Name: normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse
Uploaded: 2023-09-25T14:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse at JoVE.com

طوال كتابة هذه الورقة ، تلقيت قدرا كبيرا من الدعم والمساعدة. أود بشكل خاص أن أعرب عن تقديري لزميلي في الفريق XinPei Chen لتعاونه الرائع ودعمه الصبور أثناء عمليتي.

تم إجراء التجارب على الحيوانات وفقا للوائح والمبادئ التوجيهية الألمانية الحالية لرعاية الحيوان وإرشادات REACH للإبلاغ عن الأبحاث الحيوانية. تمت الموافقة على بروتوكول التجارب على الحيوانات من قبل Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz ، تورينجيا ، ألمانيا (رقم الموافقة: UKJ - 17 - 106).
ملاحظة: ت?...

الخطوات الحاسمة في البروتوكول الخطوتان الحاسمتان في زراعة الكبد هما قنية الوريد البابي (PV) والقنية اللاحقة للقناة الصفراوية (BD). هذه الخطوات ذات أهمية قصوى في ضمان استرجاع الأعضاء بنجاح وإجراءات التروية أو الزرع اللاحقة.
التحديات والحلول يمثل القنية ا...

تمثل زراعة الكبد العلاج القياسي الذهبي للأفراد المصابين بأمراض الكبد في المرحلة النهائية. ومما يؤسف له أن الطلب على الأعضاء المانحة يتجاوز العرض المتاح، مما يؤدي إلى نقص كبير. في عام 2021 ، كان ما يقرب من 24,936 مريضا على قائمة الانتظار للحصول على ترقيع الكبد ، بينما تم إجراء 9,234 عملية زرع فقط بنجاح1. يسلط التفاوت الكبير بين العرض والطلب على ترقيع الكبد الضوء على الضرورة الملحة للتحقيق في استراتيجيات بديلة لتوسيع مجموعة المانحين وتعزيز إمكانية الوصول إلى ترقيع الكبد. تتمثل إحدى طرق توسيع مجموعة المانحين في استخدام المانحينالهامشيين 2. يشمل المتبرعون الهامشيون أولئك الذين يعانون من تقدم العمر أو التنكس الدهني المعتدل أو الشديد. على الرغم من أن زرع الأعضاء الهامشية قد يؤدي إلى نتائج إيجابية ، إلا أن النتائج الإجمالية تظل دون المستوى الأمثل. ونتيجة لذلك ، يجري حاليا تطوير استراتيجيات علاجية تهدف إلى تعزيز وظيفة المانحين الهامشيين 3,4.
تتمثل إحدى الاستراتيجيات في استخدام التروية الآلية ، وخاصة التروية الآلية المؤكسجة ذات الحرارة العادية ، لتحسين وظيفة هذه الأعضاء الهامشية5. ومع ذلك ، لا يزال هناك فهم محدود للآليات الجزيئية التي تكمن وراء الآثار المفيدة للنضح الآلي المؤكسج الطبيعي الحرارة (NEVLP). الفئران ، مع توافرها الوفير من السلالات المعدلة وراثيا ، بمثابة نماذج قيمة للتحقيق في المسارات الجزيئية. على سبيل المثال ، تم التعرف بشكل متزايد على أهمية مسارات الالتهام الذاتي في التخفيف من إصابة نقص التروية الكبدية 6,7. أحد المسارات الجزيئية المهمة في إصابة نقص التروية الكبدية هو مسار miR-20b-5p / ATG78. حاليا ، هناك عدد من سلالات ATG بالضربة القاضية والضربة القاضية الشرطية المتاحة ولكن لا توجد سلالات الفئران المقابلة9.
بناء على هذه الخلفية ، كان الهدف هو إنشاء منصة NEVLP مصغرة لترقيع كبد الفئران. ستسهل هذه المنصة استكشاف وتقييم الاستراتيجيات المعدلة وراثيا المحتملة التي تهدف إلى تحسين وظائف كبد المتبرع. بالإضافة إلى ذلك ، كان من الضروري أن يكون النظام مناسبا للتروية على المدى الطويل ، مما يتيح العلاج خارج الجسم الحي للكبد ، والذي يشار إليه عادة باسم "إصلاح الأعضاء".
بالنظر إلى محدودية توافر البيانات ذات الصلة في المختبر حول نضح كبد الفئران ، ركزت مراجعة الأدبيات على الدراسات التي أجريت على الفئران. تم إجراء بحث منهجي للأدبيات يمتد من عام 2010 إلى عام 2022 باستخدام كلمات رئيسية مثل "نضح الكبد الطبيعي الحرارة" و "خارج الجسم الحي أو في المختبر" و "الفئران". يهدف هذا البحث إلى تحديد الظروف المثلى في القوارض ، مما يسمح لنا بتحديد النهج الأنسب.
يتكون نظام الإرواء من خزان عازل زجاجي مغلق مغلف بالماء ، ومضخة أسطوانية تمعجية ، وأكسجين ، ومصيدة فقاعات ، ومبادل حراري ، وغرفة عضو ، ونظام أنابيب ركوب دراجات مغلق (الشكل 1). يضمن النظام الصيانة الدقيقة لدرجة حرارة التروية الثابتة التي تبلغ 37 درجة مئوية باستخدام آلة ثابتة حراري مخصصة. تدفع المضخة الدوارة التمعجية تدفق البيرفوسات في جميع أنحاء الدائرة. تبدأ دائرة التروية في الخزان المعزول المغلف بالماء. بعد ذلك ، يتم توجيه perfusate من خلال جهاز الأكسجين ، الذي يتلقى خليط غاز من 95 ٪ من الأكسجين و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون من زجاجة غاز مخصصة. بعد الأوكسجين ، يمر البيروزيت عبر مصيدة الفقاعات ، حيث يتم إعادة توجيه أي فقاعات محاصرة مرة أخرى إلى الخزان بواسطة المضخة التمعجية. يتدفق البيرفوسات المتبقي عبر المبادل الحراري ويدخل غرفة العضو ، حيث يعود إلى الخزان.
هنا ، نبلغ عن تجاربنا في إنشاء NEVLP لكبد الفئران ونشارك النتائج الواعدة لتجربة تجريبية أجريت باستخدام الوسط المؤكسج بدون حاملات الأكسجين.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 ml Micro Tube PP</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Micro Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>701N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+OF2419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+DU2619WX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Hypodermic Needle</td>
			<td>Sterican</td>
			<td>100246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Syringe Pump</td>
			<td>Braun</td>
			<td>110356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Perma-Hand Seide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>639H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arterial Clip</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BH014R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Moist Chamber</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>73-4733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big Cotton Applicator&#160;</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bubble Trap</td>
			<td>Hugo-Sachs-Elektronik</td>
			<td>V83163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenovet (0.3 mg / ml)</td>
			<td>Elanco</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIDEX OPA solution (2 L)</td>
			<td>Cilag GmbH</td>
			<td>20391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrosurgical Unit for Monopolar Cutting VIO&#174; 50 C</td>
			<td>ERBE</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(500 ml)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Mixture (95 % oxygen &#38; 5 % carbon dioxide)</td>
			<td>House Supply</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Circulating Baths</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>75-0310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 5000 (I.E. /5 ml)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1708.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone (100 mg / 2 ml)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>15427276</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin(100 IE / ml)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0516-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran (250 ml)</td>
			<td>Cp-Pharma</td>
			<td>1214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane Oxygenator</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>T18728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery Microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Retractor Set&#160;</td>
			<td>Carfil Quality</td>
			<td>180000056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoZoomer 2.0 HT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponges&#160;</td>
			<td>Kompressen</td>
			<td>866110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin (1 mg / ml)&#160;</td>
			<td>C.C.Pro</td>
			<td>Z-13-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Extension Tube (30 cm)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4256000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>P-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishc 100x15 mm</td>
			<td>VWR&#174;</td>
			<td>391-0578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidon-Jod (Vet-Sep Spray)</td>
			<td>Livisto</td>
			<td>799-416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure Transducer Simulator</td>
			<td>UTAH Medical Products</td>
			<td>650-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable Blood Pressure Transducers</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT-0380/D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S &#38; T Vessel Cannulation Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00608-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Cotton Applicator</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps 10 cm&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 50ml Original Perfusor</td>
			<td>Braun</td>
			<td>8728810F-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UT - 03 Cannula</td>
			<td>Unique Medical, Japan</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary Saline (500 ml)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>18X1807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Jacketed Reservoir&#160; 2 L</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>73-3441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>William&#39;s E Medium (500 ML)</td>
			<td>Thermofischer Scientific</td>
			<td>A1217601</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse

يقدم هذا البروتوكول نظام NEVLP الخالي من كريات الدم الحمراء باستخدام كبد الفأر. تم تحقيق الحفاظ على كبد الفأر خارج الجسم الحي من خلال استخدام قنيات معدلة وتقنيات مقتبسة من معدات التروية التجارية التقليدية خارج الجسم الحي. تم استخدام النظام لتقييم نتائج الحفظ بعد 12 ساعة من التروية. عملت الفئران C57BL / 6J كمتبرعين بالكبد ، وتم زرع الكبد عن طريق قنية الوريد البابي (PV) والقناة الصفراوية (BD) ، وبعد ذلك غسل العضو بمحلول ملحي دافئ (37 درجة مئوية). بعد ذلك ، تم نقل الكبد المزروع إلى غرفة التروية وإخضاعه للنضح الآلي المؤكسج الطبيعي الحرارة (NEVLP). تم جمع عينات المدخل والمخرج على فترات 3 ساعات لتحليل البيروسات. عند الانتهاء من التروية ، تم الحصول على عينات من الكبد للتحليل النسيجي ، مع تقييم السلامة المورفولوجية باستخدام سوزوكي سكور المعدل من خلال تلطيخ الهيماتوكسيلين-إيوسين (HE). أسفرت تجارب التحسين عن النتائج التالية: (1) اعتبرت الفئران التي يزيد وزنها عن 30 جراما أكثر ملاءمة للتجربة بسبب الحجم الأكبر للقناة الصفراوية (BD). (2) كانت قنية البولي يوريثين 2 Fr (القطر الخارجي = 0.66 مم) أكثر ملاءمة لقنية الوريد البابي (PV) عند مقارنتها بقنية البولي بروبلين. ويعزى ذلك إلى القبضة المعززة لمادة البولي يوريثين ، مما أدى إلى تقليل انزلاق القسطرة أثناء النقل من الجسم إلى غرفة الأعضاء. (3) لقنية القناة الصفراوية (BD) ، تم العثور على قنية 1 Fr (القطر الخارجي = 0.33 مم) من مادة البولي يوريثين لتكون أكثر فعالية مقارنة بقنية البولي بروبلين UT - 03 (القطر الخارجي = 0.30 مم). مع هذا البروتوكول الأمثل ، تم الحفاظ على كبد الفأر بنجاح لمدة 12 ساعة دون تأثير كبير على البنية النسيجية. كشف تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوسين (HE) عن بنية مورفولوجية محفوظة جيدا للكبد ، تتميز بخلايا كبدية قابلة للحياة في الغالب مع نوى مرئية بوضوح وتمدد خفيف للجيوب الأنفية الكبدية.

إنشاء العملية الجراحية تم استخدام ما مجموعه 17 حيوانا لهذه التجربة: تم استخدام 14 فأرا لتحسين عملية شراء الأعضاء ، بما في ذلك قنية الوريد البابي (PV) والقناة الصفراوية (BD) ، بينما تم استخدام 3 فئران للتحقق من صحة الإجراء (الجدول 1). تمت مقارنة النتائج النسيجية (الش?...

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

تم إنشاء نظام نضح الكبد خارج الجسم الحي (NEVLP) لكبد الفئران. يتطلب هذا النظام خبرة في الجراحة المجهرية ولكنه يسمح بنتائج نضح قابلة للتكرار. تسهل القدرة على استخدام كبد الفأر التحقيق في المسارات الجزيئية لتحديد إضافات الفوسات الجديدة وتمكن من تنفيذ التجارب التي تركز على إصلاح الأعضاء.

نورموذرميك خارج الجسم الحي آلة الكبد التروية في الماوس

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

نضح آلة الكبد Normothermic ex-vivo في الفأر. يعد نضح الكبد المؤكسج Normothermic استراتيجية واعدة لإنقاذ الأعضاء الهامشية وقد تم تقديمه مؤخرا في الممارسة السريرية. ومع ذلك ، فإن الآليات الجزيئية الأساسية ليست مفهومة جيدا.هناك حاجة إلى نموذج فأر لمزيد من دراسة المسارات الجزيئية ، والاستفادة من الحيوانات المعدلة وراثيا ، مثل الفئران المعدلة وراثيا ، وبالتالي انتظار إنشاء نظام نضح آلة مؤكسج طبيعي الحرارة لكبد الفئران. هنا مخطط لنظامنا بأكمله. أولا ، يتم التحكم في النظام بأكمله عند 37 درجة مئوية بواسطة وحدة تحكم ثرموستاتية من خلال دوران المياه.يتم ضخ perfusate من الخزان بواسطة مضخة تمعجية إلى جهاز الأكسجين. هناك تدفق غاز غير منقطع بنسبة 95٪ أكسجين و 5٪ ثاني أكسيد الكربون في جهاز الأكسجين. ثم يمر البيرفوسات عبر مصيدة الفقاعات.يتم ضخ perfusate مع فقاعات الهواء مرة أخرى إلى الخزان تحت الضغط. يتدفق البيروزيت المتبقي إلى غرفة العضو حيث يتم توصيل الأنبوب بالوريد البابي. يتم تصريف البيرفوسات من الكبد من خلال الأجوف فوق الكبدي إلى غرفة الأعضاء.يتم توجيه التدفق الخارجي من غرفة العضو مرة أخرى إلى الخزان بواسطة المضخة التمعجية. يتم توصيل أنبوب تصريف الصفراء بغرفة العضو لجمع الصفراء. هذا هو جدول العمليات لدينا.تتم جميع العمليات الجراحية تحت المجهر. نحافظ على ظروف التشغيل شبه المعقمة طوال العملية الجراحية. امسك قنية الأنبوب الفرنسي بالملقط.اخترق جدار القنية بإبرة 30 جرام على مسافة سنتيمتر واحد من نهاية القنية. ادفع الإبرة عبر القنية حتى يصبح طرف الإبرة مرئيا. فيما يلي صورة مقارنة لقسطرة 26G وقنية ذاتية الصنع ؛ كلاهما مناسب لقنية بوابة الماوس.تحضير 25 ملليلتر من محلول ملحي هيبارين بتركيز نهائي قدره 2،500 وحدة دولية لكل مليلتر ، ووضع حقنة في حاضنة محددة عند 40 درجة مئوية. فيما يلي المكونات الرئيسية لنظام نضح آلة الحرارة العادية خارج الجسم الحي. تشمل المكونات بشكل أساسي غرفة الجهاز ، والآلة الثرموستاتية ، ومضخة الأسطوانة ، والأكسجين ، والخزان.هنا ، يمكنك رؤية إعداد مفصل لغرفة الأعضاء لدينا. في الأساس ، يتكون من جسم غرفة الأعضاء ، ومستشعر الضغط ، والمبادل الحراري ، ومصيدة الفقاعات. أنشأنا مدخل perfusate ، ومنفذ perfusate ، وميناء تصريف الصفراء.هذا هو نظام مراقبة ADI الذي نستخدمه لمراقبة ضغط الوريد البابي. يتكون نظام ADI من مستشعر ضغط ووحدة تحكم مركزية وشاشات. قم بتشغيل برنامج LabChart لمراقبة الضغط.المعايرة والتصفير مطلوبان قبل كل استخدام لمستشعر الضغط. استخدم زئبق صفر ملليمتر وزئبق 20 ملليمتر كعلامات لمعايرة مستشعر الضغط للمعايرة ذات الخطوتين. بناء على المراقبة المستمرة لضغط البوابة ، يمكننا ضبط فلوران البوابة وفقا لتغيرات الضغط.في أحجام متساوية من perfusate إلى الخزان وغرفة الجهاز لتجهيز النظام ، يجب إيلاء اهتمام خاص للحفاظ على العقم أثناء عملية التعبئة. قم بتوصيل غرفة الحث بمقبس حائط. تحويل الأكسجين إلى 0.5 لتر في الدقيقة.تحويل إيزوفلوران إلى 3٪ضع الحيوان في الغرفة حتى يتم الوصول إلى التخدير العميق. استخدم حقنة صغيرة لتطبيق جرعة تسكين الألم المتكيفة مع وزن الجسم. هنا ، سبعة ميكرولتر من البوبرينورفين.الآن ، نبدأ عملية الجراحة. قم بعمل شق عرضي في منطقة البطن من الماوس. يمتد شق الجلد إلى الخط الإبطي الثنائي للحوم على كلا الجانبين.قم بعمل شق طولي بعناية على طول خط ألبا. قطع من خلال طبقة عضلات البطن مع التخثير الكهربائي والمقص. ضع بعناية قطعة من الشاش الرطب لحماية الكبد من التخثير الكهربائي.فضح تماما تجويف البطن من الماوس. حرك الأمعاء الدقيقة بعناية من تجويف البطن باستخدام قطعة قطن مبللة لفضح الهيلوم بالكامل. يوضح هنا رسم تخطيطي لقنية الوريد البابي وقنية القناة الصفراوية.في الأساس ، نختار القنية المناسبة وفقا لحجم الماوس ، ونستخدم خياطة الحرير 6-0 لتثبيت القنية. حرر القناة الصفراوية المشتركة بعناية باستخدام ملقط منحني ناعم بدون أسنان. القناة الصفراوية المشتركة تتلف بسهولة وتنكسر.بمجرد أن ينكسر ، لا يمكن تقليبه. نظرا لاتجاه الموضع التشريحي ، فإن الملقط المنحني أسهل في التشغيل. ضع حلقتين من الحرير 6-0 فوق القناة الصفراوية المشتركة استعدادا للخطوة التالية.ثقب بعناية القناة الصفراوية بإبرة 30G. استخدم ملقط منحني مدبب لتكبير الثقوب الصغيرة ، بحيث يمكن أن يغذي قنية القناة الصفراوية. استخدم ملقط قنية الوعاء عبر قنية القناة الصفراوية وادفعه إلى القناة الصفراوية. ملاحظه.في لحظة القنية ، ستشعر بالمقاومة التي تسببها الصفراء. إذا لم يتم التحكم في القوة بشكل جيد ، دفع القنية خارج القناة الصفراوية عن طريق ضغط تدفق الصفراء. ضبط بعناية عمق القنية.إذا كان عميقا جدا ، فقد يؤدي إلى تلف القناة الصفراوية ، وإذا لم يكن عميقا بدرجة كافية ، فقد ينزلق. يمكن ملاحظة تدفق الصفراء في القنية بعد القنية الناجحة. قم بتثبيت الوريد البابي بالملقط المسطح وحرر النسيج الضام بعناية باستخدام ملقط منحني.لا تسحب بقوة هنا ، حتى لا تتسبب في تمزق الوريد البابي. بمجرد تلف الوريد البابي ، من الصعب إعادة سحب الوريد البابي. ضع حلقتين من الحرير 6-0 على الوريد البابي الحر.استخدم مشبكا شريانيا لإغلاق الوريد البابي البعيد. ثقب بعناية فائقة الوريد البابي مع واحدة من قنية الوريد البابي أعلاه. يمكن ملاحظة تدفق الدم بوضوح داخل القنية بعد ثقب ناجح.خذ محلول ملحي من الهيبارين من الحاضنة. قم بإزالة جميع فقاعات الهواء. إصلاح حقنة مع ملحية الهيبارين مسخن مسبقا في مضخة حقنة.قم بتوصيل أنبوب تمديد مضخة المحقنة بقنية الوريد البابي. اضبط السرعة على ملليلتر في الدقيقة وابدأ في تنظيف الكبد. زيادة الأيزوفلوران إلى 5٪والقتل الرحيم للفأر بجرعة زائدة من استنشاق الأيزوفلوران.راقب لون الكبد في نهاية عملية التنظيف. استئص الكبد بمجرد أن يتحول اللون إلى أصفر متجانس. نقل الكبد بعناية إلى غرفة الجهاز باستخدام طبق بتري.احتفظ بكمية صغيرة من المحلول الملحي في طبق بتري لمنع سحق الكبد. ملاحظه. يمكن بسهولة التواء الوريد البابي والقناة الصفراوية أثناء هذا الإجراء ، مما قد يؤثر على تروية الكبد وجمع الصفراء. قم بضخ محلول ملحي طبيعي ببطء في قنية الوريد البابي باستخدام حقنة لإخلاء فقاعات الهواء في القنية.قم بتوصيل قنية الوريد البابي بأنبوب التدفق الخارجي perfusate في غرفة الجهاز. يتم توجيه قنية القناة الصفراوية للفأر من خلال صمام غرفة العضو ، وهو مغلق بغطاء مطاطي. بعد ذلك ، يتم إدخال الأنبوب الصفراوي في أنبوب صغير معد مسبقا سعة 0.5 ملليلتر مع وجود ثقب صغير في المقدمة.بعد توصيل كل شيء ، قم بتشغيل المضخة التمعجية. تحقق من قراءة ضغط الوريد البابي لضبط معدل التدفق. الحفاظ على ضغط الوريد البابي بين سبعة إلى 10 ملليمترات من الزئبق عن طريق ضبط معدل التدفق. ملاحظه.يمكن أن يختلف معدل التدفق الاسمي قليلا حسب عمر الأنابيب ووضعها. هذا هو اختيار وسط البيرفوسات ، وحجم البيروسات ، وضغط التروية بناء على عمل أدبي لدراسات نضح آلة كبد الفئران المؤكسجة ذات الحرارة المعيارية. هذه تجربة خطوة بخطوة لإنشاء نموذج نضح الماوس.استغرق الأمر حوالي 14 تجربة لاختيار القسطرة الأكثر ملاءمة. في أيدينا ، يعد استخدام قسطرة مطاطية فرنسية للوريد البابي ، جنبا إلى جنب مع قسطرة مطاطية فرنسية واحدة للقناة الصفراوية ، أفضل مزيج لتحقيق نضح متجانس مع وجود جميع القسطرة في مكانها. كان مستوى الأس الهيدروجيني ومستوى البوتاسيوم مستقرين طوال فترة التروية لمدة 12 ساعة.تراوح مستوى الأس الهيدروجيني من 7.26 إلى 7.71 ، وتراوح مستوى البوتاسيوم من 5.9 إلى 6.8 مليمول لكل لتر. يظهر تلطيخ HE أنه بعد 12 ساعة من التروية ، تم الحفاظ على سلامة الأنسجة لكبد الفأر بشكل جيد نسبيا. مجتمعة ، أثبتنا هنا الإنشاء الناجح لنظام نضح آلة مؤكسج طبيعي الحرارة لكبد الفأر.أدى نضح كبد الفأر لمدة 12 ساعة إلى الحفاظ الجيد على مورفولوجيا الكبد ، وإن لم يكن في جميع أنحاء العضو بأكمله. هناك حاجة إلى مزيد من الجهد لتحقيق التروية المتجانسة الكاملة على مدى فترة زمنية أطول. بمجرد تحقيق ذلك ، يمكن النظر في استخدام الحيوانات المعدلة وراثيا ، مثل استخدام الفئران IL-2-knockout للتحقيق في دور الالتهاب.

Research

JoVE Journal

Engineering

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

High-resolution, High-speed, Three-dimensional Video Imaging with Digital Fringe Projection Techniques

عالية الدقة، والسرعة الفائقة، والتصوير ثلاثي الأبعاد الفيديو مع تقنيات الإسقاط هامش الرقمية

Digital fringe projection (DFP) techniques provide dense 3D measurements of dynamically changing surfaces.&#160;Like the human eyes and brain, DFP uses ...

The Preparation of Electrohydrodynamic Bridges from Polar Dielectric Liquids

لإعداد Electrohydrodynamic جسور من السوائل القطبية عازل

Horizontal and vertical liquid bridges are simple and powerful tools for exploring the interaction of high intensity electric fields (8-20 kV/cm) and ...

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

في المختبر ثقافة خلايا النخابية من الفأر الجنينية القلب

During embryogenesis, the epicardial contribution to coronary vasculature development has been very well established. Cells derived from the epicardium ...

Fabrication of Ultra-thin Color Films with Highly Absorbing Media Using Oblique Angle Deposition

تصنيع الأفلام اللون رقيقة جداً مع الغاية استيعاب وسائل الإعلام استخدام الترسيب زاوية مائلة

Ultra-thin film structures have been studied extensively for use as optical coatings, but performance and fabrication challenges remain.&#160; We present ...

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

أساليب الموقع السابقين والتحقيق في عين المكان للتحولات الهيكلية: حالة بلورة نظارات معدنية

We demonstrate the use of two nuclear-based analytical methods that can follow the modifications of microstructural arrangement of iron-based metallic ...

Application of Design Aspects in Uniaxial Loading Machine Development

تطبيق جوانب التصميم في تطوير آلة تحميل أونياكسيال

In terms of accurate and precise mechanical testing, machines run the continuum. Whereas commercial platforms offer excellent accuracy, they can be ...

In vitro Assessment of Aortic Regurgitation Using Four-Dimensional Flow Magnetic Resonance Imaging

In vitro Assessment of Aortic Regurgitation Using Four-Dimensional Flow Magnetic Resonance Imaging

في المختبر تقييم قلس الأبهر باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي للتدفق رباعي الأبعاد

Aortic regurgitation (AR) refers to backward blood flow from the aorta into the left ventricle (LV) during ventricular diastole. The regurgitant jet ...

Particle Image Velocimetry Investigation of Hemodynamics via Aortic Phantom

Particle Image Velocimetry Investigation of Hemodynamics via Aortic Phantom

دراسة قياس سرعة صورة الجسيمات لديناميكا الدم عبر الأبهر الوهمي

Aortic valve dysfunction and stroke have recently been reported in transcatheter aortic valve implantation (TAVI) patients. Thrombus in the aortic sinus ...

Synthesizing Nanoparticles and Nanostructures via Laser Ablation

Ultrafast Laser-Ablated Nanoparticles and Nanostructures for Surface-Enhanced Raman Scattering-Based Sensing Applications

Advancements and Applications in Nanoparticle Synthesis Through Laser Ablation in Liquids (Video) | JoVE

جسيمات نانوية فائقة السرعة مجازة بالليزر وهياكل نانوية لتطبيقات الاستشعار القائمة على تشتت رامان المحسنة سطحيا

The technique of ultrafast laser ablation in liquids has evolved and matured over the past decade, with several impending applications in various fields ...

Preparation of Free-Surface Hyperbolic Water Vortices

تحضير دوامات المياه الزائدية ذات السطح الحر

Free surface vortices are present in industry in flow regulation, energy dissipation, and energy generation. Although investigated extensively, detailed ...