor in animal-derived medicines. However, it was found that the reproducibility of the experimental results was poor, and there were problems such as TMA escape and poor stability, which could not be verified by the methodology. This could be due to the fact that the lye was injected into the headspace vial and the rapid acid-base reaction led to increased pressure in the vial, thus TMA escaped from the injection pore, preventing the stable and accurate detection of TMA. Therefore, this study proposed an improved headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) detection method to address these problems.
The protocol improves the sample pretreatment by separating the acid-base reactants in the pretreatment with the help of solid paraffin, a good solid-liquid phase change material. As the paraffin slowly liquefied with the temperature rise of the thermostatic furnace, TMA was also slowly released in the sealed headspace vial, avoiding the pressure increase caused by the violent and rapid acid-base reaction and ensuring stable and accurate TMA detection. Further, the headspace injection combined with multiple reaction monitoring (MRM) modes) in GC-MS/MS effectively suppressed matrix chemical interference and ensured the reliability of the results. The results of the methodological validation proved that the linearity, precision test, and recovery rate of the improved detection method could meet the requirements, with good reproducibility and high sensitivity.

Автор в центре внимания: Усовершенствованная методика обнаружения триметиламинов в медицине животного происхождения с помощью газовой хроматографии и тандемной квадрупольной масс-спектрометрии  

Усовершенствованный метод детектирования триметиламина в медицине животного происхождения с помощью газовой хроматографии в свободном пространстве с тандемной квадрупольной масс-спектрометрией

The scope of our research is a material basis in the variation of fish odor in animal medicine. This protocol provides a simple pretreatment method and accurate detection of trimethylamine in animal medicines. The simple pretreatment methods and the programmed parameters of HS-GC mass/mass of this protocol, need to be further optimized, and we still have a lot of work to do.Our protocol adopts the multi-direction monitoring mode of GC mass/mass, combined with a unique, simple pretreatment, which is not only the first pretreatment for trimethylamine analysis, but also the first analytical mode to be used.

Принципиальные схемы принципа предварительной обработки и работы этого протокола приведены на рисунке 1 и рисунке 2 соответственно. Пиковое время ТМА составило 2,3 мин, с острой формой пика и отсутствием помех от других примесей (рис. 3). Пр?...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry at JoVE.com

В данной работе описан метод газовой хроматографии и тандемной квадрупольной масс-спектрометрии (HS-GC-MS/MS), пригодный для определения триметиламина (ТМА) в лекарственных средствах животного происхождения. Протокол включает в себя предварительную обработку образца, обработку свободного пространства, условия анализа, методологическую валидацию и определение ТМА в лекарственных средствах животного происхождения.

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the ...

Предметом наших исследований является материальная основа изменения запаха рыбы в медицине животных. Этот протокол обеспечивает простой метод предварительной обработки и точное обнаружение триметиламина в лекарствах для животных. Простые методы предварительной обработки и запрограммированные параметры массы/массы HS-GC этого протокола нуждаются в дальнейшей оптимизации, и нам предстоит еще много работы.Наш протокол использует многонаправленный режим мониторинга массы ГХ в сочетании с уникальной, простой предварительной обработкой, которая является не только первой предварительной обработкой для анализа триметиламина, но и первым аналитическим режимом, который будет использоваться.

an-improved-technique-for-trimethylamine-detection-animal-derived

Research

JoVE Journal

Chemistry

An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the poor compliance of clinical patients. Trimethylamine (TMA) is one of the key fishy odor components in animal-derived medicine. It is difficult to identify TMA accurately using the existing detection method due to the increased pressure in the headspace vial caused by the rapid acid-base reaction after the addition of lye, which causes TMA to escape from the headspace vial, stalling the research progress of the fishy odor of animal-derived medicine. In this study, we proposed a controlled detection method that introduced a paraffin layer as an isolation layer between acid and lye. The rate of TMA production could be effectively controlled by slowly liquefying the paraffin layer through thermostatic furnace heating. This method showed satisfactory linearity, precision experiments, and recoveries with good reproducibility and high sensitivity. It provided technical support for the deodorization of animal-derived medicine.

Here, a headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) method suitable for the determination of trimethylamine (TMA) in animal-derived medicines is described. The protocol includes sample pretreatment, headspace treatment, analysis conditions, methodological validation, and the determination of TMA in animal-derived medicines.

Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace GC-MS

To begin, crush the medicinal materials Pheretima, Periplaneta americana, and Hirudo with an herbal grinder. Sift the medicinal powder through standard drug sieves of number two and number four. Collect the powder between the two sieves to obtain the required sample powder.Take one gram of the powder in a 50 milliliter plastic centrifuge tube. Add 20 milliliters of 5%trichloroacetic acid solution and homogenize at 1, 000 RPM for one minute with a high speed dispersion homogenizer. After homogenization, centrifuge the homogenate at 1, 717 G for five minutes at room temperature and filter the supernatant through an absorbent cotton-dipped glass funnel into a 50 milliliter volumetric flask.After repeating the extraction process twice with 15 and 10 milliliters of 5%trichloroacetic acid solution, combine the filtrates and make up the volume to 50 milliliters with 5%trichloroacetic acid solution. Next, accurately add two milliliters of sodium hydroxide solution and 0.5 grams of solid paraffin in 20 milliliter headspace vials. Then place them in an oven at 70 degrees Celsius for about 30 minutes.Take the vials out and let them cool down to room temperature so that the paraffin solidifies. To process the sample headspace, add two milliliters of each sample extraction solution to the solidified paraffin containing vials. Press the cap and seal the vial.Put the sealed headspace vials on the GCMS for measurement. To obtain the standard curve, aspirate a series of two milliliters of trimethylamine standard solution on top of the solidified paraffin layer. Put the sealed headspace vials on the machine for trimethylamine measurement.To perform the precision test, aspirate two milliliters of 0.1 micrograms per milliliter trimethylamine standard solution on top of the solidified paraffin layer. Carry out six parallel tests in the machine following the manufacturer's instructions. For the recovery rate experiment, bake several batches of the sample powder in an oven until no triethylamine is detected in GCMS as demonstrated previously.Next, take each one gram of oven baked and fineable powder into separate 50 milliliter plastic centrifuge tubes. Add 50 microliters of trimethylamine standard solution to all the tubes and extract with 5%trichloroacetic acid solution as demonstrated previously. The retention time of trimethylamine was found to be 2.3 minutes with a sharp peak and no interference from other impurities.Pheretima, Periplaneta americana, and Hirudo samples subjected to spiked recovery tests by drying to reduce triethylamine in the herbs showed average recovery rates of 84.49, 94.66, and 85.67%respectively. Triethylamine was detected in nine batches of herbs with concentrations ranging from 13.23 to 271.63 milligrams per kilogram.