Name: normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse
Uploaded: 2023-09-25T14:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse at JoVE.com

לאורך כתיבת מאמר זה קיבלתי תמיכה וסיוע רבים. אני רוצה להודות במיוחד לחבר הצוות שלי XinPei Chen על שיתוף הפעולה הנפלא שלו ותמיכתו במטופלים במהלך הניתוח שלי.

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לתקנות הגרמניות הנוכחיות ולהנחיות לרווחת בעלי חיים ולהנחיות ARRIVE לדיווח על מחקר בבעלי חיים. פרוטוקול הניסויים בבעלי חיים אושר על ידי Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz, תורינגיה, גרמניה (מספר אישור: UKJ - 17 - 106).
הערה: עכברי C57BL/6J זכרים במשקל 34 ± 4 גרם (שגיאת תק?...

שלבים קריטיים בפרוטוקול שני השלבים המכריעים בכריתת הכבד הם קנולציה של הווריד הפורטלי (PV) והקנולציה הבאה של צינור המרה (BD). צעדים אלה הם בעלי חשיבות עליונה בהבטחת שאיבת איברים מוצלחת והליכי זילוח או השתלה לאחר מכן.
אתגרים ופתרונות קנולציית PV מציבה שלושה ...

השתלת כבד מייצגת את תקן הזהב לטיפול באנשים עם מחלת כבד סופנית. למרבה הצער, הביקוש לתרומת איברים עולה על ההיצע הזמין, מה שמוביל למחסור משמעותי. בשנת 2021 היו ברשימת ההמתנה להשתלת כבד כ-24,936 חולים, בעוד שרק 9,234 השתלות בוצעו בהצלחה1. הפער המשמעותי בין ההיצע והביקוש של שתלי כבד מדגיש את הצורך הדחוף לחקור אסטרטגיות חלופיות להרחבת מאגר התורמים ולשיפור הנגישות של שתלי כבד. אחת הדרכים להרחיב את מאגר התורמים היא להשתמש בתורמים שוליים2. תורמים שוליים כוללים אלה עם גיל מתקדם, סטאטוזיס בינוני או חמור. למרות שהשתלת איברים שוליים עשויה להניב תוצאות חיוביות, התוצאות הכלליות נותרות לא אופטימליות. כתוצאה מכך, פיתוח אסטרטגיות טיפוליות שמטרתן לשפר את תפקודם של תורמים שוליים נמצא כיום בעיצומו 3,4.
אחת האסטרטגיות היא להשתמש בזילוח מכונה, במיוחד זילוח מכונה מחומצן נורמתרמי, כדי לשפר את תפקודם של איברים שוליים אלה5. עם זאת, עדיין קיימת הבנה מוגבלת של המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס ההשפעות המועילות של זילוח מכונה מחומצנת נורמותרמית (NEVLP). עכברים, עם הזמינות השופעת שלהם של זנים מהונדסים גנטית, משמשים מודלים רבי ערך לחקר מסלולים מולקולריים. לדוגמה, המשמעות של מסלולי אוטופגיה בהקלה על פגיעה באיסכמיה בכבד הוכרה יותר ויותר 6,7. מסלול מולקולרי חשוב אחד בפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה בכבד הוא מסלול miR-20b-5p/ATG78. נכון לעכשיו, קיימים מספר זני עכבר מסוג ATG knockout ו-knock-out מותנה, אך אין זני חולדות מתאימים9.
בהתבסס על רקע זה, המטרה הייתה ליצור פלטפורמת NEVLP ממוזערת עבור שתלי כבד עכבר. פלטפורמה זו תקל על חקירה והערכה של אסטרטגיות פוטנציאליות מהונדסות-גנטית שמטרתן לשפר את הפונקציונליות של הכבד של התורם. בנוסף, היה חיוני שהמערכת תתאים לזילוח לטווח ארוך, ותאפשר טיפול ex vivo בכבד, המכונה בדרך כלל "תיקון איברים".
בהתחשב בזמינות המוגבלת של נתונים רלוונטיים במבחנה על זילוח כבד עכברים, סקירת הספרות התמקדה במחקרים שנערכו בחולדות. חיפוש שיטתי בספרות שנמשכה בין השנים 2010 ל-2022 בוצע באמצעות מילות מפתח כגון "זילוח כבד נורמתרמי", "ex vivo or in vitro" ו"חולדות". חיפוש זה נועד לזהות תנאים אופטימליים במכרסמים, ולאפשר לנו לקבוע את הגישה המתאימה ביותר.
מערכת הזילוח מורכבת ממאגר חיץ זכוכית אטום עם מעטפת מים, משאבת גלילים פריסטלטית, מחמצן, מלכודת בועות, מחליף חום, תא איבר ומערכת צינורות אופניים סגורה (איור 1). המערכת מבטיחה תחזוקה מדויקת של טמפרטורת זילוח קבועה של 37°C באמצעות מכונה תרמו-סטטית ייעודית. משאבת הגלילה הפריסטלטית מניעה את זרימת הפרפוסטה לאורך המעגל. מעגל הזילוח מתחיל במאגר המים המבודד. לאחר מכן, הפרפוזט מופנה דרך המחמצן, אשר מקבל תערובת גז של 95% חמצן ו -5% פחמן דו חמצני מבקבוק גז ייעודי. לאחר החמצון, הפרפוזט עובר דרך מלכודת הבועות, שבה כל הבועות הכלואות מנותבות חזרה למאגר על ידי המשאבה הפריסטלטית. הפרבוסט הנותר זורם דרך מחליף החום ונכנס לתא האיברים, משם הוא חוזר למאגר.
כאן, אנו מדווחים על ניסיוננו בהקמת NEVLP עבור כבדי עכברים וחולקים את התוצאות המבטיחות של ניסוי פיילוט שבוצע באמצעות התווך המחומצן ללא נשאי חמצן.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 ml Micro Tube PP</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Micro Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>701N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+OF2419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+DU2619WX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Hypodermic Needle</td>
			<td>Sterican</td>
			<td>100246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Syringe Pump</td>
			<td>Braun</td>
			<td>110356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Perma-Hand Seide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>639H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arterial Clip</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BH014R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Moist Chamber</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>73-4733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big Cotton Applicator&#160;</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bubble Trap</td>
			<td>Hugo-Sachs-Elektronik</td>
			<td>V83163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenovet (0.3 mg / ml)</td>
			<td>Elanco</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIDEX OPA solution (2 L)</td>
			<td>Cilag GmbH</td>
			<td>20391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrosurgical Unit for Monopolar Cutting VIO&#174; 50 C</td>
			<td>ERBE</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(500 ml)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Mixture (95 % oxygen &#38; 5 % carbon dioxide)</td>
			<td>House Supply</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Circulating Baths</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>75-0310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 5000 (I.E. /5 ml)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1708.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone (100 mg / 2 ml)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>15427276</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin(100 IE / ml)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0516-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran (250 ml)</td>
			<td>Cp-Pharma</td>
			<td>1214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane Oxygenator</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>T18728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery Microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Retractor Set&#160;</td>
			<td>Carfil Quality</td>
			<td>180000056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoZoomer 2.0 HT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponges&#160;</td>
			<td>Kompressen</td>
			<td>866110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin (1 mg / ml)&#160;</td>
			<td>C.C.Pro</td>
			<td>Z-13-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Extension Tube (30 cm)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4256000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>P-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishc 100x15 mm</td>
			<td>VWR&#174;</td>
			<td>391-0578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidon-Jod (Vet-Sep Spray)</td>
			<td>Livisto</td>
			<td>799-416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure Transducer Simulator</td>
			<td>UTAH Medical Products</td>
			<td>650-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable Blood Pressure Transducers</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT-0380/D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S &#38; T Vessel Cannulation Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00608-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Cotton Applicator</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps 10 cm&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 50ml Original Perfusor</td>
			<td>Braun</td>
			<td>8728810F-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UT - 03 Cannula</td>
			<td>Unique Medical, Japan</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary Saline (500 ml)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>18X1807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Jacketed Reservoir&#160; 2 L</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>73-3441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>William&#39;s E Medium (500 ML)</td>
			<td>Thermofischer Scientific</td>
			<td>A1217601</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse

פרוטוקול זה מציג מערכת NEVLP אופטימלית ללא אריתרוציטים באמצעות כבדי עכבר. שימור Ex vivo של כבדי עכברים הושג על ידי שימוש בצינוריות וטכניקות מותאמות מציוד זילוח מסחרי קונבנציונלי. המערכת שימשה להערכת תוצאות השימור לאחר 12 שעות של זילוח. עכברי C57BL/6J שימשו כתורמי כבד, והכבדים הושתלו על ידי קנולציה של וריד הפורטל (PV) וצינור המרה (BD), ולאחר מכן שטיפת האיבר במי מלח חמים (37 מעלות צלזיוס). לאחר מכן, הכבדים שהושתלו הועברו לתא הזילוח והיו נתונים לזילוח מכונה מחומצנת נורמותרמית (NEVLP). דגימות פרפוזט כניסה ויציאה נאספו במרווחים של 3 שעות לצורך ניתוח פרפוזאט. עם השלמת הזלוף, דגימות כבד התקבלו לניתוח היסטולוגי, עם שלמות מורפולוגית שהוערכה באמצעות Suzuki-Score שונה באמצעות צביעת Hematoxylin-Eosin (HE). ניסויי האופטימיזציה הניבו את הממצאים הבאים: (1) עכברים במשקל של מעל 30 גרם נחשבו מתאימים יותר לניסוי בשל גודלו הגדול יותר של צינור המרה שלהם (BD). (2) צינורית פוליאוריתן 2 Fr (קוטר חיצוני = 0.66 מ"מ) התאימה יותר לקנולציה של הווריד הפורטלי (PV) בהשוואה לצינורית פוליפרופילן. זה יוחס לאחיזה המשופרת של חומר הפוליאוריתן, וכתוצאה מכך החלקת קטטר מופחתת במהלך המעבר מהגוף לתא האיבר. (3) עבור קנולציה של צינור המרה (BD), צינורית פוליאוריתן 1 Fr (קוטר חיצוני = 0.33 מ"מ) נמצאה יעילה יותר בהשוואה לצינורית פוליפרופילן UT - 03 (קוטר חיצוני = 0.30 מ"מ). בעזרת פרוטוקול אופטימלי זה, כבדי עכברים נשמרו בהצלחה למשך 12 שעות ללא השפעה משמעותית על המבנה ההיסטולוגי. צביעת Hematoxylin-Eosin (HE) חשפה ארכיטקטורה מורפולוגית שמורה היטב של הכבד, המאופיינת בעיקר hepatocytes קיימא עם גרעינים גלויים בבירור התרחבות קלה של סינוסיואידים בכבד.

הקמת הליך כירורגי בסך הכל נוצלו 17 בעלי חיים לניסוי זה: 14 עכברים הועסקו לייעול תהליך רכישת האיברים, כולל קנולציה של הווריד הפורטלי (PV) וצינור המרה (BD), ואילו 3 עכברים שימשו לאימות ההליך (טבלה 1). התוצאות ההיסטולוגיות (איור 3) הושוו כדי להקל על זיהוי מצב הזלוף ה...

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

מערכת זילוח כבד נורמותרמית ex vivo (NEVLP) נוצרה עבור כבדי עכברים. מערכת זו דורשת ניסיון במיקרו-כירורגיה אך מאפשרת תוצאות זילוח הניתנות לשחזור. היכולת להשתמש בכבדים של עכברים מאפשרת לחקור מסלולים מולקולריים לזיהוי תוספי פרבוסט חדשים ומאפשרת ביצוע ניסויים המתמקדים בתיקון איברים.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

זילוח מכונת כבד Normothermic ex-Vivo בעכבר. זילוח כבד מחומצן נורממי הוא אסטרטגיה מבטיחה להצלת איברים שוליים ולאחרונה הוצג בפרקטיקה הקלינית. עם זאת, המנגנונים המולקולריים הבסיסיים אינם מובנים היטב.יש צורך במודל עכברי כדי להמשיך לחקור את המסלולים המולקולריים, תוך ניצול בעלי חיים מהונדסים גנטית, כגון עכברים טרנסגניים, ולכן ממתינים להקמת מערכת זילוח מכונה מחומצנת נורמותרמית עבור כבדי עכברים. הנה תוכנית של כל המערכת שלנו. ראשית, המערכת כולה נשלטת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס על ידי בקר תרמוסטטי באמצעות זרימת מים.הפרפוזט נשאב מהמאגר על ידי משאבה פריסטלטית לתוך מחמצן. יש זרימת גז רצופה של 95% חמצן ו 5% פחמן דו חמצני במחמצן. לאחר מכן הפרבוסט עובר דרך מלכודת בועות.הפרבוסט עם בועות האוויר נשאב חזרה למאגר בלחץ. הפרפוזט הנותר זורם לתא האיבר שבו הצינור מחובר לווריד הפורטל. הפרפוזט מנוקז מהכבד דרך הקאווה העל-כבדית לתוך תא האיברים.זרימת הפרפוזט מתא האיברים מופנית חזרה למאגר על ידי המשאבה הפריסטלטית. צינור ניקוז מרה מחובר לתא האיברים כדי לאסוף מרה. זהו שולחן הניתוחים שלנו.כל הניתוחים נעשים תחת מיקרוסקופ. אנו שומרים על תנאי ניתוח סטריליים למחצה לאורך כל ההליך הכירורגי. החזיקו את צינורית הצינור הצרפתית במלקחיים.חודרים את דופן הצינורית עם מחט 30G במרחק של סנטימטר אחד מקצה הצינורית. דוחפים את המחט דרך הצינורית עד שקצה המחט הופך גלוי. הנה תמונת השוואה של קטטר 26G וצינורית מתוצרת עצמית; שניהם מתאימים לקנולציה של פורטל עכבר.מכינים 25 מיליליטר של מלוחים heparinized עם ריכוז סופי של 2, 500 יחידות בינלאומיות למיליליטר, ומניחים מזרק באינקובטור להגדיר על 40 מעלות צלזיוס. להלן המרכיבים העיקריים של מערכת זילוח המכונה הנורמותרמית ex-vivo. הרכיבים כוללים בעיקר את תא האיבר, המכונה התרמוסטטית, משאבת הרולר, המחמצן והמאגר.כאן, אתה יכול לראות הגדרה מפורטת של תא האיברים שלנו. בעיקרון, הוא מורכב מגוף תא איברים, חיישן לחץ, מחליף חום ומלכודת בועות. הקמנו מפרצון פרפוסט, שקע פרפוסט, ופתח ניקוז מרה.זוהי מערכת ניטור ADI בה אנו משתמשים כדי לנטר את לחץ הווריד הפורטלי. מערכת ADI מורכבת מחיישן לחץ, בקר מרכזי וצגים. הפעל את תוכנית LabChart לניטור לחץ.כיול ואפס נדרשים לפני כל שימוש בחיישן הלחץ. השתמש בכספית אפס מילימטר ובכספית 20 מ"מ כסימנים כדי לכייל את חיישן הלחץ עבור הכיול הדו-שלבי. בהתבסס על ניטור מתמיד של לחץ הפורטל, אנו יכולים להתאים את פלורן הפורטל בהתאם לשינויי לחץ.בנפחים שווים של פרפוסטט למאגר ולתא האיברים כדי להנהיג את המערכת, יש להקדיש תשומת לב מיוחדת לשמירה על סטריליות במהלך תהליך המילוי. חבר תא אינדוקציה עם שקע בקיר. הפוך חמצן ל 0.5 ליטר לדקה.יש להפוך את האיזופלורן ל-3%מניחים את בעל החיים בתא עד לקבלת הרדמה עמוקה. השתמש מזרק מיקרו להחיל משקל הגוף מותאם מינון של שיכוך כאבים. הנה, שבעה מיקרוליטר של buprenorphine.כעת, אנו מתחילים את ניתוח הניתוח. בצע חתך רוחבי באזור הבטן של העכבר. חתך העור משתרע על קו בית השחי של הבשר הדו-צדדי משני הצדדים.בזהירות לבצע חתך אורכי לאורך linea alba. חותכים דרך שכבת שרירי הבטן עם electrocoagulation ומספריים. בזהירות מניחים חתיכת גזה רטובה כדי להגן על הכבד מפני electrocoagulation.לחשוף באופן מלא את חלל הבטן של העכבר. בזהירות להעביר את המעי הדק מתוך חלל הבטן עם צמר גפן רטוב כדי לחשוף באופן מלא את הילום. מוצג כאן תרשים סכמטי של קנולציה של ורידים פורטליים וקנולציה של צינור המרה.בעיקרון, אנו בוחרים את הצינורית המתאימה בהתאם לגודל העכבר, ואנו משתמשים בתפר משי 6-0 לקיבוע הצינורית. שחררו בזהירות את צינור המרה המשותף באמצעות מלקחיים מעוקלים עדינים ללא שיניים. צינור המרה המשותף ניזוק בקלות רבה ונשבר.ברגע שהוא נשבר, אי אפשר לקנן אותו. בשל כיוון המיקום האנטומי, מלקחיים מעוקלים קלים יותר לתפעול. הניחו שתי לולאות תפר משי 6-0 מעל צינור המרה המשותף כהכנה לשלב הבא.בזהירות לנקב את צינור המרה עם מחט 30G. השתמש במלקחיים מעוקלים מחודדים כדי להגדיל את החורים הקטנים, כך שהוא יוכל להזין את קנולציית צינור המרה. השתמש במלקחיים של כלי דם על פני צינורית צינורית צינור המרה ודחוף אותה לתוך צינור המרה. הערה.ברגע הקנולציה, תרגישו את ההתנגדות שמביאה המרה. אם הכוח אינו נשלט היטב, הצינורית תידחף החוצה מדרכי המרה על ידי הלחץ של זרימת המרה. בזהירות להתאים את עומק הצינורית.אם הוא עמוק מדי, הוא עלול לפגוע בצינור המרה, ואם הוא לא עמוק מספיק, הוא עלול להחליק החוצה. ניתן לראות זרימת מרה בצינורית לאחר קנולציה מוצלחת. מהדקים את וריד הפורטל במלקחיים שטוחים ומשחררים בזהירות את רקמת החיבור במלקחיים מעוקלים.אל תמשוך חזק כאן, כדי לא לגרום לקריעה של וריד הפורטל. ברגע שווריד הפורטל ניזוק, קשה לשחזר את וריד הפורטל. מניחים שני תפרי משי 6-0 לולאה מעל וריד השער החופשי.השתמש אטב עורקי כדי לסגור את הווריד הפורטלי הדיסטלי. בזהירות רבה לנקב את וריד הפורטל עם אחד הצינורית וריד הפורטל לעיל. זרימת הדם ניתן לראות בבירור בתוך הצינורית לאחר ניקוב מוצלח.קח תמיסת מלח הפרין שחוממה מראש מאינקובטור. הסירו את כל בועות האוויר. תקן מזרק עם מלוחים heparinized שחומם מראש לתוך משאבת מזרק.חבר את צינור ההרחבה של משאבת המזרק לצינורית של וריד הפורטל. התאם את המהירות לשני מיליליטר לדקה והתחל את שטיפת הכבד. להגדיל isoflurane ל 5% ו המתת חסד העכבר עם מנת יתר isoflurane אינהלציה.שימו לב לצבע הכבד בסוף הליך השטיפה. הבלו על הכבד ברגע שהצבע הפך לצהוב הומוגני. בזהירות להעביר את הכבד לתוך חדר האיברים באמצעות צלחת פטרי.שמור כמות קטנה של מלוחים בצלחת פטרי כדי למנוע כבד מלהיות מרוסק. הערה. ניתן בקלות לסובב את הווריד הפורטלי ואת צינור המרה במהלך הליך זה, מה שעלול להשפיע על זילוח הכבד ואיסוף המרה. להחדיר לאט מלח רגיל לתוך צינורית וריד הפורטל עם מזרק כדי לפנות את בועות האוויר בצינורית.חבר את צינורית הווריד הפורטלי לצינור זרימת הפרפוזט בתא האיבר. צינורית צינורית צינור המרה של העכבר מונחית דרך שסתום של חדר האיברים, אשר סגור עם כובע גומי. לאחר מכן, צינור המרה מוכנס לתוך צינור מיקרו מוכן מראש 0.5 מיליליטר עם חור קטן להוביל.לאחר שהכל מחובר, הפעל את המשאבה הפריסטלטית. בדוק את קריאת לחץ ורידי הפורטל כדי להתאים את קצב הזרימה. שמור על לחץ הווריד הפורטלי בין שבעה ל -10 מילימטר כספית על ידי התאמת קצב הזרימה. הערה.קצב זרימה נומינלי יכול להשתנות מעט בהתאם לגיל ולמיקום הצינורות. זוהי הבחירה של מדיום פרפוסט, נפח פרבוסט ולחץ זילוח בהתבסס על מחקר ספרותי של מחקרי זילוח מכונת כבד של חולדה מחומצנת נורמותרמית. זהו ניסוי שלב אחר שלב כדי לבסס את מודל זילוח העכבר.נדרשו כ-14 ניסויים כדי לבחור את הצנתרים המתאימים ביותר. בידינו, שימוש בשני צנתרי גומי צרפתיים לווריד הפורטלי, יחד עם קטטר גומי צרפתי אחד לצינור המרה, הוא השילוב הטוב ביותר להשגת זילוח הומוגני כאשר כל הצנתרים במקום. רמת החומציות ורמת האשלגן היו יציבות לאורך כל 12 שעות הזילוח.רמת החומציות נעה בין 7.26 ל-7.71, ורמת האשלגן נעה בין 5.9 ל-6.8 מילימול לליטר. צביעת HE מראה כי לאחר 12 שעות זילוח, שלמות ההיסטולוגיה של כבד העכבר נשמרה טוב יחסית. יחד, הדגמנו כאן את הקמתה המוצלחת של מערכת זילוח מכונה מחומצנת נורמותרמית עבור כבד העכבר.זילוח של כבד עכבר במשך 12 שעות הביא לשימור טוב של המורפולוגיה של הכבד, אם כי לא לאורך כל האיבר. נדרש מאמץ נוסף כדי להשיג זילוח הומוגני מלא על פני תקופה ארוכה יותר של זמן. ברגע שזה מושג, ניתן לשקול שימוש בבעלי חיים מהונדסים גנטית, כגון השימוש בעכברי IL-2-knockout כדי לחקור את תפקיד הדלקת.

Research

JoVE Journal

Engineering

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

High-resolution, High-speed, Three-dimensional Video Imaging with Digital Fringe Projection Techniques

ברזולוציה גבוהה, במהירות גבוהה, הדמיה וידאו תלת ממדית עם טכניקות הקרנה הדיגיטלי פרינג&#39;

Digital fringe projection (DFP) techniques provide dense 3D measurements of dynamically changing surfaces.&#160;Like the human eyes and brain, DFP uses ...

The Preparation of Electrohydrodynamic Bridges from Polar Dielectric Liquids

הכנת גשרי Electrohydrodynamic מנוזלי דיאלקטרי פולאר

Horizontal and vertical liquid bridges are simple and powerful tools for exploring the interaction of high intensity electric fields (8-20 kV/cm) and ...

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

במבחנה והתרבות של תאי Epicardial מתוך לב העכבר עוברי

During embryogenesis, the epicardial contribution to coronary vasculature development has been very well established. Cells derived from the epicardium ...

Fabrication of Ultra-thin Color Films with Highly Absorbing Media Using Oblique Angle Deposition

ייצור של סרטים צבע דקים עם מאוד קליטת מדיה באמצעות התצהיר זווית אלכסונית

Ultra-thin film structures have been studied extensively for use as optical coatings, but performance and fabrication challenges remain.&#160; We present ...

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

שיטות של באתרו לשעבר בחיי עיר חקירות של המרות מבניים: המקרה של התגבשות של משקפיים מתכתי

We demonstrate the use of two nuclear-based analytical methods that can follow the modifications of microstructural arrangement of iron-based metallic ...

Application of Design Aspects in Uniaxial Loading Machine Development

יישום של עיצוב היבטים בפיתוח מכונות העמסה Uniaxial

In terms of accurate and precise mechanical testing, machines run the continuum. Whereas commercial platforms offer excellent accuracy, they can be ...

In vitro Assessment of Aortic Regurgitation Using Four-Dimensional Flow Magnetic Resonance Imaging

In vitro Assessment of Aortic Regurgitation Using Four-Dimensional Flow Magnetic Resonance Imaging

במבחנה הערכה של רגורגיטציה של אבי העורקים באמצעות הדמיית תהודה מגנטית של זרימה ארבע-ממדית

Aortic regurgitation (AR) refers to backward blood flow from the aorta into the left ventricle (LV) during ventricular diastole. The regurgitant jet ...

Particle Image Velocimetry Investigation of Hemodynamics via Aortic Phantom

Particle Image Velocimetry Investigation of Hemodynamics via Aortic Phantom

תמונת חלקיקים Velocimetry חקירה של המודינמיקה באמצעות פנטום אבי העורקים

Aortic valve dysfunction and stroke have recently been reported in transcatheter aortic valve implantation (TAVI) patients. Thrombus in the aortic sinus ...

Synthesizing Nanoparticles and Nanostructures via Laser Ablation

Ultrafast Laser-Ablated Nanoparticles and Nanostructures for Surface-Enhanced Raman Scattering-Based Sensing Applications

Advancements and Applications in Nanoparticle Synthesis Through Laser Ablation in Liquids (Video) | JoVE

ננו-חלקיקים וננו-מבנים מהירים במיוחד בלייזר עבור יישומי חישה מבוססי פיזור ראמאן משופרים בפני השטח

The technique of ultrafast laser ablation in liquids has evolved and matured over the past decade, with several impending applications in various fields ...

Preparation of Free-Surface Hyperbolic Water Vortices

הכנת מערבולות מים היפרבוליות חופשיות

Free surface vortices are present in industry in flow regulation, energy dissipation, and energy generation. Although investigated extensively, detailed ...