Name: Author Spotlight: Intrathecal Injection &#8211; An Efficient and Reliable Delivery Method to Test the Efficacy of Gene Editing in Neonatal Mouse Brains
Uploaded: 2024-03-08T13:00:00
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एक्सएनएल फाउंडेशन फॉर एंजेलमैन सिंड्रोम चिकित्सीय (फास्ट) पोस्टडॉक्टोरल फैलोशिप द्वारा समर्थित है। YHJ FAST और NIH ग्रांट R01HD110195 और R01MH117289 द्वारा भी समर्थित है।

वर्णित प्रक्रियाएं और प्रोटोकॉल प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान गाइड में उल्लिखित दिशानिर्देशों के अनुपालन में थे। इसके अतिरिक्त, प्रक्रियाओं को येल यूनि?...

A Comprehensive Protocol for Delivering Intrathecal Injections in Neonatal Mice

<ol>
	<li>Hoy, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onasemnogene+abeparvovec:+first+global+approval.">Onasemnogene abeparvovec: first global approval.</a> Drugs. 79 (11), 1255-1262 (2019).</li><li>Ramos, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+SMN+expression+in+disease-relevant+tissue+and+implications+for+SMA+treatment.">Age-dependent SMN expression in disease-relevant tissue and implications for SMA treatment.</a> J Clin Invest. 129 (11), 4817-4831 (2019).</li><li>Fedorova, E., Battini, L., Prakash-Cheng, A., Marras, D., Gusella, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+gene+delivery+to+CNS+by+spinal+intrathecal+administration+to+neonatal+mice.">Lentiviral gene delivery to CNS by spinal intrathecal administration to neonatal mice.</a> J Gene Med. 8 (4), 414-424 (2006).</li><li>Dindot, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ASO+therapy+for+Angelman+syndrome+that+targets+an+evolutionarily+conserved+region+at+the+start+of+the+UBE3A-AS+transcript.">An ASO therapy for Angelman syndrome that targets an evolutionarily conserved region at the start of the UBE3A-AS transcript.</a> Sci Transl Med. 15, eabf4077 (2023).</li><li>Amanat, M., Nemeth, C. L., Fine, A. S., Leung, D. 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R., Mauri, I., Columbo, A., Stocchetti, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+temperature,+body+core+temperature,+and+intracranial+pressure+in+acute+cerebral+damage.">Brain temperature, body core temperature, and intracranial pressure in acute cerebral damage.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 71 (4), 448-454 (2001).</li><li>Kim, J. Y., Grunke, S. D., Levites, Y., Golde, T. E., Jankowsky, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebroventricular+viral+injection+of+the+neonatal+mouse+brain+for+persistent+and+widespread+neuronal+transduction.">Intracerebroventricular viral injection of the neonatal mouse brain for persistent and widespread neuronal transduction.</a> J Vis Exp. 91, e51863 (2014).</li><li>Petrou, P., Kassis, I., Yaghmour, N. E., Ginzberg, A., Karussis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+II+clinical+trial+with+repeated+intrathecal+injections+of+autologous+mesenchymal+stem+cells+in+patients+with+amyotrophic+lateral+sclerosis.">A phase II clinical trial with repeated intrathecal injections of autologous mesenchymal stem cells in patients with amyotrophic lateral sclerosis.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 26 (10), 693-706 (2021).</li><li>Kroin, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanisms+of+intracranial+pressure+modulation+by+epidural+blood+and+other+injectates+in+a+postdural+puncture+rat+model.">The mechanisms of intracranial pressure modulation by epidural blood and other injectates in a postdural puncture rat model.</a> Anesth Analg. 95 (2), 423-429 (2002).</li><li>M&#248;llg&#229;rd, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mesothelium+divides+the+subarachnoid+space+into+functional+compartments.">A mesothelium divides the subarachnoid space into functional compartments.</a> Science. 379 (6627), 84-88 (2023).</li><li>Chakrabarty, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsid+serotype+and+timing+of+injection+determines+AAV+transduction+in+the+neonatal+mice+brain.">Capsid serotype and timing of injection determines AAV transduction in the neonatal mice brain.</a> PLoS One. 8, e67680 (2013).</li><li>Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+development+in+rodents+and+humans:+Identifying+benchmarks+of+maturation+and+vulnerability+to+injury+across+species.">Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species.</a> Prog Neurobiol. 160-107, 1-16 (2013).</li></ol>

वर्णित नवजात चूहों (पी 1) में इंट्राथेकल इंजेक्शन के लिए एक कदम-दर-चरण प्रक्रिया है, जिसके परिणामस्वरूप उनके दिमाग में व्यापक दवा वितरण होता है। नवजात चूहों को दवा देने के लिए आम इंट्रासेरेब्रोवेंट्रि?...

Intrathecal (आईटी) इंजेक्शन दवाओं प्रशासन के लिए प्रयोग किया जाता है एक आम नैदानिक प्रक्रिया है, मस्तिष्कमेरु द्रव इकट्ठा, और क्लीनिक 1,2 में बाल चिकित्सा और वयस्क रोगियों दोनों में intracranial दबाव बनाए रखने. इंट्राथेकल इंजेक्शन के माध्यम से दवाओं का प्रशासन प्रणालीगत जोखिम को कम करते हुए केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में दवा सांद्रता बढ़ाने के लिए एक प्रभावी दृष्टिकोण है। नतीजतन, इस विधि चिकित्सीय प्रभावकारिता को बढ़ाता है और साइड इफेक्ट कम कर देता है, विशेष रूप से तापमान के प्रति संवेदनशील और कम आधा जीवन दवाओंके लिए 3.
कृंतक मॉडल का उपयोग कर नई दवाओं और उपचार का परीक्षण preclinical अध्ययन में, यह अधिक से अधिक परिशुद्धता और परिणाम प्रजनन क्षमता 4,5प्रदान करता है कि दवा प्रशासन का एक विश्वसनीय तरीका नियोजित करने के लिए जरूरी है. न्यूरोजेनेटिक और न्यूरोडेवलपमेंटल विकारों के लिए नए उपचारों का मूल्यांकन करने वाले प्रीक्लिनिकल अध्ययनों के लिए, प्रारंभिक उपचार प्रारंभिक प्रमाण-अवधारणा अध्ययनों के लिए महत्वपूर्ण है क्योंकि पहले के हस्तक्षेपों को आमतौर पर अधिक अनुकूल परिणाम 6,7,8प्राप्त करने की भविष्यवाणी की जाती है।
पारंपरिक इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर (आईसीवी) इंजेक्शन की तुलना में, आईटी इंजेक्शन काफी कम जोखिम उठाते हैं क्योंकि वे सेरेब्रल कॉर्टेक्स के माध्यम से सीधे प्रवेश की आवश्यकता को कम करते हैं। यह लाभ क्षेत्रीय कॉर्टिकल ऊतक और आसपास की नसों को संभावित नुकसान को काफी हद तक कम कर देता है। इसके अलावा, आईटी इंजेक्शन एक इंजेक्शन के माध्यम से दवाओं की प्रशासनिक मात्रा में कम से कम पांच गुना वृद्धि की अनुमति देते हैं, जिससे बार-बार प्रशासन की व्यवहार्यता बढ़ जाती है। हालांकि, नवजात चूहों के छोटे आकार और नाजुक प्रकृति के कारण, नवजात पिल्लों में इंट्राथेकल इंजेक्शन करना तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है और इसके लिए विशेष तकनीकों, उपकरणों और सावधानीपूर्वक हैंडलिंग की आवश्यकता होती है।
यह आलेख P1 नवजात पिल्ले में intrathecal इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए कदम दर कदम निर्देश के साथ एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है. प्रक्रिया के दौरान प्रशासन की स्थिरता और जानवरों की सुरक्षा और कल्याण सुनिश्चित करने के लिए यहां महत्वपूर्ण विचारों और अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं पर जोर दिया गया है। इस प्रोटोकॉल का पालन करके, शोधकर्ताओं आत्मविश्वास से सटीक और प्रजनन क्षमता के साथ प्रयोगों का संचालन करते हुए जानवरों के लिए किसी भी संभावित जोखिम या असुविधा को कम कर सकते हैं.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>Ohaus Corporation</td>
			<td>30253017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Microscope</td>
			<td>RWD</td>
			<td>DOM-1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>RWD</td>
			<td>69020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>6PK (34/0.375&#8221;/4/12DEG)S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1702RN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Filters</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SLGVM33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrathecal injection of newborn mouse for genome editing and drug delivery

इंट्राथेकल इंजेक्शन बाल चिकित्सा और वयस्क क्लीनिक दोनों में आमतौर पर नियोजित प्रक्रिया है, जो दवाओं और उपचारों को प्रशासित करने के लिए एक प्रभावी साधन के रूप में कार्य करता है। केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के मस्तिष्कमेरु द्रव में सीधे दवाओं और उपचारों को वितरित करके, यह विधि अन्य मार्गों जैसे अंतःशिरा, चमड़े के नीचे या इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन की तुलना में प्रणालीगत दुष्प्रभावों को कम करते हुए उच्च स्थानीयकृत दवा सांद्रता प्राप्त करती है। इसका महत्व नैदानिक सेटिंग्स से परे फैली हुई है, क्योंकि इंट्राथेकल इंजेक्शन गैर-मानव प्राइमेट्स सहित कृन्तकों और अन्य बड़े जानवरों में न्यूरोजेनेटिक विकारों के इलाज पर केंद्रित प्रीक्लिनिकल अध्ययनों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हालांकि, इसके व्यापक अनुप्रयोग के बावजूद, युवा, विशेष रूप से नवजात पिल्ले में इंट्राथेकल इंजेक्शन, उनके छोटे आकार और नाजुक प्रकृति के कारण महत्वपूर्ण तकनीकी चुनौतियां पैदा करता है। नवजात चूहों में intrathecal इंजेक्शन के सफल और विश्वसनीय प्रशासन विस्तार और विभिन्न कारकों की सावधान विचार करने के लिए सावधानीपूर्वक ध्यान देने की आवश्यकता है. इस प्रकार, वहाँ एक मानकीकृत प्रोटोकॉल है कि न केवल निर्देश प्रदान करता है, लेकिन यह भी प्रक्रियात्मक स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण तकनीकी विचारों और अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं पर प्रकाश डाला गया के लिए एक महत्वपूर्ण आवश्यकता है, साथ ही सुरक्षा और पशुओं के कल्याण.
इस अपूर्ण आवश्यकता को पूरा करने के लिए, हम विशेष रूप से प्रसवोत्तर दिन 1 (पी 1) पर नवजात पिल्ले में इंट्राथेकल इंजेक्शन करने के लिए एक विस्तृत और व्यापक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। चरण-दर-चरण निर्देशों का पालन करके, शोधकर्ता आत्मविश्वास से नवजात पिल्लों में इंट्राथेकल इंजेक्शन कर सकते हैं, जिससे जीन प्रतिस्थापन या जीनोम संपादन-आधारित उपचार के लिए दवाओं, एंटीसेंस ओलिगोस और वायरस की सटीक डिलीवरी सक्षम हो सकती है। इसके अलावा, जानवरों की भलाई को बनाए रखने और विश्वसनीय प्रयोगात्मक परिणामों को सुनिश्चित करने के लिए अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं का पालन करने के महत्व पर जोर दिया जाता है। इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य नवजात चूहों में इंट्राथेकल इंजेक्शन से जुड़ी तकनीकी चुनौतियों का समाधान करना है, अंततः न्यूरोजेनेटिक अनुसंधान के क्षेत्र में प्रगति की सुविधा प्रदान करना है जिसका उद्देश्य संभावित चिकित्सीय हस्तक्षेप विकसित करना है।

Intrathecal Injection of Newborn Mouse for Genome Editing and Drug Delivery

सफल इंट्राथेकल इंजेक्शन के परिणामस्वरूप तुरंत प्रशासित समाधान का व्यापक वितरण हुआ, हालांकि वास्तविक सेलुलर पैठ वितरित दवाओं और सामग्रियों की प्रकृति पर निर्भर करती थी। इस अध्ययन में, हमने जंगली प्र?...

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Author Spotlight: Intrathecal Injection &#8211; An Efficient and Reliable Delivery Method to Test the Efficacy of Gene Editing in Neonatal Mouse Brains

वर्तमान प्रोटोकॉल जीन संपादन और दवा वितरण के लिए नवजात चूहों में intrathecal इंजेक्शन प्रदर्शन के लिए कदम दर कदम निर्देश रूपरेखा.

जीनोम संपादन और दवा वितरण के लिए नवजात माउस का इंट्राथेकल इंजेक्शन

Intrathecal injection is a commonly employed procedure in both pediatric and adult clinics, serving as an effective means to administer medications and ...

हमारा समूह एक अंतःविषय दृष्टिकोण को नियोजित करता है जिसमें आनुवंशिकी और न्यूरोडेवलपमेंटल डिसऑर्डर के एपिजेनेटिक आधार का अध्ययन करने के लिए जीनोमिक खोज और कार्यात्मक मॉडलिंग शामिल है। हम आणविक, neurophysiological, और neurobehavioral विश्लेषण रोगी प्रेरित pluripotent स्टेम सेल का उपयोग कर, या IPSC, उत्परिवर्ती चूहों में neurodevelopmental विकार के pathophysiology विदारक करने के लिए. हमारा लक्ष्य इस बीमारी के लिए जीन-एडिटिंग-आधारित उपचार विकसित करना है।इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर, जिसे आईसीवी भी कहा जाता है, इंजेक्शन नवजात चूहों के केंद्रीय तंत्रिका तंत्र को सीधे उपचार देने का एकमात्र तरीका है। हालांकि, इसे सेरेब्रल कॉर्टेक्स के माध्यम से घुसना पड़ता है। इंट्राथेकल, आईटी, इंजेक्शन क्लीनिक में आमतौर पर नियोजित प्रक्रिया है, जो सीधे केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में उपचार को प्रशासित करने के लिए एक प्रभावी साधन के रूप में कार्य करता है।हालांकि, नवजात पिल्ले में इंट्राथेकल इंजेक्शन उनके छोटे आकार और नाजुक प्रकृति के कारण महत्वपूर्ण तकनीकी चुनौतियां पैदा कर सकता है। हम माउस मस्तिष्क में प्रभावकारिता और जीन संपादन का परीक्षण करने के लिए एक कुशल और विश्वसनीय वितरण विधि विकसित करने की कोशिश कर रहे हैं जो गैर-वायरल और गैर-नैनोपार्टिकल है। पारंपरिक आईसीवी इंजेक्शन की तुलना में, इंट्राथेकल इंजेक्शन काफी कम जोखिम प्रस्तुत करता है, क्योंकि यह सेरेब्रल कॉर्टेक्स के माध्यम से सीधे प्रवेश की आवश्यकता से बचता है।यह क्षेत्रीय कॉर्टिकल ऊतक और आसपास की नसों को संभावित नुकसान को कम करने के लिए लाभ जोड़ता है। इंट्राथेकल इंजेक्शन भी एक इंजेक्शन के माध्यम से दवाओं की प्रशासनिक मात्रा में कम से कम पांच गुना वृद्धि को सक्षम करते हैं और बार-बार प्रशासन की व्यवहार्यता को बढ़ाते हैं।