Name: Insights into the Techniques and Findings of Recent Advancements in Epilepsy Research (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Insights into the Techniques and Findings of Recent Advancements in Epilepsy Research at JoVE.com

Ces travaux ont été soutenus par la Fondation de recherche fondamentale et appliquée du Guangdong (subvention n° 2022A1515111123 à Jing-Da Qiao) et prévoient de renforcer la recherche scientifique en GMU (Jing-Da Qiao). Ce travail a également été soutenu par le plan d’amélioration de la capacité d’innovation des étudiants de l’Université de médecine de Guangzhou (financement n° 02-408-2304-02038XM).

1. Protocole pour l’essai sensible à la bang
<ol><li>Établir les mouches expérimentales en croisant la lignée de conducteur tub-Gal4 avec la lignée UAS-cac-RNAi via le système Gal4/UAS21. Collecter les mouches vierges de la lignée tub-Gal4 et les mouches mâles de la lignée UAS-cac-RNAi . Ensuite, transférez les mouches vierges et mâles dans le même flacon pour récolter la progéniture. REMARQUE : La ligne de pilote tub-G...

Monitoring Epileptiform Events in Drosophila via Calcium Imaging

<ol>
	<li>Thijs, R. D., Surges, R., O'brien, T. J., Sander, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy+in+adults.">Epilepsy in adults.</a> Lancet. 393 (10172), 689-701 (2019).</li><li>Ellis, C. A., Petrovski, S., Berkovic, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy+genetics:+Clinical+impacts+and+biological+insights.">Epilepsy genetics: Clinical impacts and biological insights.</a> Lancet Neurol. 19 (1), 93-100 (2020).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy-associated+genes.">Epilepsy-associated genes.</a> Seizure. 44, 11-20 (2017).</li><li>Oliver, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes4epilepsy:+An+epilepsy+gene+resource.">Genes4epilepsy: An epilepsy gene resource.</a> Epilepsia. 64 (5), 1368-1375 (2023).</li><li>Rogawski, M. A., Loscher, W., Rho, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+action+of+antiseizure+drugs+and+the+ketogenic+diet.">Mechanisms of action of antiseizure drugs and the ketogenic diet.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 6 (5), 022780 (2016).</li><li>Ademuwagun, I. A., Rotimi, S. O., Syrbe, S., Ajamma, Y. 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M., Louvel, J., Rausche, G., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+pentetrazol+on+neuronal+activity+and+on+extracellular+calcium+concentration+in+rat+hippocampal+slices.">Effects of pentetrazol on neuronal activity and on extracellular calcium concentration in rat hippocampal slices.</a> Epilepsy Res. 6 (3), 187-198 (1990).</li><li>Yang, W., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+neural+activity.">In vivo imaging of neural activity.</a> Nat Methods. 14 (4), 349-359 (2017).</li><li>Hewapathirane, D. 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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spread+of+dendritic+excitation+in+layer+2/3+pyramidal+neurons+in+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Spread of dendritic excitation in layer 2/3 pyramidal neurons in rat barrel cortex in vivo.</a> Nat Neurosci. 2 (1), 65-73 (1999).</li><li>Rochefort, N. L., Jia, H., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+imaging+in+the+living+brain:+Prospects+for+molecular+medicine.">Calcium imaging in the living brain: Prospects for molecular medicine.</a> Trends Mol Med. 14 (9), 389-399 (2008).</li><li>Russell, J. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indirect+suppression+involving+behavioral+mutants+with+altered+nerve+excitability+in+drosophila+melanogaster.">Indirect suppression involving behavioral mutants with altered nerve excitability in drosophila melanogaster.</a> Genetics. 100 (4), 597-614 (1982).</li><li>Roemmich, A. J., Schutte, S. S., O'dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+whole-cell+recordings+in+adult+drosophila+brain.">Ex vivo whole-cell recordings in adult drosophila brain.</a> Bio Protoc. 8 (14), 2467 (2018).</li><li>Gu, H., O'dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+cell+recordings+from+brain+of+adult+drosophila.">Whole cell recordings from brain of adult drosophila.</a> J Vis Exp. (6), 248 (2007).</li><li>Qiao, J., Yang, S., Geng, H., Yung, W. H., Ke, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-timing-dependent+plasticity+at+incoming+synapses+of+the+mushroom+body+facilitates+olfactory+learning+in+drosophila.">Input-timing-dependent plasticity at incoming synapses of the mushroom body facilitates olfactory learning in drosophila.</a> Curr Biol. 32 (22), 4869-4880 (2022).</li><li>Liu, C. -. Q., Lin, Y. -. M., Zhang, X. -. X., Peng, R. -. C., Qiao, J. -. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+CACNA1A+deficiency+against+seizure+in+the+CACNA1A-CELSR2+digenic+knockdown+flies.">Protective effect of CACNA1A deficiency against seizure in the CACNA1A-CELSR2 digenic knockdown flies.</a> Research Square. , (2023).</li><li>Uchitel, O. D., Inchauspe, C. G., Urbano, F. J. D. i., Guilmi, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2.1+voltage+activated+calcium+channels+and+synaptic+transmission+in+familial+hemiplegic+migraine+pathogenesis.">Cav2.1 voltage activated calcium channels and synaptic transmission in familial hemiplegic migraine pathogenesis.</a> J Physiol Paris. 106 (1-2), 12-22 (2012).</li><li>Le Roux, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cacna1a-associated+epilepsy:+Electroclinical+findings+and+treatment+response+on+seizures+in+18+patients.">Cacna1a-associated epilepsy: Electroclinical findings and treatment response on seizures in 18 patients.</a> Eur J Paediatr Neurol. 33, 75-85 (2021).</li><li>Alehabib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+molecular+spectrum+of+p/q+type+calcium+channel+cav2.1+in+epileptic+patients.">Clinical and molecular spectrum of p/q type calcium channel cav2.1 in epileptic patients.</a> Orphanet J Rare Dis. 16 (1), 461 (2021).</li><li>Li, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cacna1a+mutations+associated+with+epilepsies+and+their+molecular+sub-regional+implications.">Cacna1a mutations associated with epilepsies and their molecular sub-regional implications.</a> Front Mol Neurosci. 15, 860662 (2022).</li><li>Indelicato, E., Boesch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+genotype+to+phenotype:+Expanding+the+clinical+spectrum+of+cacna1a+variants+in+the+era+of+next+generation+sequencing.">From genotype to phenotype: Expanding the clinical spectrum of cacna1a variants in the era of next generation sequencing.</a> Front Neurol. 12, 639994 (2021).</li><li>Saras, A., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+the+calcium+channel+gene+cacophony+suppress+seizures+in+drosophila.">Mutations of the calcium channel gene cacophony suppress seizures in drosophila.</a> Plos Genetics. 12 (1), e1005784 (2016).</li><li>Cozzolino, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+epileptiform+activity+in+zebrafish+by+statistical-based+integration+of+electrophysiology+and+2-photon+ca2++imaging.">Evolution of epileptiform activity in zebrafish by statistical-based integration of electrophysiology and 2-photon ca2+ imaging.</a> Cells. 9 (3), 769 (2020).</li><li>Mituzaite, J., Petersen, R., Claridge-Chang, A., Baines, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+seizure+induction+methods+in+drosophila.">Characterization of seizure induction methods in drosophila.</a> eNeuro. 8 (4), (2021).</li><li>Miller, D. E., Cook, K. R., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+joy+of+balancers.">The joy of balancers.</a> Plos Genetics. 15 (11), e1008421 (2019).</li></ol>

L’ion calcium sert de deuxième messager crucial, jouant un rôle central dans une gamme de réponses physiologiques et physiopathologiques aux perturbations chimiques et électriques. De plus, l’élément topologique des canaux P/Q présynaptiques, codé par le gène CACNA1A humain, a été identifié comme responsable de la médiation de la décharge de divers neurotransmetteurs, dont le glutamate 30,31,32, et est étroitement lié à l’épilepsie</sup...

L’épilepsie, un trouble neurologique chronique complexe caractérisé par la récurrence de crises spontanées et non provoquées et une activité aberrante des réseaux neuronaux, a touché plus de 70 millions de personnes dans le monde, ce qui en fait l’unedes maladies neurologiques les plus courantes 1 et entraîne le lourd fardeau des familles et de la société. Compte tenu de l’impact de l’épilepsie, de nombreuses études ont été menées pour identifier l’étiologie des crises, dont la génétique a été approuvée comme cause principale de nombreux types d’épilepsies ou de syndromes épileptiques2. Au cours des dernières décennies, les progrès des technologies génomiques ont conduit à une augmentation rapide de la découverte de nouveaux gènes associés à l’épilepsie, qui jouent un rôle crucial dans l’apparition des crises, y compris les canaux ioniques et les gènes des canaux non ioniques 3,4. Cependant, les mécanismes sous-jacents et l’analyse fonctionnelle entre les gènes et les phénotypes épileptiques ne sont pas complètement compris. L’identification des gènes et des mécanismes associés à l’épilepsie offre la possibilité d’une prise en charge efficace des patients 5,6.
Les signaux calciques cytosoliques sont des éléments essentiels de l’activité neuronale et de la transmission synaptique. L’imagerie calcique, y compris les tranches de cerveau7, in vivo 8,9 et ex vivo10, est utilisée pour surveiller l’activité neuronale11 en tant que marqueur de l’excitabilité neuronale depuis les années 197012,13. Les progrès récents de la technologie d’imagerie, en combinaison avec les indicateurs de calcium génétiquement codés (GECI), tels que GCaMP6, ont révolutionné l’étude de l’épilepsie à la fois à l’échelle du cerveau et à des niveaux de résolution unicellulaire 14,15,16, qui a un haut niveau de précision spatio-temporelle. Des changements dans la concentration de calcium et les transitoires ont été observés dans les potentiels d’action et la transmission synaptique, respectivement14, indiquant que l’altération des niveaux de calcium intracellulaire présente une corrélation stricte avec l’excitabilité électrique des neurones17,18. L’imagerie calcique a également été appliquée comme modèle de crise développementale9 et réalisée chez la drosophile pour le criblage de composés anticonvulsifs19.
Drosophila melanogaster est en train de devenir un puissant organisme modèle dans la recherche scientifique, comme l’épilepsie, pour sa génétique moléculaire sophistiquée et ses tests comportementaux 20,21,22. De plus, les outils génétiques avancés chez la drosophile ont contribué à l’expression de l’indicateur calcique génétiquement codé GCaMP6. Par exemple, les systèmes transcriptionnels binaires basés sur Gal4 et UAS permettent une expression spécifique du GCaMP6 d’une manière contrôlée spatialement et temporellement. Étant donné que la drosophile est un organisme minuscule, l’imagerie calcique in vivo nécessite des compétences opérationnelles compétentes pour effectuer une intervention chirurgicale, dans laquelle seule une petite partie de la dorsale du cerveau a été exposée à travers une petite fenêtre14,23. Dans le même temps, l’imagerie calcique ex vivo dans le cerveau intact de la drosophile peut être utilisée pour surveiller les régions d’intérêt (ROI) de l’ensemble du cerveau.
Dans cette étude, nous présentons l’imagerie calcique ex vivo chez la drosophile adulte exprimant GCaMP6 pour surveiller les activités épileptiformes. CACNA1A est un gène bien connu de l’épilepsie, le cac appartient au canal Cav2, qui est un homologue de CACNA1A. Nous avons commencé par disséquer le cerveau de mouches knockdown cac tub-Gal4>GCaMP6m/cac-RNAi et les imager à l’aide d’un microscope confocal avec mode de balayage xyt. Nous avons ensuite analysé les changements dans les signaux calciques des ROI en calculant des indicateurs qui quantifient les événements spontanés de type convulsive, tels que la valeur %ΔF/F et les événements calciques de la fluorescence GCaMP6. De plus, nous avons effectué un stimulus mécanique à l’aide d’une machine vortex pour induire des tests de comportement de crise sur des mouches cac-knockdown afin de valider les résultats de l’imagerie calcique. Dans l’ensemble, ce protocole fournit un outil précieux pour l’étude des événements ictaux chez la drosophile adulte par imagerie calcique ex vivo , permettant d’explorer les mécanismes potentiels de l’épilepsie au niveau cellulaire.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Brushes</td>
			<td>Panera</td>
			<td>AAhc022-2</td>
			<td>for handling flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>SP8; Zeiss, Jena, Germany.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for calcium imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 anesthesia machine</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for Anesthetizing the flies.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C-sharp holder</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>handmade, for mounting the brain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture vials</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>51-0500</td>
			<td>2.5 cm diameter, 9.5 cm height</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji software</td>
			<td>National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA</td>
			<td>version: 2.14.0</td>
			<td>for analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly morgue</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>handmade, for handling flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly stocks</td>
			<td>cac-RNAi</td>
			<td>27244</td>
			<td>from Bloomington Drosophila Stock Center</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly stocks</td>
			<td>GCaMP6m</td>
			<td>42750</td>
			<td>from Bloomington Drosophila Stock Center</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly stocks</td>
			<td>tub-Gal4</td>
			<td>N/A</td>
			<td>from the Sion-Frech Hoffmann Institute, Guangzhou Medical University</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-resolution camera</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for recording the seizure-like behavior assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L5626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride solution (MgCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain suspension</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS003126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SLW1480/02D</td>
			<td>for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4640010, 4640030, 4640050, 4640060</td>
			<td>for transporting a measured volume of liquid and diseccected brain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recording dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150682- Glass Based Dish</td>
			<td>for holding the brain and calcium imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S25550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo-binocular microscope</td>
			<td>SHANG GUANG</td>
			<td>XTZ-D</td>
			<td>for handling flies and dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe needles</td>
			<td>pythonbio</td>
			<td>HCL0693</td>
			<td>for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>WEIFENG</td>
			<td>45634732523</td>
			<td>for recording the seizure-like behavior assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>Lab dancer, IKA, Germany/Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z653438</td>
			<td>for performing the seizure-like behavior assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whiteboard</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
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ex vivo calcium imaging for drosophila model of epilepsy

L’épilepsie est un trouble neurologique caractérisé par des crises récurrentes, partiellement corrélées à l’origine génétique, affectant plus de 70 millions de personnes dans le monde. Malgré l’importance clinique de l’épilepsie, l’analyse fonctionnelle de l’activité neuronale dans le système nerveux central reste à développer. Les progrès récents de la technologie d’imagerie, combinés à l’expression stable d’indicateurs calciques génétiquement codés, tels que GCaMP6, ont révolutionné l’étude de l’épilepsie à l’échelle du cerveau et à l’échelle d’une cellule. Drosophila melanogaster est apparu comme un outil pour étudier les mécanismes moléculaires et cellulaires sous-jacents à l’épilepsie en raison de sa génétique moléculaire sophistiquée et de ses tests comportementaux. Dans cette étude, nous présentons un protocole novateur et efficace pour l’imagerie calcique ex vivo chez la drosophile adulte exprimant GCaMP6 afin de surveiller les activités épileptiformes. Le cerveau entier est préparé à partir de cac, un gène bien connu de l’épilepsie, pour l’imagerie calcique avec un microscope confocal afin d’identifier l’activité neuronale à la suite du test de comportement de type crise sensible à la bang. Les mouches knockdown cac ont montré un taux plus élevé de comportement convulsif et d’activités calciques anormales, y compris plus de gros pics et moins de petits pics que les mouches de type sauvage. Les activités calciques étaient corrélées à un comportement semblable à celui des crises. Cette méthodologie est une méthodologie efficace pour le criblage des gènes pathogènes de l’épilepsie et l’exploration du mécanisme potentiel de l’épilepsie au niveau cellulaire.

Ex Vivo Calcium Imaging for Drosophila Model of Epilepsy

À l’aide de ce protocole, nous avons constaté que les mouches knockdown cac présentaient des taux significativement plus élevés de comportement convulsif que les mouches WT (17,00 ± 2,99 [n = 6] vs 4,50 ± 2,03 [n = 6] ; P = 0,0061 ; Test t de l’étudiant, figure 1A). La plupart des mouches tub-Gal4>UAS-cac-RNAi se sont rétablies en 1 à 5 s, tandis que les mouches UAS-cac-RNAi se sont rétablies en 2 s. Le pourcentage de ré...

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Insights into the Techniques and Findings of Recent Advancements in Epilepsy Research (Video) | JoVE

Nous présentons ici un protocole d’imagerie calcique ex vivo chez la drosophile adulte exprimant GCaMP6 pour surveiller les activités épileptiformes. Le protocole fournit un outil précieux pour étudier les événements ictaux chez la drosophile adulte par imagerie calcique ex vivo , permettant d’explorer les mécanismes potentiels de l’épilepsie au niveau cellulaire.

Ex Vivo Imagerie calcique pour le modèle d’épilepsie de la drosophile

Epilepsy is a neurological disorder characterized by recurrent seizures, partially correlated with genetic origin, affecting over 70 million individuals ...

Récemment, de nombreux gènes candidats à l’épilepsie ont été trouvés dans des tests génétiques, puis facilement par des expériences sur des animaux. Nous proposons un ensemble de techniques permettant d’étudier l’activité neuronale liée à l’épilepsie, notamment l’enregistrement de cellules entières, l’enregistrement EPSP évoqué et la nouvelle que nous allons présenter ici, l’imagerie calcique ex vivo. Étant donné que l’intégrité du cerveau et de ses réseaux neuronaux ne peut pas être entièrement répliquée dans des cultures cellulaires ou des tranches de cerveau, le principal avantage de l’expérience actuelle est d’obtenir des tissus cérébraux intacts tout en protégeant les réseaux neuronaux des dommages.Nous avons mis au point une technique d’imagerie calcique ex vivo ainsi qu’un test de comportement de type crise sensible à la bande pour dépister efficacement les gènes associés à l’épilepsie et explorer les mécanismes sous-jacents de l’épilepsie au niveau cellulaire. Nous avons mis en œuvre des tissus cérébraux de drosophiles isolés et intacts pour l’imagerie calcique, ce qui permet d’éviter leurs techniques chirurgicales complexes et de préserver l’intégrité des réseaux neuronaux. Et l’approche ex vivo peut également donner un rapport signal sur bruit supérieur par rapport aux techniques d’imagerie in vivo.