Name: normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse
Uploaded: 2023-09-25T14:25:00
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이 논문을 쓰는 동안 나는 많은 지원과 도움을 받았다. 특히 제 수술 중 훌륭한 협력과 환자 지원에 대해 팀 동료 XinPei Chen에게 감사드립니다.

동물 실험은 동물 복지에 대한 현행 독일 규정 및 지침과 동물 연구 보고를 위한 ARRIVE 지침에 따라 수행되었습니다. 동물 실험 프로토콜은 독일 튀링겐의 Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz에 의해 승인되었습니다(승인 번호: UKJ - 17 - 106).
참고: 체중이 34± 4g인 수컷 C57BL/6J 마우스(평균 ± 표준 오차[SEM])를 간 기증자로 사용했습니다. 그들은 통제된 환경 조건(50% 습도 및 18 - 23 °C)...

프로토콜의 중요한 단계 간 이식의 두 가지 중요한 단계는 문맥의 캐뉼라 삽입(PV)과 후속 담관 캐뉼라(BD)입니다. 이러한 단계는 성공적인 장기 회수 및 후속 관류 또는 이식 절차를 보장하는 데 가장 중요합니다.
도전과 해결책 PV 캐뉼러는 혈관벽의 손상, 카테터의 변위 및 삽입 과정의 실행 가능성이라는 세 가지 문제를 제시합니다. PV 혈관 벽의...

간 이식은 말기 간 질환이 있는 개인을 위한 황금 표준 치료법입니다. 유감스럽게도 기증자 장기에 대한 수요가 가용 공급을 초과하여 심각한 부족 현상이 발생합니다. 2021년에는 약 24,936명의 환자가 간 이식 대기자 명단에 올랐고 9,234건의 이식만이 성공적으로 수행되었습니다1. 간 이식편의 수요와 공급 사이의 상당한 격차는 기증자 풀을 넓히고 간 이식편의 접근성을 향상시키기 위한 대체 전략을 조사해야 할 시급한 필요성을 강조합니다. 기증자 풀을 확장하는 한 가지 방법은 한계 기증자를 사용하는 것입니다2. 한계 기증자에는 고령, 중등도 또는 중증 지방증이 있는 사람이 포함됩니다. 한계 장기의 이식이 유리한 결과를 가져올 수 있지만 전반적인 결과는 차선책으로 남아 있습니다. 결과적으로, 한계 기증자의 기능을 향상시키기위한 치료 전략의 개발이 현재 진행 중이다 3,4.
전략 중 하나는 기계 관류, 특히 정상 체온 산소 기계 관류를 사용하여 이러한 변연 기관의 기능을 향상시키는 것입니다5. 그러나 정상 체온 산소 기계 관류(NEVLP)의 유익한 효과의 기초가 되는 분자 메커니즘에 대한 이해는 여전히 제한적입니다. 유전자 변형 균주를 풍부하게 이용할 수 있는 마우스는 분자 경로를 조사하기 위한 귀중한 모델 역할을 합니다. 예를 들어, 간 허혈-재관류 손상을 완화하는 데 있어 자가포식 경로의 중요성이 점점 더 인식되고 있습니다 6,7. 간 허혈-재관류 손상에서 중요한 분자 경로 중 하나는 miR-20b-5p/ATG7 경로8입니다. 현재, 다수의 ATG 녹아웃 및 조건부 녹아웃 마우스 균주가 이용 가능하지만, 상응하는 쥐 균주는 없다9.
이러한 배경을 바탕으로 마우스 간 이식을 위한 소형화된 NEVLP 플랫폼을 생성하는 것이 목표였습니다. 이 플랫폼은 기증자의 간 기능 향상을 목표로 하는 잠재적인 유전자 변형 전략의 탐색 및 평가를 용이하게 합니다. 또한 시스템이 장기 관류에 적합하여 일반적으로 "장기 복구"라고 하는 간의 생체 외 치료가 가능해야 했습니다.
마우스 간 관류에 대한 관련 시험관 내 데이터의 제한된 가용성을 고려하여 문헌 검토는 쥐에서 수행된 연구에 초점을 맞췄습니다. 2010년부터 2022년까지의 문헌에 대한 체계적인 검색은 "정상 체온 간 관류", "생체 외 또는 시험관 내" 및 "쥐"와 같은 키워드를 사용하여 수행되었습니다. 이 검색은 설치류에서 최적의 조건을 식별하여 가장 적절한 접근 방식을 결정할 수 있도록하는 것을 목표로했습니다.
관류 시스템은 밀폐된 방수 유리 버퍼 저장소, 연동 롤러 펌프, 산소 공급기, 버블 트랩, 열교환기, 오르간 챔버 및 폐쇄형 사이클링 튜브 시스템으로 구성됩니다(그림 1). 이 시스템은 전용 온도 조절기를 사용하여 37°C의 일정한 관류 온도를 정밀하게 유지합니다. 연동 롤러 펌프는 회로 전체에 걸쳐 관류물의 흐름을 구동합니다. 관류 회로는 절연된 워터 재킷 저장소에서 시작됩니다. 그 후, 관류액은 전용 가스통에서 95% 산소와 5% 이산화탄소의 가스 혼합물을 받는 산소 공급기를 통해 전달됩니다. 산소 공급 후, 관류액은 버블 트랩을 통과하며, 여기서 갇힌 버블은 연동 펌프에 의해 저장소로 다시 리디렉션됩니다. 나머지 관류액은 열교환기를 통해 흐르고 오르간 챔버로 들어가 저장소로 돌아갑니다.
여기에서 우리는 마우스 간을 위한 NEVLP를 확립한 경험을 보고하고 산소 운반체 없이 산소가 함유된 배지를 사용하여 수행된 파일럿 실험의 유망한 결과를 공유합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 ml Micro Tube PP</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Micro Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>701N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+OF2419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+DU2619WX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Hypodermic Needle</td>
			<td>Sterican</td>
			<td>100246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Syringe Pump</td>
			<td>Braun</td>
			<td>110356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Perma-Hand Seide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>639H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arterial Clip</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BH014R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Moist Chamber</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>73-4733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big Cotton Applicator&#160;</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bubble Trap</td>
			<td>Hugo-Sachs-Elektronik</td>
			<td>V83163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenovet (0.3 mg / ml)</td>
			<td>Elanco</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIDEX OPA solution (2 L)</td>
			<td>Cilag GmbH</td>
			<td>20391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrosurgical Unit for Monopolar Cutting VIO&#174; 50 C</td>
			<td>ERBE</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(500 ml)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Mixture (95 % oxygen &#38; 5 % carbon dioxide)</td>
			<td>House Supply</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Circulating Baths</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>75-0310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 5000 (I.E. /5 ml)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1708.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone (100 mg / 2 ml)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>15427276</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin(100 IE / ml)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0516-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran (250 ml)</td>
			<td>Cp-Pharma</td>
			<td>1214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane Oxygenator</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>T18728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery Microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Retractor Set&#160;</td>
			<td>Carfil Quality</td>
			<td>180000056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoZoomer 2.0 HT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponges&#160;</td>
			<td>Kompressen</td>
			<td>866110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin (1 mg / ml)&#160;</td>
			<td>C.C.Pro</td>
			<td>Z-13-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Extension Tube (30 cm)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4256000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>P-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishc 100x15 mm</td>
			<td>VWR&#174;</td>
			<td>391-0578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidon-Jod (Vet-Sep Spray)</td>
			<td>Livisto</td>
			<td>799-416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure Transducer Simulator</td>
			<td>UTAH Medical Products</td>
			<td>650-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable Blood Pressure Transducers</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT-0380/D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S &#38; T Vessel Cannulation Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00608-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Cotton Applicator</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps 10 cm&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 50ml Original Perfusor</td>
			<td>Braun</td>
			<td>8728810F-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UT - 03 Cannula</td>
			<td>Unique Medical, Japan</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary Saline (500 ml)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>18X1807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Jacketed Reservoir&#160; 2 L</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>73-3441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>William&#39;s E Medium (500 ML)</td>
			<td>Thermofischer Scientific</td>
			<td>A1217601</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse

이 프로토콜은 마우스 간을 사용하여 최적화된 적혈구가 없는 NEVLP 시스템을 제공합니다. 마우스 간의 생체 외 보존은 변형된 캐뉼라와 기존의 상업용 생체 외 관류 장비에서 채택된 기술을 사용하여 달성되었습니다. 이 시스템은 12시간의 관류 후 보존 결과를 평가하는 데 활용되었습니다. C57BL/6J 마우스를 간 기증자로 사용하였고, 간을 문맥(PV)과 담관(BD)에 캐뉼라(cannul)시킨 후, 따뜻한(37°C) 헤파린화된 식염수로 장기를 세척하여 이식하였다. 이어서, 이식된 간을 관류실로 옮기고 정상 체온 산소화 기계 관류(NEVLP)를 실시했습니다. 관류액 분석을 위해 입구 및 출구 관류액 샘플을 3시간 간격으로 수집했습니다. 관류가 완료되면 조직학적 분석을 위해 간 샘플을 얻었고, Hematoxylin-Eosin(HE) 염색을 통해 변형된 Suzuki-Score를 사용하여 형태학적 완전성을 평가했습니다. 최적화 실험은 다음과 같은 결과를 산출했다 : (1) 30 g 이상의 마우스는 담관 (BD)의 크기가 더 크기 때문에 실험에 더 적합한 것으로 간주되었다. (2) 2 Fr (외경 = 0.66 mm) 폴리우레탄 캐뉼라는 폴리프로필렌 캐뉼라와 비교할 때 문맥 캐뉼라(PV)를 캐뉼레이팅하는 데 더 적합하였다. 이는 폴리우레탄 소재의 향상된 그립감으로 인해 신체에서 장기 챔버로 이동하는 동안 카테터 미끄러짐이 감소했기 때문입니다. (3) 담관(BD)의 캐뉼라의 경우, 1 Fr(외경 = 0.33 mm) 폴리우레탄 캐뉼라가 폴리프로필렌 UT-03(외경 = 0.30 mm) 캐뉼라에 비해 더 효과적인 것으로 나타났다. 이 최적화된 프로토콜을 사용하여 마우스 간은 조직학적 구조에 큰 영향을 미치지 않고 12시간 동안 성공적으로 보존되었습니다. 헤마톡실린-에오신(HE) 염색은 간에서 잘 보존된 형태학적 구조를 나타냈으며, 이는 명확하게 보이는 핵과 간 정현파의 경미한 확장을 가진 주로 생존 가능한 간세포를 특징으로 합니다.

외과 절차의 확립 이 실험에는 총 17마리의 동물이 활용되었다: 14마리의 마우스는 문맥(PV) 및 담관(BD)의 캐뉼라 삽입을 포함하여 장기 조달 과정을 최적화하기 위해 사용되었고, 3마리의 마우스는 절차를 검증하는 데 사용되었다(표 1). 조직학적 결과(도 3)는 최적의 관류 조건의 식별을 용이하게 하기 위해 비교되었다.
?...

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Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

정상 체온 생체 외 간 관류(NEVLP) 시스템이 마우스 간을 위해 만들어졌습니다. 이 시스템은 미세 수술에 대한 경험이 필요하지만 재현 가능한 관류 결과를 허용합니다. 마우스 간을 활용하는 능력은 새로운 관류액 첨가제를 식별하기 위한 분자 경로의 조사를 용이하게 하고 장기 복구에 중점을 둔 실험의 실행을 가능하게 합니다.

마우스의 Normothermic Ex Vivo 간 기계 관류

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

마우스의 Normothermic ex-vivo 간 기계 관류. Normothermic 산소화 간 관류는 한계 장기를 구출하는 유망한 전략이며 최근 임상 실습에 도입되었습니다. 그러나 기본 분자 메커니즘은 잘 알려져 있지 않습니다.형질전환 마우스와 같은 유전자 변형 동물을 활용하여 분자 경로를 추가로 연구하기 위해서는 마우스 모델이 필요하므로 마우스 간을 위한 정상 체온 산소 기계 관류 시스템 구축을 기다리고 있습니다. 다음은 전체 시스템의 구성표입니다. 첫째, 전체 시스템은 물 순환을 통해 자동 온도 조절 컨트롤러에 의해 섭씨 37도에서 제어됩니다.관류액은 연동 펌프에 의해 저장소에서 산소 공급기로 펌핑됩니다. 산소 공급기에는 95 % 산소와 5 % 이산화탄소의 중단없는 가스 흐름이 있습니다. 그런 다음 관류액은 버블 트랩을 통과합니다.기포가있는 관류액은 압력 하에서 저장소로 다시 펌핑됩니다. 나머지 관류액은 튜브가 문맥에 연결된 장기 챔버로 흐릅니다. 관류액은 간에서 간상 카바를 통해 장기 챔버로 배출됩니다.오르간 챔버에서 유출된 관류액은 연동 펌프에 의해 저장소로 다시 보내집니다. 담즙 배액관은 담즙을 수집하기 위해 장기 챔버에 연결됩니다. 이것은 우리의 수술대입니다.모든 수술은 현미경으로 이루어집니다. 우리는 수술 절차 전반에 걸쳐 반 멸균 작동 조건을 유지합니다. 집게로 프렌치 튜브 캐뉼라를 잡으십시오.캐뉼라 끝에서 1cm 떨어진 곳에 30G 바늘로 캐뉼라 벽을 관통합니다. 바늘 끝이 보일 때까지 캐뉼라를 통해 바늘을 밀어 넣습니다. 다음은 26G 카테터와 자체 제작 캐뉼라의 비교 사진입니다. 둘 다 마우스 포털 캐뉼라에 적합합니다.25 밀리리터의 헤파린 처리 식염수를 2, 500 국제 단위 / 밀리리터의 최종 농도로 준비하고 섭씨 40도에 설정된 인큐베이터에 주사기를 놓습니다. 다음은 생체 외 정상 체온 기계 관류 시스템의 주요 구성 요소입니다. 구성 요소에는 주로 오르간 챔버, 자동 온도 조절 기계, 롤러 펌프, 산소 공급기 및 저장소가 포함됩니다.여기에서 오르간 챔버의 자세한 설정을 볼 수 있습니다. 기본적으로 오르간 챔버 본체, 압력 센서, 열교환기, 버블 트랩으로 구성되어 있습니다. 우리는 관류수 입구, 관류수 배출구 및 담즙 배수구를 설치했습니다.이것은 문맥 압력을 모니터링하는 데 사용하는 ADI 모니터링 시스템입니다. ADI 시스템은 압력 센서, 중앙 컨트롤러 및 디스플레이로 구성됩니다. 압력 모니터링을 위해 LabChart 프로그램을 켭니다.압력 센서를 사용하기 전에 보정 및 영점 조정이 필요합니다. 0mm 수은과 20mm 수은을 표시로 사용하여 2단계 교정을 위해 압력 센서를 교정합니다. 문맥 압력의 지속적인 모니터링을 기반으로 압력 변화에 따라 문맥 플루란을 조정할 수 있습니다.시스템을 프라이밍하기 위해 저장소와 오르간 챔버에 동일한 양의 관류액이 있을 때, 충전 과정에서 무균 상태를 유지하기 위해 특별한 주의를 기울여야 합니다. 인덕션 챔버를 벽면 콘센트와 연결합니다. 산소를 분당 0.5 리터로 돌립니다.이소플루란을 3%로 돌리고 깊은 마취에 도달할 때까지 동물을 챔버에 넣습니다. 마이크로 주사기를 사용하여 체중에 맞는 용량의 진통제를 바르십시오. 여기에 7 마이크로 리터의 부 프레 노르 핀이 있습니다.이제 수술을 시작합니다. 마우스의 복부를 가로 절개하십시오. 피부 절개는 양쪽의 양측 고기 겨드랑이 라인까지 확장됩니다.linea alba를 따라 조심스럽게 세로 절개를하십시오. 전기 응고와 가위로 복부 근육층을 자릅니다. 전기 응고로부터 간을 보호하기 위해 젖은 거즈를 조심스럽게 놓으십시오.마우스의 복강을 완전히 노출시킵니다. 젖은 면봉으로 소장을 복강 밖으로 조심스럽게 옮겨 문문을 완전히 노출시킵니다. 여기에 표시된 것은 문맥 캐뉼라 및 담관 캐뉼라의 개략도입니다.기본적으로 마우스의 크기에 따라 적절한 캐뉼라를 선택하고 캐뉼라 고정을 위해 6-0 실크 봉합사를 사용합니다. 치아가 없는 미세한 곡선 집게를 사용하여 총담관을 조심스럽게 제거합니다. 총 담관은 매우 쉽게 손상되고 부서집니다.한 번 깨지면 캐뉼러를 사용할 수 없습니다. 해부학 적 위치의 방향으로 인해 구부러진 집게가 작동하기 쉽습니다. 다음 단계를 준비하기 위해 총 담관 위에 두 개의 6-0 실크 봉합사 루프를 놓습니다.30G 바늘로 담관을 조심스럽게 뚫습니다. 뾰족한 곡선 집게를 사용하여 작은 구멍을 확대하여 담관 캐뉼러를 공급할 수 있습니다. 담관 캐뉼라를 가로질러 혈관 캐뉼레이션 집게를 사용하여 담관으로 밀어 넣습니다. 메모.캐뉼라의 순간에, 당신은 담즙에 의해 가져온 저항을 느낄 것입니다. 힘이 잘 조절되지 않으면 담즙 유출 압력에 의해 캐뉼라가 담도 밖으로 밀려납니다. 캐뉼라의 깊이를 조심스럽게 조정하십시오.너무 깊으면 담관이 손상될 수 있고, 충분히 깊지 않으면 빠져나갈 수 있습니다. 담즙 흐름은 성공적인 캐뉼라 삽입 후 캐뉼라에서 관찰 될 수 있습니다. 편평한 집게로 문맥을 고정하고 구부러진 집게로 결합 조직을 조심스럽게 풀어줍니다.문맥이 찢어지지 않도록 여기를 세게 당기지 마십시오. 문맥이 손상되면 문맥을 캐뉼러로 고정하기가 어렵습니다. 자유 문맥 위에 두 개의 6-0 실크 봉합사 루프를 놓습니다.동맥 클립을 사용하여 원위 문맥을 닫습니다. 위의 문맥 캐뉼라 중 하나로 문맥을 매우 조심스럽게 뚫습니다. 성공적인 천자 후 캐뉼라 내에서 혈류를 명확하게 관찰 할 수 있습니다.인큐베이터에서 예열 된 헤파린 식염수를 섭취하십시오. 모든 기포를 제거하십시오. 예열된 헤파린 처리 식염수로 주사기를 주사기 펌프에 고정합니다.주사기 펌프의 연장 튜브를 문맥의 캐뉼라에 연결하십시오. 속도를 분당 2 밀리리터로 조정하고 간 홍조를 시작하십시오. 이소플루란을 5%로 늘리고 과다 복용 이소플루란 흡입으로 마우스를 안락사시킵니다.홍조 절차가 끝날 때 간색을 관찰하십시오. 색이 균질한 노란색으로 변하면 간을 절제하십시오. 페트리 접시를 사용하여 간을 장기 챔버로 조심스럽게 옮깁니다.간이 부서지는 것을 방지하기 위해 페트리 접시에 소량의 식염수를 보관하십시오. 메모. 이 과정에서 문맥과 담관이 쉽게 뒤틀릴 수 있으며, 이는 간 관류 및 담즙 수집에 영향을 줄 수 있습니다. 주사기로 문맥 캐뉼라에 생리 식염수를 천천히 주입하여 캐뉼라의 기포를 배출합니다.문맥 캐뉼라를 장기 챔버의 관류액 유출 튜브에 연결합니다. 마우스 담관 캐뉼라는 고무 캡으로 닫힌 장기 챔버의 밸브를 통해 안내됩니다. 그런 다음 담즙 튜브를 리드에 작은 구멍이있는 미리 준비된 0.5 밀리리터 마이크로 튜브에 삽입합니다.모든 것이 연결되면 연동 펌프를 켭니다. 문맥 압력 판독값을 확인하여 유속을 조정하십시오. 유속을 조정하여 문맥 압력을 7에서 10mm 수은 사이로 유지하십시오. 메모.공칭 유량은 튜브의 수명과 위치에 따라 약간 달라질 수 있습니다. 이것은 정상 체온 산소화 쥐 간 기계 관류 연구의 문헌 정밀 검사를 기반으로 한 관류액 배지, 관류액 부피 및 관류 압력의 선택입니다. 이것은 마우스 관류 모델을 확립하기 위한 단계별 시험입니다.가장 적합한 카테터를 선택하는 데 약 14 번의 실험이 필요했습니다. 우리 손에는 문맥에 2 개의 프랑스 고무 카테터를 사용하고 담관에 1 개의 프랑스 고무 카테터를 사용하는 것이 모든 카테터가 제자리에 있는 상태에서 균일한 관류를 달성하는 가장 좋은 조합입니다. pH 수준 및 칼륨 수준은 12시간 관류 전체에 걸쳐 안정하였다.pH 수준은 7.26 내지 7.71 범위였고, 칼륨 수준은 리터당 5.9 내지 6.8 밀리몰이었다. HE 염색은 12시간 관류 후 마우스 간의 조직학적 완전성이 비교적 잘 보존되었음을 보여줍니다. 종합하면, 우리는 여기에서 마우스 간을 위한 정상 체온 산소 기계 관류 시스템의 성공적인 구축을 입증했습니다.12 시간 동안 마우스 간을 관류하면 전체 장기에 걸쳐 있지는 않지만 간 형태가 잘 보존되었습니다. 장기간에 걸쳐 완전한 균질 관류를 달성하기 위해서는 더 많은 노력이 필요합니다. 이것이 달성되면, 염증의 역할을 조사하기 위해 IL-2- 녹아웃 마우스를 사용하는 것과 같이 유전자 변형 동물의 사용을 고려할 수 있습니다.

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The technique of ultrafast laser ablation in liquids has evolved and matured over the past decade, with several impending applications in various fields ...

Preparation of Free-Surface Hyperbolic Water Vortices

자유 표면 쌍곡선 물 와류의 제조

Free surface vortices are present in industry in flow regulation, energy dissipation, and energy generation. Although investigated extensively, detailed ...