Name: an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions
Uploaded: 2023-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions at JoVE.com

Vi takker vores kolleger Vladimir Shilo, Vera Morozovа, Ulyana Rotskaya, Olga Polenogova og Oksana Tomilova for deres hjælp med at organisere og udføre felt- og laboratorieprocedurerne.
Forskningen blev støttet af Russian Science Foundation, projekt nr. 22-14-00309.

1. Beskrivelse af dvaleburene
BEMÆRK: Afhængigt af forsøgets formål varierer antallet af bure. Brug mindst tre bure pr. prøveudtagningsdato. For at estimere antallet af biller, der vil dukke op, skal du forberede mindst tre ekstra bur, som ikke tages ud af jorden til foråret.
<ol><li>Brug bure lavet af en stiv træramme med en størrelse på 25 × 25 × 40 cm (L × W × H).</li>
	<li>For at opbygge en ramme til buret skal du bruge træplader mindst 2 cm tykke og 4 cm b...

<ol>
	<li>Alyokhin, A., Benkovskaya, G., Udalov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle.">Colorado potato beetle.</a> Insect Pests of Potato. , 29-43 (2022).</li><li>Alyokhin, A., Kryukov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+a+potato+field.">Ecology of a potato field.</a> Insect Pests of Potato. , 451-462 (2022).</li><li>Lee Jr, R. E., Costanzo, J. P., Kaufman, P. E., Lee, M. R., Wyman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-nucleating+active+bacteria+reduce+the+cold-hardiness+of+the+freeze-intolerant+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Ice-nucleating active bacteria reduce the cold-hardiness of the freeze-intolerant Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Journal of Economic Entomology. 87 (2), 377-381 (1994).</li><li>Ushatinskaja, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+of+insects+and+its+modifications.">Diapause of insects and its modifications.</a> Journal of General Biology. 34, 194-215 (1973).</li><li>Zheng, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soil+moisture+on+overwintering+pupae+in+Spodopteraexigua+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Effect of soil moisture on overwintering pupae in Spodopteraexigua (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48, 365-371 (2013).</li><li>Hiiesaar, K., Metspalu, L., J&#245;udu, J., J&#245;gar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Over-wintering+of+the+Colorado+potato+beetle+(Leptinotarsa+decemlineata+Say)+in+field+conditions+and+factors+affecting+its+population+density+in+Estonia.">Over-wintering of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata Say) in field conditions and factors affecting its population density in Estonia.</a> Agronomy Research. 4 (1), 21-30 (2006).</li><li>Yocum, G. D., Rinehart, J. P., Chirumamilla-Chapara, A., Larson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+gene+expression+patterns+during+the+initiation+and+maintenance+phases+of+diapause+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Characterization of gene expression patterns during the initiation and maintenance phases of diapause in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (1), 32-39 (2009).</li><li>Yocum, G. D., Buckner, J. S., Fatland, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+internal+and+external+lipids+of+nondiapausing+and+diapause+initiation+phase+adult+Colorado+potato+beetles,+Leptinotarsa+decemlineata.">A comparison of internal and external lipids of nondiapausing and diapause initiation phase adult Colorado potato beetles, Leptinotarsa decemlineata.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 159 (3), 163-170 (2011).</li><li>Nikonorov, Y. M., Syrtlanova, L. A., Kitaev, K. A., Benkovskaya, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activity+of+genes+involved+in+diapause+regulation+in+the+Colorado+Potato+beetle+and+its+change+under+a+fipronil+impact.">Transcription activity of genes involved in diapause regulation in the Colorado Potato beetle and its change under a fipronil impact.</a> Russian Journal of Genetics: Applied Research. 8, 80-86 (2018).</li><li>Govaere, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+and+proteome+analyses+to+investigate+the+molecular+underpinnings+of+cold+response+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Transcriptome and proteome analyses to investigate the molecular underpinnings of cold response in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Cryobiology. 88, 54-63 (2019).</li><li>Lehmann, P., Westberg, M., Tang, P., Lindstr&#246;m, L., K&#228;kel&#228;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diapause+lipidomes+of+three+closely+related+beetle+species+reveal+mechanisms+for+tolerating+energetic+and+cold+stress+in+high-latitude+seasonal+environments.">The diapause lipidomes of three closely related beetle species reveal mechanisms for tolerating energetic and cold stress in high-latitude seasonal environments.</a> Frontiers in Physiology. 11, 576617 (2020).</li><li>Lebenzon, J. E., Torson, A. S., Sinclair, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+differentially+modulates+the+transcriptomes+of+fat+body+and+flight+muscle+in+the+Colorado+potato+beetle.">Diapause differentially modulates the transcriptomes of fat body and flight muscle in the Colorado potato beetle.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics. 40, 100906 (2021).</li><li>Lashomb, J. H., Ng, Y. S., Ghidiu, G., Green, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+spring+emergence+by+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Say)+(Coleoptera:+Chrysomelidae),+in+New+Jersey.">Description of spring emergence by the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), in New Jersey.</a> Environmental entomology. 13 (3), 907-910 (1984).</li><li>Cantwell, G. E., Cantelo, W. W., Schroder, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Beauveria+bassiana+on+underground+stages+of+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Effect of Beauveria bassiana on underground stages of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> The Great Lakes Entomologist. 19 (2), 6 (1986).</li><li>Fedorko, A., Bajan, C., Kmitowa, K., Wojciehowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+the+use+of+selected+microorganisms+to+control+the+Colorado+beetle+during+hibernation.">Effectiveness of the use of selected microorganisms to control the Colorado beetle during hibernation.</a> Ecological Studies. 3 (2), 127-134 (1977).</li><li>Gaugler, R., Costa, S. D., Lashomb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+efficacy+of+Beauveria+bassiana+soil+inoculations.">Stability and efficacy of Beauveria bassiana soil inoculations.</a> Environmental Entomology. 18 (3), 412-417 (1989).</li><li>Bajan, C., Kmitowa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+entomopathogenic+fungi+to+the+natural+winter+reduction+of+Colorado+beetle+adults.">Contribution of entomopathogenic fungi to the natural winter reduction of Colorado beetle adults.</a> Polish Ecological Studies. 3 (2), 107-114 (1977).</li><li>Milner, M., Kung, K. S., Wyman, J. A., Feldman, J., Nordheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+overwintering+mortality+of+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae)+by+manipulating+the+temperature+of+its+diapause+habitat.">Enhancing overwintering mortality of Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) by manipulating the temperature of its diapause habitat.</a> Journal of Economic Entomology. 85 (5), 1701-1708 (1992).</li><li>Do&#287;an, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+calcium+signaling+proteins+from+the+fat+body+of+the+Colorado+Potato+Beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae):+Implications+for+diapause+and+lipid+metabolism.">Characterization of calcium signaling proteins from the fat body of the Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae): Implications for diapause and lipid metabolism.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 133, 103549 (2021).</li><li>Benkovskaya, G. V., Udalov, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle+investigations+in+the+south+Urals.">Colorado potato beetle investigations in the south Urals.</a> Nova Science Publishers. , (2011).</li><li>Short, C. A., Hahn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+enough+for+the+winter?+Does+nutritional+status+affect+diapause.">Fat enough for the winter? Does nutritional status affect diapause.</a> Journal of Insect Physiology. , 104488 (2023).</li><li>McDonald, J. R., Bale, J. S., Walters, K. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+mortality+and+overwintering+of+the+western+flower+thrips+Frankliniella+occidentalis+(Thysanoptera:+Thripidae).">Low-temperature mortality and overwintering of the western flower thrips Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae).</a> Bulletin of Entomological Research. 87 (5), 497-505 (1997).</li></ol>

Denne undersøgelse viser, at den foreslåede metode til undersøgelse af overvintring af CPB'er gør det muligt for os at opnå et tilstrækkeligt antal insekter i forskellige dvaleperioder. Succesen med den præsenterede teknik afhænger af flere uafhængige faktorer, hvoraf den vigtigste er vejrforholdene. I en kold, snefri vinter kan jorden fryse til hele dybden af buret. I dette tilfælde stiger risikoen for død af alle biller betydeligt18. Billeoverlevelsen afhænger af en kombination af ma...

Colorado-kartoffelbaglen Leptinotarsa decemlineata Say (CPB) er et vigtigt skadedyr af Solanaceae-planter, overvejende kartoffel Solanum tuberosum L. Det geografiske område af denne art er mere end 16 millioner km2 og udvides konstant1. CPB har fakultativ vinterdiapause, og dvaletilstand er obligatorisk i den tempererede zone. Diapausen induceres af en kortdags fotoperiode og moduleres af temperatur1. Disse biller overvintrer i voksenstadiet ved at grave sig ned i jorden. Med stigende breddegrader forlænges dvaleperiodens varighed. I den tempererede zone, især på nordlige områder af sit sortiment, varer overvintringen op til 9 måneder: fra august-september til maj-juni (Noskov et al., personlige observationer). I løbet af denne periode udsættes CPB - ligesom ethvert andet insekt i den tempererede zone - for ugunstige vinterforhold og skal øge sin kuldetolerance. Samtidig øger billernes kontakt med jord risikoen for infektion med forskellige opportunistiske og patogene mikroorganismer2. Derfor skal disse biller opretholde et vist niveau af immunsystemaktivitet under dvaletilstand, hvilket også er energisk dyrt. Ikke desto mindre, selvom insektet overlever en infektion, kan sygdommen reducere sin kuldehårdhed3. Det skal bemærkes, at lav temperatur ikke er den eneste årsag til vinterdødeligheden i CPB. En vigtig rolle spilles også af manglen på ilt, og under nogle forhold kan det være den vigtigste faktor for vinterdødelighed 4,5.
Det er kendt, at CPB's naturlige vinterdødelighed kan være meget høj og nå 100% i lerjord6. Overvintring er således en af de mest afgørende perioder i CPB's livscyklus. Ikke desto mindre er data om fysiologi, immunsystemaktivitet, overlevelse og andre parametre for CPB-dvaletilstand under naturlige forhold stadig begrænsede. Der er undersøgelser af differentiel genekspression og forskellige fysiologiske parametre hos CPB-voksne under diapausen og som reaktion på kuldechok 7,8,9,10,11,12; Disse analyser er imidlertid hovedsageligt blevet udført ved induktion af diapause eller kuldestress under laboratorieforhold uden naturlige udsving i temperatur, fugtighed og naturlig patogenbelastning. Ikke desto mindre er forskning i fysiologien af disse biller indsamlet ved udgravning fra jord under naturlige forhold vigtig. Forskellige aspekter af CPB-overvintring under naturlige forhold blev aktivt undersøgt i 1970'erne-1980'erne 13,14,15,16,17,18. På den anden side involverede disse undersøgelser ikke CPB-udgravning fra jorden om vinteren. Derudover er en teknik til kontrolleret dvaletilstand af CPB og en beskrivelse af burene ikke givet detaljeret. Derfor er der behov for undersøgelse af fysiologien hos CPB'er, der overvintrer i naturlige omgivelser19.
Formålet med denne undersøgelse var at udvikle og teste en metode til kontrolleret dvale hos voksne CPB under naturlige forhold. Den foreslåede metode gør det muligt at opnå et ønsket antal CPB-individer til mikrobiologiske, immunologiske og andre assays under dvaletilstand under feltbetingelser i et kontinentalt klima. Denne metode kan tilpasses og anvendes på andre insektarter, der overvintrer i jord under sne.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-agar bacteriological purified</td>
			<td>diaGene</td>
			<td>1806.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bile Esculin Agar</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo Agar&#160;</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate-D</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>143140.1000&#934;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid&#160;</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>141034.1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani liquid medium</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>G009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical centrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>SCT-15ML-25-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>FBIS SRCAMB</td>
			<td>M<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65862/65862eq01v2.jpg" style="margin: auto;" />030/O61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Medigen</td>
			<td>PBS500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperatutre and humidity datalogger Ecklerk-M-11</td>
			<td>Relsib</td>
			<td></td>
			<td>Waterproof datalogger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions

Et af de største skadedyr af kartoffel Solanum tuberosum L. i den tempererede zone er insektet Colorado kartoffelbille (CPB). De fleste undersøgelser af immunitet og sygdomme i CPB udføres under aktive fodringsstadier. Ikke desto mindre er der færre undersøgelser af hvilestadier, selvom disse biller tilbringer det meste af deres livscyklus i en tilstand af vinterdiapause (dvale). I dette arbejde blev en metode til undersøgelse af CPB-dvaletilstand under naturlige forhold udviklet og testet, hvilket giver mulighed for at indsamle et tilstrækkeligt antal individer om vinteren. I denne artikel blev CPB-overlevelse vurderet, og infektiøse agenser på forskellige stadier af dvaletilstand blev identificeret. CPB-dødeligheden steg under dvaletilstanden og nåede et maksimum i april-maj. Entomopatogene svampe (Beauveria, Isaria og Lecanicillium) og bakterier Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas og Serratia blev isoleret fra de døde insekter. Overlevelsesgraden for billerne for hele dvaleperioden var 61%. Der blev ikke fundet frosne eller udtørrede biller, hvilket indikerer succesen med den præsenterede metode.

Resultaterne nedenfor om overvintrende CPB'er viser jordtemperatur, overlevelse og infektioner.
Jordtemperatur dynamik. Temperaturer under nul i burene på en dybde på 30 cm blev registreret fra slutningen af november til begyndelsen af april (figur 1). Gennemsnitstemperaturen i denne periode var minus 3,3 ± 0,1 °C (gennemsnit ± standardfejl). Den laveste registrerede temperatur var minus 7,9 °C i midten af februar.
<p class="jove_cont...

Watch this Scientific Journal Video about An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions at JoVE.com

An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions

Her præsenterer vi en metode til at studere Colorado-kartoffelbilledvaletilstand under de naturlige forhold i den tempererede zone samt en teknik til indsamling af biller om vinteren. Denne metode gør det muligt at opnå et ønsket antal overvintrende individer til forskellige analyser på ethvert stadium af dvaletilstand.

En eksperimentel undersøgelse af Colorado kartoffelbille dvaletilstand under naturlige forhold

One of the major pests of potato Solanum tuberosum L. in the temperate zone is the insect Colorado potato beetle (CPB). Most studies on the immunity and ...

Colorado-kartoffelbaglen er en af de mest alvorlige skadedyr af kartoffel i tempereret zone. Undersøgelser af immuniteten og patogenesen af dette skadedyr udføres hovedsageligt på det aktive stadium. Men i tempereret zone bruger dette skadedyr det meste af sin livscyklus i dvaletilstand.I denne undersøgelse præsenterer vi en metode til dvaletilstand af Colorado-kartoffelbille og en teknik til indsamling af biller om vinteren. Den største fordel ved denne metode er, at den gør det muligt at opnå et vilkårligt antal overvintrende individer til virusanalyse i enhver dvaleperiode. Brug bur lavet af en stiv træramme med en størrelse på 25 x 25 x 40 centimeter.For at bygge en ramme til buret skal du bruge træplader mindst to centimeter tykke og fire centimeter brede. Dæk indersiden af buret med et rustfrit stålnet med en størrelse på højst fem til tre millimeter. Fastgør masken med en træhæftemaskine.Linj indersiden af buret med en sort syntetisk geotekstil med en densitet på 60 gram pr. Kvadratmeter. Fastgør et rør af syntetisk gennemskinneligt åndbart stof, cirka 60 centimeter højt til toppen af buret. Kryds og fastgør to stærke reb til bunden af buret for at trække det ud af jorden, når det er nødvendigt.Grav et hul i jorden 40 centimeter dybt. Læg tørt græs eller hø på hullet. Placer buret inde, så hø eller tørt græs er mellem burets vægge og jorden.Fyld burene op med jord fra samme kartoffelmark, hvor insekterne samles. Installer vandtætte temperatur- og fugtighedsdataloggere i burene på de krævede dybder. Plant kartoffelplanter inde i buret tre til fire uger før billeintroduktion og vand dem moderat.Fastgør et rør af syntetisk stof lodret til en pind af ethvert materiale, der er installeret på ydersiden af buret. Saml manuelt voksne biller i de pesticidfrie kartoffelmarker mod slutningen af kartoffelvegetationen. Opbevar de indsamlede biller i 20 liters plastikspande indeholdende kartoffelplader til fodring af insekterne, inden de placeres i burene.Dæk spandene med et åndbart stof. Placer ikke mere end 200 individer af billerne på kartoffelplanterne, der er dækket af det syntetiske stofnet. Når kartoffeltoppene indtages, tilsættes friske i en plastikbeholder med vand og skiftes kartoffelpladerne dagligt bagefter.Når alle billerne er gravet ned i jorden for at overvintre, skal du løsne røret af syntetisk stof fra pinden og lægge stoffet ned. Fjern sneen over burets overflade. Løsn buret på hver side med en stærk skovl.Træk buret ud af jorden ved hjælp af reb. Bring buret til laboratoriet. Fjern jorden fra buret i små portioner, bryd forsigtigt store jordstykker op og isoler biller ved hjælp af pincet.Adskil levende biller fra kadavere. Levende, sunde biller komprimerer jord omkring dem og danner et lufthulrum, en såkaldt vugge, og adskilles derfor let fra jorden. Biller dræbt af svampe mumificeres eller har synligt mycelium på overfladen.Bakterielt nedbrydende insekter er mørke. Sigt jorden gennem en sigte for at sikre, at alle billerne er isolerede og ikke beskadigede. Placer kadavere med symptomer på svampeinfektion eller bakteriel nedbrydning i et individuelt sterilt Falcon-rør til fremtidig identifikation.Opbevar levende biller i køleskab ved en temperatur på 2 grader Celsius indtil analyse i lukkede ventilerede beholdere indeholdende en fugtig bomuldskugle. For at opsamle hæmolymfe, lav en punktering i den laterale del af maven under aorta med en insulinnål. For at isolere tarmen skal du afskære hovedkapslen, presse alt indholdet ud i en petriskål med fosfatbuffer.Adskil tarmen og rens den fra fedt og malpighiske kar. Adskil en ønsket del af tarmen, såsom forgut, midgut eller bagtarm. For at isolere fedtlegemet skal du adskille det fra de andre væv efter isolering af tarmen.For at isolere entomopatogene svampe fra kadavere, sæt de mumificerede kadavere i et sterilt fugtighedskammer. Brug luftkonidier eller sklerotier fra billernes indre indhold til plettering på Sabouraud dextroseagar med 0,4% mælkesyre. Isoler bakterier fra kadavere med symptomer på bakteriel forfald.Skær et billehoved af, klem det indre indhold ud og saml i rør til efterfølgende plettering på medier for bakterier. Temperaturer under nul i burene på en dybde på 30 centimeter blev registreret fra slutningen af november til begyndelsen af april. Den gennemsnitlige temperatur i denne periode var 3,3 0,1 Celsius.Den laveste registrerede temperatur var 7,9 Celsius i midten af februar. Insektdødeligheden steg under dvaletilstanden og nåede et maksimum om foråret før fremkomsten. Det oprindelige antal biller var 2.000, hvoraf 1.470 personer overlevede.Således var overlevelsesgraden af billerne under dvaletilstanden 61%En analyse af 530 kadavere viste, at i dvaleperioden var 53%af dem præget af symptomer på bakteriel nedbrydning og 25%var karakteriseret ved symptomer på svampeinfektion. Beauveria dominerede blandt de isolerede kulturer af entomopatogene svampe. Metarhizium, Cordyceps og Lecanicillium var meget mindre almindelige.Blandt bakterierne isoleret fra kadavere med symptomer på bakteriel nedbrydning blev arter tilhørende slægterne Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella og Glutamicibacter identificeret. Brug af denne metode kan løse problemet med at opnå Colorado-kartoffelbagler fra marken om vinteren. Det giver mulighed for at få så mange individer som du har brug for med insekternes lave dødelighed.Undersøgelsen af forskellige aspekter af billernes dvaletilstand er vigtig ud fra både grundlæggende og anvendte synspunkter for at forbedre tilgangen til bekæmpelse af dette skadedyr. Og selvfølgelig kan denne teknik tilpasses til andre insektarter, der overvintrer i jorden.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Computer-Generated Animal Model Stimuli

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase

HIV-1 integrates into the host chromosome of infected cells and persists as a provirus flanked by long terminal repeats. Current treatment strategies ...

Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution

Brug af ikke-fikserede, frosne væv til Uddannelse Natural Mucin Distribution

Mucins are complex and heavily glycosylated O-linked glycoproteins, which contain more than 70% carbohydrate by weight1-3. Secreted mucins, produced by ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

High-throughput Billede Analyse af Tumor Spheroids: Et brugervenligt program til at måle størrelsen af ​​Spheroids automatisk og præcist

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larve RNA-interferens i Den Røde rismelbille,<em&gt; Tribolium castaneum</em

The red flour beetle, Tribolium&#160;castaneum, offers a repertoire of experimental tools for genetic and developmental studies, including a fully ...

Applications of the Single-probe: Mass Spectrometry Imaging and Single Cell Analysis under Ambient Conditions

Anvendelser af Single-sonde: massespektrometri Imaging og Single Cell Analysis under omgivende betingelser

Mass spectrometry imaging (MSI) and in-situ single cell mass spectrometry (SCMS) analysis under ambient conditions are two emerging fields with great ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Forsøgsplan for at bruge Drosophila som hvirvelløse modelsystem for afprøvning af toksicitet i laboratoriet

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Co-immunoprecipitation Assay Using Endogenous Nuclear Proteins from Cells Cultured Under Hypoxic Conditions

Co-immunoprecipitation analyse ved hjælp af endogene nukleare proteiner fra celler kulturperler hypoksiske betingelser

Low oxygen levels (hypoxia) trigger a variety of adaptive responses with the Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) complex acting as a master regulator. ...

An Adipocyte Cell Culture Model to Study the Impact of Protein and Micro-RNA Modulation on Adipocyte Function

En adipocytcellekulturmodel til undersøgelse af protein- og mikro-RNA-gradueringens indvirkning på adipocytfunktionen

Alteration of adipocyte function contributes to the pathogenesis of metabolic diseases including Type 2 diabetes and insulin resistance. This highlights ...