Name: an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions
Uploaded: 2023-11-17T13:00:00
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Ringraziamo i nostri colleghi Vladimir Shilo, Vera Morozovа, Ulyana Rotskaya, Olga Polenogova e Oksana Tomilova per il loro aiuto nell'organizzazione e nell'esecuzione delle procedure sul campo e di laboratorio.
La ricerca è stata sostenuta dalla Russian Science Foundation, progetto n. 22-14-00309.

1. Descrizione delle gabbie per il letargo
NOTA: A seconda degli obiettivi dell'esperimento, il numero di gabbie varia. Utilizzare almeno tre gabbie per data di campionamento. Per stimare il numero di coleotteri che emergeranno, prepara almeno tre gabbie aggiuntive, che non verranno estratte dal terreno fino alla primavera.
<ol><li>Utilizzare gabbie costituite da un telaio rigido in legno con dimensioni di 25 × 25 × 40 cm (L × P × H).</li>
	<li>Per costruire un telaio pe...

<ol>
	<li>Alyokhin, A., Benkovskaya, G., Udalov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle.">Colorado potato beetle.</a> Insect Pests of Potato. , 29-43 (2022).</li><li>Alyokhin, A., Kryukov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+a+potato+field.">Ecology of a potato field.</a> Insect Pests of Potato. , 451-462 (2022).</li><li>Lee Jr, R. E., Costanzo, J. P., Kaufman, P. E., Lee, M. R., Wyman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-nucleating+active+bacteria+reduce+the+cold-hardiness+of+the+freeze-intolerant+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Ice-nucleating active bacteria reduce the cold-hardiness of the freeze-intolerant Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Journal of Economic Entomology. 87 (2), 377-381 (1994).</li><li>Ushatinskaja, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+of+insects+and+its+modifications.">Diapause of insects and its modifications.</a> Journal of General Biology. 34, 194-215 (1973).</li><li>Zheng, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soil+moisture+on+overwintering+pupae+in+Spodopteraexigua+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Effect of soil moisture on overwintering pupae in Spodopteraexigua (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48, 365-371 (2013).</li><li>Hiiesaar, K., Metspalu, L., J&#245;udu, J., J&#245;gar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Over-wintering+of+the+Colorado+potato+beetle+(Leptinotarsa+decemlineata+Say)+in+field+conditions+and+factors+affecting+its+population+density+in+Estonia.">Over-wintering of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata Say) in field conditions and factors affecting its population density in Estonia.</a> Agronomy Research. 4 (1), 21-30 (2006).</li><li>Yocum, G. D., Rinehart, J. P., Chirumamilla-Chapara, A., Larson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+gene+expression+patterns+during+the+initiation+and+maintenance+phases+of+diapause+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Characterization of gene expression patterns during the initiation and maintenance phases of diapause in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (1), 32-39 (2009).</li><li>Yocum, G. D., Buckner, J. S., Fatland, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+internal+and+external+lipids+of+nondiapausing+and+diapause+initiation+phase+adult+Colorado+potato+beetles,+Leptinotarsa+decemlineata.">A comparison of internal and external lipids of nondiapausing and diapause initiation phase adult Colorado potato beetles, Leptinotarsa decemlineata.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 159 (3), 163-170 (2011).</li><li>Nikonorov, Y. M., Syrtlanova, L. A., Kitaev, K. A., Benkovskaya, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activity+of+genes+involved+in+diapause+regulation+in+the+Colorado+Potato+beetle+and+its+change+under+a+fipronil+impact.">Transcription activity of genes involved in diapause regulation in the Colorado Potato beetle and its change under a fipronil impact.</a> Russian Journal of Genetics: Applied Research. 8, 80-86 (2018).</li><li>Govaere, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+and+proteome+analyses+to+investigate+the+molecular+underpinnings+of+cold+response+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Transcriptome and proteome analyses to investigate the molecular underpinnings of cold response in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Cryobiology. 88, 54-63 (2019).</li><li>Lehmann, P., Westberg, M., Tang, P., Lindstr&#246;m, L., K&#228;kel&#228;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diapause+lipidomes+of+three+closely+related+beetle+species+reveal+mechanisms+for+tolerating+energetic+and+cold+stress+in+high-latitude+seasonal+environments.">The diapause lipidomes of three closely related beetle species reveal mechanisms for tolerating energetic and cold stress in high-latitude seasonal environments.</a> Frontiers in Physiology. 11, 576617 (2020).</li><li>Lebenzon, J. E., Torson, A. S., Sinclair, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+differentially+modulates+the+transcriptomes+of+fat+body+and+flight+muscle+in+the+Colorado+potato+beetle.">Diapause differentially modulates the transcriptomes of fat body and flight muscle in the Colorado potato beetle.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics. 40, 100906 (2021).</li><li>Lashomb, J. H., Ng, Y. S., Ghidiu, G., Green, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+spring+emergence+by+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Say)+(Coleoptera:+Chrysomelidae),+in+New+Jersey.">Description of spring emergence by the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), in New Jersey.</a> Environmental entomology. 13 (3), 907-910 (1984).</li><li>Cantwell, G. E., Cantelo, W. W., Schroder, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Beauveria+bassiana+on+underground+stages+of+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Effect of Beauveria bassiana on underground stages of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> The Great Lakes Entomologist. 19 (2), 6 (1986).</li><li>Fedorko, A., Bajan, C., Kmitowa, K., Wojciehowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+the+use+of+selected+microorganisms+to+control+the+Colorado+beetle+during+hibernation.">Effectiveness of the use of selected microorganisms to control the Colorado beetle during hibernation.</a> Ecological Studies. 3 (2), 127-134 (1977).</li><li>Gaugler, R., Costa, S. D., Lashomb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+efficacy+of+Beauveria+bassiana+soil+inoculations.">Stability and efficacy of Beauveria bassiana soil inoculations.</a> Environmental Entomology. 18 (3), 412-417 (1989).</li><li>Bajan, C., Kmitowa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+entomopathogenic+fungi+to+the+natural+winter+reduction+of+Colorado+beetle+adults.">Contribution of entomopathogenic fungi to the natural winter reduction of Colorado beetle adults.</a> Polish Ecological Studies. 3 (2), 107-114 (1977).</li><li>Milner, M., Kung, K. S., Wyman, J. A., Feldman, J., Nordheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+overwintering+mortality+of+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae)+by+manipulating+the+temperature+of+its+diapause+habitat.">Enhancing overwintering mortality of Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) by manipulating the temperature of its diapause habitat.</a> Journal of Economic Entomology. 85 (5), 1701-1708 (1992).</li><li>Do&#287;an, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+calcium+signaling+proteins+from+the+fat+body+of+the+Colorado+Potato+Beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae):+Implications+for+diapause+and+lipid+metabolism.">Characterization of calcium signaling proteins from the fat body of the Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae): Implications for diapause and lipid metabolism.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 133, 103549 (2021).</li><li>Benkovskaya, G. V., Udalov, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle+investigations+in+the+south+Urals.">Colorado potato beetle investigations in the south Urals.</a> Nova Science Publishers. , (2011).</li><li>Short, C. A., Hahn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+enough+for+the+winter?+Does+nutritional+status+affect+diapause.">Fat enough for the winter? Does nutritional status affect diapause.</a> Journal of Insect Physiology. , 104488 (2023).</li><li>McDonald, J. R., Bale, J. S., Walters, K. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+mortality+and+overwintering+of+the+western+flower+thrips+Frankliniella+occidentalis+(Thysanoptera:+Thripidae).">Low-temperature mortality and overwintering of the western flower thrips Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae).</a> Bulletin of Entomological Research. 87 (5), 497-505 (1997).</li></ol>

Questo studio dimostra che il metodo proposto per studiare lo svernamento dei CPB ci permette di ottenere un numero sufficiente di insetti in diversi periodi di letargo. Il successo della tecnica presentata dipende da diversi fattori indipendenti, il più importante dei quali sono le condizioni meteorologiche. In un inverno freddo e senza neve, il terreno può congelare fino all'intera profondità della gabbia. In questo caso, il rischio di morte di tutti i coleotteri aumenta significativamente18....

Il coleottero della patata del Colorado Leptinotarsa decemlineata Say (CPB) è un importante parassita delle piante di Solanaceae, prevalentemente Solanum tuberosum L. L'areale geografico di questa specie è di oltre 16 milioni dikm2 e si espande costantemente1. Il CPB ha una diapausa invernale facoltativa e il letargo è obbligatorio nella zona temperata. La diapausa è indotta da un fotoperiodo a giorno corto e modulata dalla temperatura1. Questi coleotteri svernano allo stadio adulto scavando nel terreno. Con l'aumentare delle latitudini, la durata del periodo di ibernazione si allunga. Nella zona temperata, soprattutto nei territori settentrionali del suo areale, lo svernamento dura fino a 9 mesi: da agosto-settembre a maggio-giugno (Noskov et al., osservazioni personali). Durante questo periodo, il CPB – proprio come qualsiasi altro insetto della zona temperata – è esposto a condizioni invernali sfavorevoli e deve aumentare la sua tolleranza al freddo. Allo stesso tempo, il contatto dei coleotteri con il suolo aumenta il rischio di infezione da parte di vari microrganismi opportunisti e patogeni2. Pertanto, questi coleotteri hanno bisogno di mantenere un certo livello di attività del sistema immunitario durante il letargo, che è anche energeticamente costoso. Tuttavia, anche se l'insetto sopravvive a un'infezione, la malattia può ridurre la sua resistenza al freddo3. Va notato che la bassa temperatura non è l'unica ragione della mortalità invernale del CPB. Un ruolo importante è svolto anche dalla mancanza di ossigeno e, in alcune condizioni, potrebbe essere il principale fattore di mortalità invernale 4,5.
È noto che la mortalità invernale naturale del CPB può essere molto elevata, raggiungendo il 100% nei terreni franco-argillosi6. Pertanto, lo svernamento è uno dei periodi più cruciali nel ciclo di vita del CPB. Tuttavia, i dati sulla fisiologia, l'attività del sistema immunitario, la sopravvivenza e altri parametri dell'ibernazione CPB in condizioni naturali sono ancora limitati. Sono presenti studi sull'espressione genica differenziale e su vari parametri fisiologici negli adulti CPB durante la diapausa e in risposta allo shock da freddo 7,8,9,10,11,12; Tuttavia, queste analisi sono state effettuate principalmente mediante induzione di diapausa o stress da freddo in condizioni di laboratorio senza fluttuazioni naturali di temperatura, umidità e carico patogeno nativo. Ciononostante, la ricerca sulla fisiologia di questi coleotteri raccolti mediante scavo dal suolo in condizioni naturali è importante. Diversi aspetti dello svernamento del CPB in condizioni naturali sono stati attivamente studiati negli anni 1970-1980 13,14,15,16,17,18. D'altra parte, questi studi non hanno comportato lo scavo di CPB dal suolo in inverno. Inoltre, non vengono fornite in dettaglio una tecnica per l'ibernazione controllata del CPB e una descrizione delle gabbie. Pertanto, è necessaria un'indagine sulla fisiologia dei CPB che svernano in ambienti naturali19.
Lo scopo di questo studio è stato quello di sviluppare e testare un metodo per l'ibernazione controllata degli adulti CPB in condizioni naturali. Il metodo proposto consente di ottenere un numero desiderato di individui CPB per saggi microbiologici, immunologici e di altro tipo durante l'ibernazione in condizioni di campo di un clima continentale. Questo metodo può essere adattato e applicato ad altre specie di insetti che svernano nel terreno sotto la neve.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-agar bacteriological purified</td>
			<td>diaGene</td>
			<td>1806.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bile Esculin Agar</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo Agar&#160;</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate-D</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>143140.1000&#934;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid&#160;</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>141034.1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani liquid medium</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>G009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical centrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>SCT-15ML-25-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>FBIS SRCAMB</td>
			<td>M<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65862/65862eq01v2.jpg" style="margin: auto;" />030/O61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Medigen</td>
			<td>PBS500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperatutre and humidity datalogger Ecklerk-M-11</td>
			<td>Relsib</td>
			<td></td>
			<td>Waterproof datalogger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions

Uno dei principali parassiti della patata Solanum tuberosum L. nella zona temperata è l'insetto scarabeo della patata del Colorado (CPB). La maggior parte degli studi sull'immunità e sulle malattie del CPB sono condotti durante le fasi di alimentazione attiva. Tuttavia, ci sono meno studi sulle fasi di riposo, anche se questi coleotteri trascorrono la maggior parte del loro ciclo vitale in uno stato di diapausa invernale (letargo). In questo lavoro è stato sviluppato e testato un metodo per studiare l'ibernazione CPB in condizioni naturali, offrendo l'opportunità di raccogliere un numero sufficiente di individui in inverno. In questo articolo è stata valutata la sopravvivenza al CPB e sono stati identificati gli agenti infettivi in diverse fasi di ibernazione. La mortalità per CPB è aumentata durante il letargo, raggiungendo un massimo in aprile-maggio. Funghi entomopatogeni (Beauveria, Isaria e Lecanicillium) e batteri Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas e Serratia sono stati isolati dagli insetti morti. Il tasso di sopravvivenza dei coleotteri per l'intero periodo di ibernazione è stato del 61%. Non sono stati trovati coleotteri congelati o essiccati, il che indica il successo del metodo presentato.

I risultati riportati di seguito sui CPB svernanti mostrano la temperatura del suolo, la sopravvivenza e le infezioni.
Dinamica della temperatura del suolo. Temperature sotto lo zero nelle gabbie a una profondità di 30 cm sono state registrate dalla fine di novembre all'inizio di aprile (Figura 1). La temperatura media durante questo periodo è stata di -3,3 ± 0,1 °C (errore medio ± standard). La temperatura più bassa registrata è stata d...

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An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions

Qui presentiamo un metodo per studiare il letargo del coleottero della patata Colorado nelle condizioni naturali della zona temperata, nonché una tecnica per la raccolta dei coleotteri in inverno. Questo metodo consente di ottenere un numero desiderato di individui svernanti per varie analisi in qualsiasi fase del letargo.

Uno studio sperimentale sull'ibernazione del coleottero della patata del Colorado in condizioni naturali

One of the major pests of potato Solanum tuberosum L. in the temperate zone is the insect Colorado potato beetle (CPB). Most studies on the immunity and ...

Lo scarabeo della patata del Colorado è uno dei parassiti più gravi della patata nelle zone temperate. Gli studi sull'immunità e sulla patogenesi di questo parassita vengono effettuati principalmente nella fase attiva. Tuttavia, nelle zone temperate, questo parassita trascorre la maggior parte del suo ciclo di vita in uno stato di ibernazione.In questo studio, presentiamo un metodo per l'ibernazione dello scarabeo della patata del Colorado e una tecnica per la raccolta dei coleotteri in inverno. Il vantaggio principale di questo metodo è che consente di ottenere un numero qualsiasi di individui svernanti per l'analisi del virus in qualsiasi periodo di letargo. Utilizzare gabbie costituite da un telaio rigido in legno con una dimensione di 25 x 25 x 40 centimetri.Per costruire un telaio per la gabbia, utilizzare doghe di legno spesse almeno due centimetri e larghe quattro. Coprire l'interno della gabbia con una rete in acciaio inossidabile di dimensioni non superiori a cinque per tre millimetri. Fissare la rete con una cucitrice per legno.Rivestire l'interno della gabbia con un geotessile sintetico nero con una densità di 60 grammi per metro quadrato. Attacca saldamente un tubo di tessuto sintetico traslucido traspirante, alto circa 60 centimetri alla parte superiore della gabbia. Incrociare e fissare due robuste corde al fondo della gabbia per estrarla dal terreno quando necessario.Scava una buca nel terreno profonda 40 centimetri. Stendere erba secca o fieno sulla buca. Posiziona la gabbia all'interno in modo che il fieno o l'erba secca si trovino tra le pareti della gabbia e il terreno.Riempi le gabbie con il terreno dello stesso campo di patate in cui vengono raccolti gli insetti. Installare data logger di temperatura e umidità impermeabili nelle gabbie alle profondità richieste. Pianta le piantine di patate all'interno della gabbia tre o quattro settimane prima dell'introduzione del coleottero e annaffiale moderatamente.Fissare verticalmente un tubo di tessuto sintetico a un bastoncino di qualsiasi materiale installato all'esterno della gabbia. Raccogli manualmente i coleotteri adulti nei campi di patate privi di pesticidi verso la fine della vegetazione delle patate. Conservare i coleotteri raccolti in secchi di plastica da 20 litri contenenti cime di patate per nutrire gli insetti prima di metterli nelle gabbie.Copri i secchi con un tessuto traspirante. Posiziona non più di 200 individui di coleotteri sulle piante di patate coperte dalla rete di tessuto sintetico. Quando le cime di patate sono consumate, aggiungere quelle fresche messe in un barattolo di plastica contenente acqua e cambiare le cime di patate ogni giorno.Una volta che tutti gli scarafaggi si sono scavati nel terreno per svernare, slega il tubo di tessuto sintetico dal bastoncino e stendi il tessuto. Rimuovere la neve sopra la superficie della gabbia. Allentare la gabbia su ciascun lato con una pala robusta.Estrarre la gabbia dal terreno usando delle corde. Porta la gabbia in laboratorio. Rimuovere il terreno dalla gabbia in piccole porzioni, rompere con cura grandi pezzi di terreno e isolare i coleotteri usando una pinzetta.Separare i coleotteri vivi dai cadaveri. I coleotteri vivi e sani compattano il terreno intorno a loro formando una cavità d'aria, una cosiddetta culla, e quindi si separano facilmente dal terreno. I coleotteri uccisi dai funghi sono mummificati o hanno micelio visibile sulla superficie.Gli insetti che si decompongono battericamente sono scuri. Setacciare il terreno attraverso un setaccio per assicurarsi che tutti i coleotteri siano isolati e non danneggiati. Collocare i cadaveri con sintomi di un'infezione fungina o di una decomposizione batterica in una singola provetta Falcon sterile per una futura identificazione.Conservare i coleotteri vivi in frigorifero a una temperatura di 2 gradi Celsius fino all'analisi in contenitori chiusi e ventilati contenenti un batuffolo di cotone umido. Per raccogliere l'emolinfa, praticare una puntura nella parte laterale dell'addome sotto l'aorta con un ago da insulina. Per isolare l'intestino, tagliare la capsula di testa, spremere tutto il contenuto in una capsula di Petri con tampone fosfato.Separare l'intestino e purificarlo dal grasso e dai vasi malpighiani. Separa una sezione desiderata dell'intestino, come l'intestino anteriore, l'intestino medio o l'intestino posteriore. Per isolare il corpo adiposo, separarlo dagli altri tessuti dopo l'isolamento dell'intestino.Per isolare i funghi entomopatogeni dai cadaveri, mettere i cadaveri mummificati in una camera di umidità sterile. Utilizzare i conidi aerei o gli sclerozi del contenuto interno dei coleotteri per la placcatura su agar destrosio Sabouraud con acido lattico allo 0,4%. Isolare i batteri dai cadaveri con sintomi di carie batterica.Tagliare la testa di uno scarabeo, spremere il contenuto interno e raccoglierlo in tubi per la successiva placcatura su terreni per batteri. Temperature sotto lo zero nelle gabbie a 30 centimetri di profondità, sono state registrate dalla fine di novembre all'inizio di aprile. La temperatura media durante questo periodo è stata di 3,3 0,1 gradi Celsius.La temperatura più bassa registrata è stata di 7,9 gradi Celsius a metà febbraio. La mortalità degli insetti è aumentata durante il letargo e ha raggiunto un massimo in primavera prima dell'emersione. Il numero iniziale di coleotteri era di 2.000, di cui 1.470 individui sono sopravvissuti.Pertanto, il tasso di sopravvivenza dei coleotteri durante il letargo è stato del 61%Un'analisi di 530 cadaveri ha mostrato che durante il periodo di ibernazione il 53% di essi era caratterizzato da sintomi di decomposizione batterica e il 25% era caratterizzato da sintomi di infezione fungina. La Beauveria dominava tra le colture isolate di funghi entomopatogeni. Metarhizium, Cordyceps e Lecanicillium erano molto meno comuni.Tra i batteri isolati dai cadaveri con sintomi di decomposizione batterica, sono state identificate specie appartenenti ai generi Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella e Glutamicibacter. L'utilizzo di questo metodo può risolvere il problema di ottenere scarabei della patata del Colorado dal campo in inverno. Permette di ottenere tutti gli individui di cui hai bisogno con il basso tasso di mortalità degli insetti.Lo studio dei vari aspetti del letargo dei coleotteri è importante sia dal punto di vista fondamentale che applicativo per migliorare l'approccio al controllo di questo parassita. E, naturalmente, questa tecnica può essere adattata ad altre specie di insetti che svernano nel terreno.

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Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Protocollo sperimentale per l'utilizzo di Drosophila come sistema modello invertebrati marini per test di tossicità in laboratorio

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Co-immunoprecipitation Assay Using Endogenous Nuclear Proteins from Cells Cultured Under Hypoxic Conditions

Analisi di co-immunoprecipitazione utilizzando proteine endogene nucleari da cellule coltivate in condizioni di ipossia

Low oxygen levels (hypoxia) trigger a variety of adaptive responses with the Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) complex acting as a master regulator. ...

An Adipocyte Cell Culture Model to Study the Impact of Protein and Micro-RNA Modulation on Adipocyte Function

Un modello di coltura cellulare di adipociti per studiare l'impatto della modulazione di proteine e micro-RNA sulla funzione degli adipociti

Alteration of adipocyte function contributes to the pathogenesis of metabolic diseases including Type 2 diabetes and insulin resistance. This highlights ...