Name: normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse
Uploaded: 2023-09-25T14:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse at JoVE.com

Bu yazının yazımı boyunca çok fazla destek ve yardım aldım. Takım arkadaşım XinPei Chen'e operasyonum sırasında harika işbirliği ve hasta desteği için özellikle teşekkür etmek istiyorum.

Hayvan deneyleri, mevcut Alman yönetmeliklerine ve hayvan refahı yönergelerine ve Hayvan Araştırmalarını Raporlamak için ARRIVE yönergelerine göre gerçekleştirilmiştir. Hayvan deneyi protokolü Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz, Thüringen, Almanya tarafından onaylanmıştır (Onay Numarası: UKJ - 17 - 106).
NOT: Karaciğer donörü olarak 34 ± 4 g ağırlığındaki erkek C57BL/6J fareler (ortalama [SEM]'in ortalama ± standart hatası) kullanılmıştır. Kontrollü...

Protokoldeki kritik adımlar Karaciğer eksplantasyonunda iki önemli adım, portal venin (PV) kanülasyonu ve ardından safra kanalının (BD) kanülasyonudur. Bu adımlar, başarılı organ alımı ve ardından perfüzyon veya transplantasyon prosedürlerinin sağlanmasında büyük önem taşımaktadır.
Zorluklar ve çözümler PV kanülasyonu üç zorluk ortaya çıkarır: damar duvarının yaralanması, kateterin yer değiştirmesi ve yerleştirme ...

Karaciğer transplantasyonu, son dönem karaciğer hastalığı olan bireyler için altın standart tedaviyi temsil eder. Ne yazık ki, donör organlara olan talep mevcut arzı aşmakta ve önemli bir kıtlığa yol açmaktadır. 2021 yılında, yaklaşık 24.936 hasta karaciğer grefti için bekleme listesindeyken, sadece 9.234 nakil başarıyla gerçekleştirildi1. Karaciğer greftlerinin arz ve talebi arasındaki önemli eşitsizlik, donör havuzunu genişletmek ve karaciğer greftlerinin erişilebilirliğini artırmak için alternatif stratejilerin araştırılması gerekliliğini vurgulamaktadır. Donör havuzunu genişletmenin bir yolu, marjinal donörleri kullanmaktır2. Marjinal donörler arasında ileri yaş, orta veya şiddetli steatoz olanları bulunur. Marjinal organların transplantasyonu olumlu sonuçlar verse de, genel sonuçlar optimal değildir. Sonuç olarak, marjinal donörlerin işlevini arttırmayı amaçlayan terapötik stratejilerin geliştirilmesi şu anda devam etmektedir 3,4.
Stratejilerden biri, bu marjinal organların işlevini geliştirmek için makine perfüzyonunu, özellikle normotermik oksijenli makine perfüzyonunu kullanmaktır5. Bununla birlikte, normotermik oksijenli makine perfüzyonunun (NEVLP) yararlı etkilerinin altında yatan moleküler mekanizmaların hala sınırlı bir anlayışı vardır. Fareler, genetiği değiştirilmiş suşların bol miktarda bulunmasıyla, moleküler yolları araştırmak için değerli modeller olarak hizmet eder. Örneğin, hepatik iskemi-reperfüzyon hasarını hafifletmede otofaji yolaklarının önemi giderek daha fazla kabul görmektedir 6,7. Hepatik iskemi-reperfüzyon hasarında önemli bir moleküler yol miR-20b-5p/ATG7 yol8'dir. Şu anda, bir dizi ATG nakavt ve koşullu nakavt fare suşu mevcuttur, ancak karşılık gelen sıçan suşlarıyoktur 9.
Bu arka plana dayanarak, amaç fare karaciğer greftleri için minyatür bir NEVLP platformu oluşturmaktı. Bu platform, donörün karaciğerinin işlevselliğini iyileştirmeyi amaçlayan potansiyel genetiği değiştirilmiş stratejilerin araştırılmasını ve değerlendirilmesini kolaylaştıracaktır. Ek olarak, sistemin uzun süreli perfüzyon için uygun olması ve genellikle "organ onarımı" olarak adlandırılan karaciğerin ex vivo tedavisini sağlaması çok önemliydi.
Fare karaciğeri perfüzyonu ile ilgili in vitro verilerin sınırlı mevcudiyeti göz önüne alındığında, literatür taraması sıçanlarda yapılan çalışmalara odaklanmıştır. "Normotermik karaciğer perfüzyonu", "ex vivo veya in vitro" ve "sıçanlar" gibi anahtar kelimeler kullanılarak 2010'dan 2022'ye kadar uzanan sistematik bir literatür taraması yapılmıştır. Bu araştırma, kemirgenlerde en uygun koşulları tanımlamayı ve en uygun yaklaşımı belirlememizi sağlamayı amaçlamıştır.
Perfüzyon sistemi, kapalı bir su ceketli cam tampon rezervuarı, bir peristaltik makaralı pompa, bir oksijenatör, bir kabarcık kapanı, bir ısı eşanjörü, bir organ odası ve kapalı bir bisiklet boru sisteminden oluşur (Şekil 1). Sistem, özel bir termostatik makine kullanarak 37 °C'lik sabit bir perfüzyon sıcaklığının hassas bir şekilde korunmasını sağlar. Peristaltik makaralı pompa, perfüzyonun akışını devre boyunca yönlendirir. Perfüzyon devresi, yalıtımlı su ceketli rezervuarda başlar. Daha sonra, perfüzyonat, özel bir gaz şişesinden% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit gaz karışımı alan oksijenatörden yönlendirilir. Oksijenasyonu takiben, perfüzyonat kabarcık tuzağından geçer, burada sıkışmış kabarcıklar peristaltik pompa tarafından rezervuara geri yönlendirilir. Kalan perfüzyonat ısı eşanjöründen akar ve rezervuara geri döndüğü organ odasına girer.
Burada, fare karaciğerleri için bir NEVLP oluşturma deneyimlerimizi rapor ediyoruz ve oksijen taşıyıcıları olmadan oksijenli ortam kullanılarak gerçekleştirilen bir pilot deneyin umut verici sonuçlarını paylaşıyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 ml Micro Tube PP</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Micro Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>701N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Fr Rubber Cannula</td>
			<td>Vygon</td>
			<td>Sample Cannula</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+OF2419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G Butterfly Cannula</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR+DU2619WX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G Hypodermic Needle</td>
			<td>Sterican</td>
			<td>100246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Syringe Pump</td>
			<td>Braun</td>
			<td>110356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Perma-Hand Seide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>639H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arterial Clip</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BH014R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Moist Chamber</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>73-4733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big Cotton Applicator&#160;</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bubble Trap</td>
			<td>Hugo-Sachs-Elektronik</td>
			<td>V83163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenovet (0.3 mg / ml)</td>
			<td>Elanco</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIDEX OPA solution (2 L)</td>
			<td>Cilag GmbH</td>
			<td>20391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrosurgical Unit for Monopolar Cutting VIO&#174; 50 C</td>
			<td>ERBE</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(500 ml)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Mixture (95 % oxygen &#38; 5 % carbon dioxide)</td>
			<td>House Supply</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Circulating Baths</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>75-0310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 5000 (I.E. /5 ml)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1708.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone (100 mg / 2 ml)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>15427276</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin(100 IE / ml)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0516-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran (250 ml)</td>
			<td>Cp-Pharma</td>
			<td>1214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane Oxygenator</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td>T18728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery Microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Retractor Set&#160;</td>
			<td>Carfil Quality</td>
			<td>180000056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoZoomer 2.0 HT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponges&#160;</td>
			<td>Kompressen</td>
			<td>866110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin (1 mg / ml)&#160;</td>
			<td>C.C.Pro</td>
			<td>Z-13-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Extension Tube (30 cm)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4256000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>P-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishc 100x15 mm</td>
			<td>VWR&#174;</td>
			<td>391-0578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidon-Jod (Vet-Sep Spray)</td>
			<td>Livisto</td>
			<td>799-416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure Transducer Simulator</td>
			<td>UTAH Medical Products</td>
			<td>650-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable Blood Pressure Transducers</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT-0380/D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S &#38; T Vessel Cannulation Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00608-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Cotton Applicator</td>
			<td>NOBA Verbandmittel Danz GmbH</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Forceps 10 cm&#160;</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>11063-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 50ml Original Perfusor</td>
			<td>Braun</td>
			<td>8728810F-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UT - 03 Cannula</td>
			<td>Unique Medical, Japan</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Instruments</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary Saline (500 ml)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>18X1807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Jacketed Reservoir&#160; 2 L</td>
			<td>Harvard-Apparatus</td>
			<td>73-3441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>William&#39;s E Medium (500 ML)</td>
			<td>Thermofischer Scientific</td>
			<td>A1217601</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo liver machine perfusion in mouse

Bu protokol, fare karaciğerlerini kullanarak optimize edilmiş eritrositsiz bir NEVLP sistemi sunar. Fare karaciğerlerinin ex vivo korunması, modifiye kanüller ve geleneksel ticari ex vivo perfüzyon ekipmanlarından uyarlanmış teknikler kullanılarak sağlanmıştır. Sistem, 12 saatlik perfüzyonu takiben koruma sonuçlarını değerlendirmek için kullanıldı. C57BL / 6J fareleri karaciğer donörü olarak görev yaptı ve karaciğerler, portal ven (PV) ve safra kanalı (BD) kanüle edilerek ve daha sonra organı ılık (37 ° C) heparinize salin ile yıkayarak eksize edildi. Daha sonra ekilen karaciğerler perfüzyon odasına transfer edildi ve normotermik oksijenli makine perfüzyonuna (NEVLP) tabi tutuldu. Giriş ve çıkış perfüzyon numuneleri, perfüzyon analizi için 3 saatlik aralıklarla toplandı. Perfüzyonun tamamlanmasının ardından, histolojik analiz için karaciğer örnekleri alındı ve morfolojik bütünlük, Hematoksilin-Eozin (HE) boyaması yoluyla modifiye Suzuki-Skoru kullanılarak değerlendirildi. Optimizasyon deneyleri aşağıdaki bulguları vermiştir: (1) 30 g'ın üzerindeki fareler, safra kanallarının (BD) daha büyük boyutu nedeniyle deney için daha uygun görülmüştür. (2) 2 Fr (dış çap = 0.66 mm) poliüretan kanül, bir polipropilen kanüle kıyasla portal venin (PV) kanüllenmesi için daha uygundu. Bu, poliüretan malzemenin gelişmiş kavramasına bağlandı ve vücuttan organ odasına transfer sırasında kateter kaymasının azalmasına neden oldu. (3) Safra kanalının (BD) kanülasyonu için 1 Fr (dış çap = 0.33 mm) poliüretan kanülün polipropilen UT - 03 (dış çap = 0.30 mm) kanülüne göre daha etkili olduğu bulunmuştur. Bu optimize protokolle, fare karaciğerleri histolojik yapı üzerinde önemli bir etki yaratmadan 12 saatlik bir süre boyunca başarıyla korunmuştur. Hematoksilin-Eozin (HE) boyaması, karaciğerin iyi korunmuş morfolojik mimarisini ortaya çıkardı, açıkça görülebilen çekirdeklere sahip ağırlıklı olarak canlı hepatositler ve hepatik sinüzoidlerin hafif genişlemesi ile karakterize edildi.

Cerrahi prosedürün oluşturulması Bu deney için toplam 17 hayvan kullanıldı: Portal ven (PV) ve safra kanalının (BD) kanülasyonu da dahil olmak üzere organ tedarik sürecini optimize etmek için 14 fare kullanılırken, prosedürü doğrulamak için 3 fare kullanıldı (Tablo 1). Histolojik sonuçlar (Şekil 3) optimal perfüzyon durumunun belirlenmesini kolaylaştırmak için karşılaştırıldı.
Perfüzyon...

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

Fare karaciğerleri için normotermik ex vivo karaciğer perfüzyonu (NEVLP) sistemi oluşturuldu. Bu sistem mikrocerrahide deneyim gerektirir ancak tekrarlanabilir perfüzyon sonuçlarına izin verir. Fare karaciğerlerini kullanma yeteneği, yeni perfüzyon katkı maddelerini tanımlamak için moleküler yolakların araştırılmasını kolaylaştırır ve organ onarımına odaklanan deneylerin yürütülmesini sağlar.

Normothermic Ex Vivo Karaciğer Makinesi Farede Perfüzyon

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

Normothermic Ex-Vivo Karaciğer Makinesi Farede Perfüzyon. Norannemik oksijenli karaciğer perfüzyonu, marjinal organları kurtarmak için umut verici bir stratejidir ve son zamanlarda klinik pratikte kullanılmaya başlanmıştır. Bununla birlikte, altta yatan moleküler mekanizmalar iyi anlaşılmamıştır.Transgenik fareler gibi genetiği değiştirilmiş hayvanlardan yararlanarak moleküler yolları daha fazla incelemek için bir fare modeline ihtiyaç vardır, bu nedenle fare karaciğerleri için normotermik oksijenli bir makine perfüzyon sistemi kurulmasını beklemektedir. İşte tüm sistemimizin bir şeması. İlk olarak, tüm sistem su sirkülasyonu yoluyla bir termostatik kontrolör tarafından 37 santigrat derecede kontrol edilir.Perfusat, rezervuardan peristaltik bir pompa ile bir oksijenatöre pompalanır. Oksijenatörde %95 oksijen ve %5 karbondioksit olmak üzere kesintisiz gaz akışı vardır. Perfüzyon daha sonra bir kabarcık tuzağından geçer.Hava kabarcıkları ile perfüzyon, basınç altında rezervuara geri pompalanır. Kalan perfüzyonat, tüpün portal vene bağlandığı organ odasına akar. Perfüzyonat karaciğerden suprahepatik kava yoluyla organ odasına boşaltılır.Organ odasından perfüzyonat çıkışı, peristaltik pompa tarafından rezervuara geri yönlendirilir. Safra toplamak için organ odasına bir safra drenaj tüpü bağlanır. Bu bizim ameliyat masamız.Tüm ameliyatlar mikroskop altında yapılır. Cerrahi prosedür boyunca yarı steril çalışma koşullarını koruyoruz. Fransız tüp kanülünü forseps ile tutun.Kanül duvarına 30G iğne ile kanülün ucundan bir santimetre mesafede nüfuz edin. İğnenin ucu görünür hale gelene kadar iğneyi kanülden itin. İşte 26G kateter ve kendi kendine yapılan kanülün bir karşılaştırma resmi; Her ikisi de fare portalı kanülasyonu için uygundur.Mililitre başına 2.500 uluslararası birimlik son konsantrasyonda 25 mililitre heparinize salin hazırlayın ve şırıngayı 40 derece santigrat dereceye ayarlanmış inkübatöre yerleştirin. İşte ex-vivo normotermik makine perfüzyon sisteminin ana bileşenleri. Bileşenler esas olarak organ odası, termostatik makine, makaralı pompa, oksijenatör ve rezervuarı içerir.Burada, organ odamızın ayrıntılı bir kurulumunu görebilirsiniz. Temel olarak, bir organ odası gövdesi, bir basınç sensörü, bir ısı eşanjörü ve bir kabarcık tuzağından oluşur. Bir perfüzyon girişi, bir perfüzyon çıkışı ve bir safra drenaj portu kurduk.Bu, portal ven basıncını izlemek için kullandığımız ADI izleme sistemidir. ADI sistemi bir basınç sensörü, merkezi bir kontrolör ve ekranlardan oluşur. Basınç izleme için LabChart programını açın.Basınç sensörünün her kullanımından önce kalibrasyon ve sıfırlama gereklidir. İki aşamalı kalibrasyon için basınç sensörünü kalibre etmek üzere sıfır milimetre cıva ve 20 milimetre cıva işaretlerini kullanın. Portal basıncının sürekli izlenmesine dayanarak, portal fluranını basınç değişikliklerine göre ayarlayabiliriz.Sistemi hazırlamak için rezervuara ve organ odasına eşit miktarda perfüzyonda, dolum işlemi sırasında steriliteyi korumak için özel dikkat gösterilmelidir. İndüksiyon odasını bir duvar prizine bağlayın. Oksijeni dakikada 0,5 litreye çevirin.İzofluranı% 3'e çevirinDerin anesteziye ulaşana kadar hayvanı odaya yerleştirin. Vücut ağırlığına uyarlanmış analjezi dozunu uygulamak için mikro şırınga kullanın. Burada, yedi mikrolitre buprenorfin.Şimdi ameliyat operasyonuna başlıyoruz. Farenin karın bölgesinde enine bir kesi yapın. Cilt insizyonu her iki taraftaki bilateral et aksiller hattına kadar uzanır.Linea alba boyunca dikkatlice uzunlamasına bir kesi yapın. Karın kası tabakasını elektrokoagülasyon ve makasla kesin. Karaciğeri elektrokoagülasyondan korumak için dikkatlice bir parça ıslak gazlı bez yerleştirin.Farenin karın boşluğunu tamamen açığa çıkarın. Hilumu tamamen açığa çıkarmak için ince bağırsağı ıslak bir pamuklu çubukla karın boşluğundan dikkatlice çıkarın. Burada portal ven kanülasyonu ve safra kanalı kanülasyonunun şematik bir diyagramı gösterilmiştir.Temel olarak farenin boyutuna göre uygun kanülü seçiyoruz ve kanülün sabitlenmesi için 6-0 ipek dikiş kullanıyoruz. Dişsiz ince kavisli forseps kullanarak ortak safra kanalını dikkatlice serbest bırakın. Ortak safra kanalı çok kolay hasar görür ve kırılır.Bir kez kırıldıktan sonra, kanüle edilemez. Anatomik pozisyonun yönü nedeniyle, kavisli forsepslerin kullanımı daha kolaydır. Bir sonraki adıma hazırlanmak için ortak safra kanalının üzerine iki adet 6-0 ipek sütür halkası yerleştirin.Safra kanalını 30G iğne ile dikkatlice delin. Küçük delikleri büyütmek için sivri kavisli forseps kullanın, böylece safra kanalı kanülasyonunu besleyebilir. Safra kanalı kanülü boyunca damar kanülasyon forsepsleri kullanın ve safra kanalına itin. Not.Kanülasyon anında, safranın getirdiği direnci hissedeceksiniz. Kuvvet iyi kontrol edilmezse, kanül safra çıkış basıncı ile safra yollarından dışarı itilecektir. Kanülün derinliğini dikkatlice ayarlayın.Çok derinse, safra kanalına zarar verebilir ve yeterince derin değilse, kayabilir. Başarılı kanülasyondan sonra kanülde safra akımı gözlenebilir. Portal veni düz forseps ile sıkıştırın ve bağ dokusunu kavisli forsepslerle dikkatlice serbest bırakın.Portal damarın yırtılmasına neden olmamak için buraya sert çekmeyin. Portal ven hasar gördüğünde, portal veni yeniden canlandırmak zordur. Serbest portal ven üzerine iki adet 6-0 ipek sütür Loop yerleştirin.Distal portal veni kapatmak için bir arteriyel klips kullanın. Portal veni yukarıdaki portal ven kanüllerinden biriyle çok dikkatli bir şekilde delin. Başarılı bir delinmeden sonra kanül içinde kan akışı açıkça gözlemlenebilir.İnkübatörden önceden ısıtılmış heparin salin çözeltisi alın. Tüm hava kabarcıklarını çıkarın. Şırıngayı önceden ısıtılmış heparinize salin ile şırınga pompasına sabitleyin.Şırınga pompasının uzatma tüpünü portal venin kanülüne bağlayın. Hızı dakikada iki mililitreye ayarlayın ve karaciğer kızarmasına başlayın. İzofluranı% 5'e yükseltin ve fareyi aşırı dozda izofluran inhalasyonu ile ötenazi yapın.Yıkama prosedürünün sonunda karaciğerin rengini gözlemleyin. Renk homojen bir sarıya döndüğünde karaciğeri tüketin. Bir Petri kabı kullanarak karaciğeri dikkatlice organ odasına aktarın.Bir karaciğerin ezilmesini önlemek için Petri kabında az miktarda salin bulundurun. Not. Portal ven ve safra kanalı bu işlem sırasında kolayca bükülebilir, bu da karaciğer perfüzyonunu ve safra toplanmasını etkileyebilir. Kanüldeki hava kabarcıklarını tahliye etmek için normal salini portal ven kanülüne bir şırınga ile yavaşça infüze edin.Portal ven kanülünü organ odasındaki perfüzyonat çıkış tüpüne bağlayın. Fare safra kanalı kanülü, lastik bir kapakla kapatılmış organ odasının bir valfinden geçirilir. Daha sonra, safra tüpü, kurşunda küçük bir delik bulunan önceden hazırlanmış 0.5 mililitrelik bir mikro tüpe yerleştirilir.Her şey bağlandıktan sonra, peristaltik pompayı açın. Akış hızını ayarlamak için portal ven basıncı okumasını kontrol edin. Akış hızını ayarlayarak portal ven basıncını yedi ila 10 milimetre cıva arasında tutun. Not.Nominal akış hızı, tüplerin yaşına ve konumlandırılmasına bağlı olarak biraz değişebilir. Bu, normotermik oksijenli sıçan karaciğer makinesi perfüzyon çalışmalarının literatür çalışmasına dayanan perfüzyon ortamı, perfüzyonat hacmi ve perfüzyon basıncının seçimidir. Bu, fare perfüzyon modelini oluşturmak için adım adım bir denemedir.En uygun kateterleri seçmek için yaklaşık 14 deney yapıldı. Ellerimizde, portal ven için iki Fransız kauçuk kateteri ve safra kanalı için bir Fransız kauçuk kateteri kullanmak, tüm kateterler yerinde homojen perfüzyon elde etmek için en iyi kombinasyondur. pH seviyesi ve potasyum seviyesi 12 saatlik perfüzyon boyunca stabildi.pH seviyesi 7.26 ila 7.71 arasında değişmekte ve potasyum seviyesi litre başına 5.9 ila 6.8 milimol arasında değişmektedir. HE boyaması, 12 saatlik perfüzyondan sonra, fare karaciğerinin histoloji bütünlüğünün nispeten iyi korunduğunu göstermektedir. Birlikte ele alındığında, burada fare karaciğeri için normotermik oksijenli bir makine perfüzyon sisteminin başarılı bir şekilde kurulduğunu gösterdik.Bir fare karaciğerinin 12 saat boyunca perfüzyonu, tüm organ boyunca olmasa da, karaciğer morfolojisinin iyi bir şekilde korunmasına neden olmuştur. Daha uzun bir süre boyunca tam homojen perfüzyon elde etmek için daha fazla çaba gerekmektedir. Bu başarıldığında, iltihaplanmanın rolünü araştırmak için IL-2-nakavt farelerin kullanılması gibi genetiği değiştirilmiş hayvanların kullanımı düşünülebilir.

Research

JoVE Journal

Engineering

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

High-resolution, High-speed, Three-dimensional Video Imaging with Digital Fringe Projection Techniques

Digital fringe projection (DFP) techniques provide dense 3D measurements of dynamically changing surfaces.&#160;Like the human eyes and brain, DFP uses ...

The Preparation of Electrohydrodynamic Bridges from Polar Dielectric Liquids

Polar Dielektrik Sıvılar gelen elektrohidrodinamik Köprülerin Hazırlanması

Horizontal and vertical liquid bridges are simple and powerful tools for exploring the interaction of high intensity electric fields (8-20 kV/cm) and ...

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

Fare Embriyonik From The Heart Epikardiyal Hücrelerinin Vitro Kültür

During embryogenesis, the epicardial contribution to coronary vasculature development has been very well established. Cells derived from the epicardium ...

Fabrication of Ultra-thin Color Films with Highly Absorbing Media Using Oblique Angle Deposition

Eğik açısı ifade kullanarak medya yüksek emici ile Ultra ince renk filmleri imalatı

Ultra-thin film structures have been studied extensively for use as optical coatings, but performance and fabrication challenges remain.&#160; We present ...

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

Ex Situ ve yapısal dönüşümleri in Situ soruşturma yöntemleri: Metalik gözlük kristalleşme olgusu

We demonstrate the use of two nuclear-based analytical methods that can follow the modifications of microstructural arrangement of iron-based metallic ...

Application of Design Aspects in Uniaxial Loading Machine Development

Uygulama tasarım yönlerini Uniaxial yükleme makinesi geliştirme

In terms of accurate and precise mechanical testing, machines run the continuum. Whereas commercial platforms offer excellent accuracy, they can be ...

In vitro Assessment of Aortic Regurgitation Using Four-Dimensional Flow Magnetic Resonance Imaging

In vitro Assessment of Aortic Regurgitation Using Four-Dimensional Flow Magnetic Resonance Imaging

İn vitro Aort Yetersizliğinin Dört Boyutlu Akış Manyetik Rezonans Görüntüleme Kullanılarak Değerlendirilmesi

Aortic regurgitation (AR) refers to backward blood flow from the aorta into the left ventricle (LV) during ventricular diastole. The regurgitant jet ...

Particle Image Velocimetry Investigation of Hemodynamics via Aortic Phantom

Particle Image Velocimetry Investigation of Hemodynamics via Aortic Phantom

Partikül İmajı Velosimetrisi Aort Fantomu ile Hemodinamiğin İncelenmesi

Aortic valve dysfunction and stroke have recently been reported in transcatheter aortic valve implantation (TAVI) patients. Thrombus in the aortic sinus ...

Synthesizing Nanoparticles and Nanostructures via Laser Ablation

Ultrafast Laser-Ablated Nanoparticles and Nanostructures for Surface-Enhanced Raman Scattering-Based Sensing Applications

Advancements and Applications in Nanoparticle Synthesis Through Laser Ablation in Liquids (Video) | JoVE

Yüzeyi Geliştirilmiş Raman Saçılımı Tabanlı Algılama Uygulamaları için Ultra Hızlı Lazerle Kesilmiş Nanopartiküller ve Nanoyapılar

The technique of ultrafast laser ablation in liquids has evolved and matured over the past decade, with several impending applications in various fields ...

Preparation of Free-Surface Hyperbolic Water Vortices

Serbest Yüzeyli Hiperbolik Su Girdaplarının Hazırlanması

Free surface vortices are present in industry in flow regulation, energy dissipation, and energy generation. Although investigated extensively, detailed ...