Name: Exploring Salidroside's Molecular Mechanisms in Breast Cancer Treatment (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-06-09T12:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring Salidroside's Molecular Mechanisms in Breast Cancer Treatment at JoVE.com

Bu çalışma Sichuan Eyaleti Sağlık Komisyonu (120025) tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışma için kullanılan MCF-7 hücreleri ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.
1. Hücre kültürü
<ol><li>MCF-7 hücrelerini, %10 FBS ve %1 penisilin (10.000 U/mL)/streptomisin (10.000 μg/mL) içeren DMEM ile 37 °C'de nemlendirilmiş% 5 CO 2 atmosferinde kültürleyin (Malzeme Tablosuna bakınız). NOT: Deneyin için çanağın tabanının %90'ını kaplayan hücreler kullanıldı ve aşağıdaki gruplara ayr?...

Salidroside's Mechanism in Suppressing MCF-7 Cell Migration and Proliferation

Meme kanseri her yaştan bireyi etkilemekte ve hesaplanamayan fiziksel ve zihinsel yüke ve büyük ekonomik baskıya neden olmaktadır1. Meme kanseri, her geçen yıl artan morbidite ve mortalitesi ile konvansiyonel tedavilerin ötesinde etkili bitkisel bazlı bileşik tedaviler arayışı açısından da dünya çapında ilgi görmektedir 4,5. Umut verici bir şekilde, çok sayıda kanıt Sal 24,25,38'in</sup...

En sık teşhis edilen kanserlerden ve en yaygın malignitelerden biri olan son istatistikler, 2020 yılına kadar dünya çapında 2,3 milyon meme kanseri vakasının ortaya çıktığını ve tüm kanser vakalarının %11,7'sini oluşturduğunu göstermektedir1. Meme kanserinin yaygın semptomları arasında memede hassasiyet ve karıncalanma, memede yumrular ve ağrı, meme başı akıntısı, erozyon veya çökük cilt ve genişlemiş koltuk altı lenf düğümleribulunur 1,2. Daha da endişe verici olanı, yeni vakaların sayısı ve genel meme kanseri insidansı her yıl ezici bir oranda artmaya devam ediyor ve kansere bağlı ölümlerin %6,9'unu oluşturuyor1. Şu anda, meme kanseri müdahalesi hala esas olarak kemoterapi, cerrahi, radyoterapi ve kapsamlı tedaviyi içermektedir. Tedavi, hastaların nüks oranını ve mortalite oranını etkili bir şekilde azaltabilse de, uzun süreli tedavi uygulaması sıklıkla çoklu ilaç direncine, geniş alan saç dökülmesine, bulantı ve kusmaya ve ciddi zihinsel ve psikolojik yüke neden olur 2,3. Özellikle, meme kanserinden kaynaklanan çoklu organ metastazı riski, insanları yeni bitkisel ilaç tedavisi kaynakları aramaya zorlamaktadır 4,5.
Fosfoinositid 3 kinaz (PI3K) aracılı sinyalleme, çoklu genlerin ekspresyonunu etkileyen ekleme yoluyla meme kanserinin büyümesi, çoğalması ve hayatta kalmasındarol oynar 6. PI3K'nın aşağı akış sinyal algılayıcı bir proteini olarak, çok sayıda kanıt, protein kinaz B'nin (AKT) meme kanserini daha da artırmak için memeli rapamisin (mTOR) proteini hedefi ile birleşebileceğini düşündürmektedir 7,8,9. Ayrıca, PI3K/AKT/mTOR sinyalinin devre dışı bırakılmasının, meme kanserinde malign proliferasyonu inhibe eden ve apoptozu uyaran ilaçlarda da önemli bir bileşen olduğu iddia edilmiştir10,11,12. Tümör mikroçevresindeki aşırı hipoksin, hipoksi ile indüklenebilir faktör 1 alfa'da (HIF-1α) büyük bir artışa neden olduğu ve bu da meme kanserinin ilerlemesini daha da kötüleştirdiğiiyi bilinmektedir 13,14,15. Buna paralel olarak, AKT stimülasyonu da aşırı HIF-1α birikimine yol açarak meme kanseri örneklerinde apoptozu sınırlar16,17. İlginç bir şekilde, PI3K-AKT-HIF-1α sinyalinin aktivasyonunun, akciğer kanseri18, kolorektal kanser19, yumurtalık kanseri 20 ve prostat kanseri21 dahil olmak üzere çeşitli kanserlerde patolojik ilerleme ve metastazda rol oynadığı doğrulanmıştır. HIF-1α tarafından düzenlenmesine ek olarak, çatallı kafa transkripsiyon faktörü 1 (FoxO1) aşırı ekspresyonu, meme kanseri hücrelerinde döngü durmasını ve apoptozun inhibisyonunu destekleyen AKT sinyal stimülasyonu tarafından da tetiklenir22,23. Birlikte, yukarıdaki sağlam kanıtlar, PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 sinyalinin kaskadının inhibisyonunun meme kanserinde ilaç tedavisi için potansiyel yeni bir hedef olabileceğini düşündürmektedir.
Salidrosidin (Sal) anti-kanser24,25, anti-hipoksi 26,27,28,29 ve bağışıklık arttırıcı farmakolojik aktiviteler30 uyguladığı yaygın olarak gösterilmiştir. Suda kolayca çözünebilen, bir tür feniletilanoid glikozit olan ve kimyasal yapı formülüC14H20O7ve moleküler ağırlığı 300.331,32 olan açık kahverengi veya kahverengi bir tozdur. Modern farmakolojik araştırmalar, Sal'ın PI3K-AKT-mTOR sinyalini24 kısıtlayarak mide kanseri hücrelerinin apoptozunu destekleyebileceğini göstermiştir. Daha fazla kanıt ayrıca, PI3K-AKT-HIF-1α sinyalinin Sal tedavisi ile baskılanmasının, kemoterapötik ajanlara duyarlılıklarını artırarak kanser hücrelerinin apoptozuna katkıda bulunabileceğini düşündürmektedir25. Kanıtlar ayrıca Sal'ın hücre göçünü ve istilasını kısıtladığını ve insan meme kanseri MCF-7 hücrelerinde apoptozu teşvik ederek döngü durmasına neden olduğunu göstermektedir33,34. Bununla birlikte, Sal'ın PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 sinyalini düzenleyip düzenleyemeyeceği ve MCF-7 hücrelerinin malign proliferasyonunu inhibe edip edemeyeceği henüz belli değil. Bu nedenle, bu protokol, Sal'ın PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 yolu yoluyla MCF-7 hücre göçü, invazyonu, hücre döngüsü ve apoptoz üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçladı. Hücre göçü ve invazyon değerlendirmeleri, akış sitometrisi ile apoptoz ve hücre döngüsü tespiti, reaktif oksijen türleri (ROS) ve Ca2 + floresan tayini gibi geleneksel, düşük maliyetli ve bağımsız deneyleri içeren entegre araştırma stratejileri, geleneksel bitkisel ilaçlarla anti-kanser araştırmaları için deneylerin genel tasarımı için bir referans sağlayabilir. Bu çalışmanın deneysel süreci Şekil 1'de gösterilmiştir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% penicillin/streptomycin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKT antibody</td>
			<td>ImmunoWay Biotechnology Company</td>
			<td>YT0185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V-FITC/PI kit</td>
			<td>MultiSciences Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>AP101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic microplate reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax iD5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bax antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td>#5023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA kit</td>
			<td>Biosharp Life Sciences</td>
			<td>BL521A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bcl-2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td>#15071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bim antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td>#2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca2+&#8211;ATPase assay kit</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>A070-4-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting kit-8</td>
			<td>Biosharp Life Sciences</td>
			<td>BS350B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell cycle staining kit</td>
			<td>MultiSciences Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>CCS012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cleaved caspase-3</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td>#9661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cleaved caspase-7</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td>#8438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cleaved caspase-9</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td>#20750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet solution</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C0121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high glucose culture medium</td>
			<td>Servicebio Technology Co., Ltd.</td>
			<td>G4510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin hydrochloride</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-15142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL chemiluminescent solution</td>
			<td>Biosharp Life Sciences</td>
			<td>BL520B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Procell Life Science &#38; Technology Co., Ltd.</td>
			<td>164210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65634/65634eq01.jpg" style="margin: auto;" /></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4 AM</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>S1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FoxO1 antibody</td>
			<td>ImmunoWay Biotechnology Company</td>
			<td>YT1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG secondary antibody</td>
			<td>MultiSciences Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>70-GAR0072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism software</td>
			<td>La Jolla</td>
			<td>Version 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIF-1&#945; antibody</td>
			<td>Affinity Biosciences</td>
			<td>BF8002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human breast cancer cell line MCF-7</td>
			<td>Procell Life Science &#38; Technology Co., Ltd.</td>
			<td>CL-0149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading buffer</td>
			<td>Biosharp Life Sciences</td>
			<td>BL502B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LY294002</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-10108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Thermo&#160;</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTOR antibody</td>
			<td>Servicebio Technology Co., Ltd.</td>
			<td>GB11405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na+&#8211;K+&#8211;ATPase assay kit</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>A070-2-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71PH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-AKT antibody</td>
			<td>ImmunoWay Biotechnology Company</td>
			<td>YP0006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI3K antibody</td>
			<td>Servicebio Technology Co., Ltd.</td>
			<td>GB11525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-PI3K antibody</td>
			<td>Affinity Biosciences</td>
			<td>AF3241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantitative western blot imaging system</td>
			<td>Touch Image Pro</td>
			<td>eBlot</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse transcription first strand cDNA synthesis kit</td>
			<td>Servicebio Technology Co., Ltd.</td>
			<td>G3330-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROS assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>S0033S</td>
			<td>DCFH-DA fluorescence probe is included here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salidroside</td>
			<td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd.</td>
			<td>H-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE kit</td>
			<td>Servicebio Technology Co., Ltd.</td>
			<td>G2003-50T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total RNA isolation kit</td>
			<td>Foregene</td>
			<td>RE-03014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Affinity Biosciences</td>
			<td>AF7018</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exploring the pharmacological action and molecular mechanism of salidroside in inhibiting mcf-7 cell proliferation and migration

Salidrosid (Sal), anti-kanserojen, anti-hipoksik ve anti-inflamatuar farmakolojik aktiviteler içerir. Bununla birlikte, altta yatan anti-meme kanseri mekanizmaları tam olarak aydınlatılamamıştır. Bu nedenle, bu protokol, insan meme kanseri MCF-7 hücrelerinin malign proliferasyonunda PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 yolunu düzenlemede Sal'ın potansiyelini çözmeyi amaçladı. İlk olarak, Sal'ın MCF-7'ye karşı farmakolojik aktivitesi CCK-8 ve hücre çizik testleri ile değerlendirildi. Ayrıca, MCF-7 hücrelerinin direnci migrasyon ve Matrigel invazyon testleri ile ölçüldü. Hücre apoptozu ve siklus tahlilleri için, MCF-7 hücreleri, akış sitometrisi analizleri için sırasıyla annexin V-FITC/PI ve hücre döngüsü boyama tespit kitleri ile adım adım işlendi. Reaktif oksijen türleri (ROS) ve Ca2+ düzeyleri DCFH-DA ve Fluo-4 immünofloresan boyama ile incelendi. Na+-K+-ATPaz veCa2+-ATPaz aktiviteleri, ilgili ticari kitler kullanılarak belirlendi. Apoptozdaki protein ve gen ekspresyon seviyeleri ve PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 yolağı sırasıyla western blot ve qRT-PCR analizleri kullanılarak belirlendi. Sal tedavisinin, doza bağlı etkilerle MCF-7 hücrelerinin çoğalmasını, göçünü ve invazyonunu önemli ölçüde kısıtladığını bulduk. Bu arada, Sal uygulaması ayrıca MCF-7 hücrelerini apoptoz ve hücre döngüsü durmasına maruz kalmaya zorladı. İmmünofloresan testleri, Sal'ın MCF-7 hücrelerinde ROS ve Ca2+ üretimini gözle görülür şekilde uyardığını gösterdi. Diğer veriler, Sal'ın pro-apoptotik proteinlerin, Bax, Bim, bölünmüş kaspaz-9/7/3 ve bunlara karşılık gelen genlerin ekspresyon seviyelerini desteklediğini doğruladı. Tutarlı bir şekilde, Sal müdahalesi Bcl-2, p-PI3K / PI3K, p-AKT / AKT, mTOR, HIF-1α ve FoxO1 proteinlerinin ve bunlara karşılık gelen genlerin ekspresyonunu belirgin şekilde azalttı. Sonuç olarak, Sal, PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 yolunu inhibe ederek MCF-7 hücrelerinin malign proliferasyonunu, göçünü ve istilasını azaltabileceğinden, meme kanserini tedavi etmek için potansiyel bir bitki türevi bileşik olarak kullanılabilir.

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

Sal'ın MCF-7 hücrelerinde aşırı proliferasyonu inhibe etme ve yara iyileşmesini geciktirme üzerindeki etkileri Sal'ın meme kanserine karşı potansiyelini araştırmak için, ilk önce insan meme kanseri MCF-7 hücre hattının hücre proliferasyon toksisitesi ve çizik testlerini kullanarak antikanser özelliklerini test ettik. Bu hücreler, 24 saat boyunca bir Sal konsantrasyon serisi (5-320 μM) ile birlikte inkübe edildi ve hücre proliferasyonu bir CCK-8 testi kullanılarak değerlendiri...

Watch this Scientific Journal Video about Exploring Salidroside's Molecular Mechanisms in Breast Cancer Treatment at JoVE.com

Exploring Salidroside's Molecular Mechanisms in Breast Cancer Treatment (Video) | JoVE

Mevcut protokol, MCF-7 hücre proliferasyonunu ve göçünü inhibe etmede salidrosidin farmakolojik etkisini ve mekanizmasını değerlendirmek için kapsamlı bir stratejiyi tanımlamaktadır.

MCF-7 Hücre Proliferasyonunu ve Migrasyonunu İnhibe Etmede Salidrosidin Farmakolojik Etkisinin ve Moleküler Mekanizmasının Araştırılması

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...

Doğal ürünlerden elde edilen aktif bileşikleri ve bunların meme kanseri tedavisindeki potansiyellerini keşfetmeye odaklanıyoruz. Bu nedenle spesifik olarak meme kanserinin kombinesinde salidrosidin farmakolojik etkilerini ve moleküler mekanizmalarını aydınlatmayı amaçlıyoruz. Şu anda, meme kanseri tedavisinde salidrositin moleküler hedeflerini doğrulamak için güvenilir deneysel teknikler eksiktir.Alandaki önemli bir bulgu, PI3K / AKT / HIF-1 alfa / FoxO1 sinyalinin düzenlenmesi yoluyla MCF7 hücrelerinin proliferasyonunu ve göçünü arttırmada salidrositin potansiyel bir moleküler mekanizmasıdır. Laboratuvarın gelecekteki araştırmaları doğrudan meme kanseri başlangıcının, gelişiminin, prognozunun ve sonucunun altında yatan patofizyolojik mekanizmaları araştırmaktır. Ek olarak, meme kanserinin önlenmesi ve tedavisine katkıda bulunabilecek doğal kaynaklardan elde edilen aktif küçük moleküler ilaçları tarıyoruz.

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluating the Migration and Invasion of Salidroside Treated MCF-7 Cells in a Wound Scratch Assay

Evaluating the Migration and Invasion of Salidroside Treated MCF-7 Cells in a Wound Scratch Assay (Video) | JoVE 

Salidrosid ile Tedavi Edilmiş MCF-7 Hücrelerinin Bir Yara Çizik Testinde Migrasyon ve İnvazyonunun Değerlendirilmesi

Determining Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase Activity in Salidroside Treated MCF-7 Cells

Salidrosid ile Tedavi Edilen MCF-7 Hücrelerinde Na+-K+-ATPaz ve Ca 2+-Mg2+-ATPaz Aktivitesinin Belirlenmesi