Name: an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions
Uploaded: 2023-11-17T13:00:00
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同僚のVladimir Shilo氏、Vera Morozovа氏、Ulyana Rotskaya氏、Olga Polenogova氏、Oksana Tomilova氏には、フィールドと実験手順の整理と実行に協力していただいたことに感謝します。
この研究は、ロシア科学財団(プロジェクト番号:22-14-00309)の支援を受けました。

1.冬眠用ケージの説明
注:実験の目的に応じて、ケージの数は異なります。サンプリング日ごとに少なくとも3つのケージを使用してください。羽化するカブトムシの数を見積もるには、春まで土から取り出さない少なくとも3つの追加のケージを準備します。
<ol><li>ケージは、25×25×40cm(L × W × H)のサイズの硬い木製フレームで作られたものを使用してくださ?...

<ol>
	<li>Alyokhin, A., Benkovskaya, G., Udalov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle.">Colorado potato beetle.</a> Insect Pests of Potato. , 29-43 (2022).</li><li>Alyokhin, A., Kryukov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+a+potato+field.">Ecology of a potato field.</a> Insect Pests of Potato. , 451-462 (2022).</li><li>Lee Jr, R. E., Costanzo, J. P., Kaufman, P. E., Lee, M. R., Wyman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-nucleating+active+bacteria+reduce+the+cold-hardiness+of+the+freeze-intolerant+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Ice-nucleating active bacteria reduce the cold-hardiness of the freeze-intolerant Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Journal of Economic Entomology. 87 (2), 377-381 (1994).</li><li>Ushatinskaja, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+of+insects+and+its+modifications.">Diapause of insects and its modifications.</a> Journal of General Biology. 34, 194-215 (1973).</li><li>Zheng, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soil+moisture+on+overwintering+pupae+in+Spodopteraexigua+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Effect of soil moisture on overwintering pupae in Spodopteraexigua (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48, 365-371 (2013).</li><li>Hiiesaar, K., Metspalu, L., J&#245;udu, J., J&#245;gar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Over-wintering+of+the+Colorado+potato+beetle+(Leptinotarsa+decemlineata+Say)+in+field+conditions+and+factors+affecting+its+population+density+in+Estonia.">Over-wintering of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata Say) in field conditions and factors affecting its population density in Estonia.</a> Agronomy Research. 4 (1), 21-30 (2006).</li><li>Yocum, G. D., Rinehart, J. P., Chirumamilla-Chapara, A., Larson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+gene+expression+patterns+during+the+initiation+and+maintenance+phases+of+diapause+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Characterization of gene expression patterns during the initiation and maintenance phases of diapause in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (1), 32-39 (2009).</li><li>Yocum, G. D., Buckner, J. S., Fatland, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+internal+and+external+lipids+of+nondiapausing+and+diapause+initiation+phase+adult+Colorado+potato+beetles,+Leptinotarsa+decemlineata.">A comparison of internal and external lipids of nondiapausing and diapause initiation phase adult Colorado potato beetles, Leptinotarsa decemlineata.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 159 (3), 163-170 (2011).</li><li>Nikonorov, Y. M., Syrtlanova, L. A., Kitaev, K. A., Benkovskaya, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activity+of+genes+involved+in+diapause+regulation+in+the+Colorado+Potato+beetle+and+its+change+under+a+fipronil+impact.">Transcription activity of genes involved in diapause regulation in the Colorado Potato beetle and its change under a fipronil impact.</a> Russian Journal of Genetics: Applied Research. 8, 80-86 (2018).</li><li>Govaere, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+and+proteome+analyses+to+investigate+the+molecular+underpinnings+of+cold+response+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Transcriptome and proteome analyses to investigate the molecular underpinnings of cold response in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Cryobiology. 88, 54-63 (2019).</li><li>Lehmann, P., Westberg, M., Tang, P., Lindstr&#246;m, L., K&#228;kel&#228;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diapause+lipidomes+of+three+closely+related+beetle+species+reveal+mechanisms+for+tolerating+energetic+and+cold+stress+in+high-latitude+seasonal+environments.">The diapause lipidomes of three closely related beetle species reveal mechanisms for tolerating energetic and cold stress in high-latitude seasonal environments.</a> Frontiers in Physiology. 11, 576617 (2020).</li><li>Lebenzon, J. E., Torson, A. S., Sinclair, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+differentially+modulates+the+transcriptomes+of+fat+body+and+flight+muscle+in+the+Colorado+potato+beetle.">Diapause differentially modulates the transcriptomes of fat body and flight muscle in the Colorado potato beetle.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics. 40, 100906 (2021).</li><li>Lashomb, J. H., Ng, Y. S., Ghidiu, G., Green, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+spring+emergence+by+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Say)+(Coleoptera:+Chrysomelidae),+in+New+Jersey.">Description of spring emergence by the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), in New Jersey.</a> Environmental entomology. 13 (3), 907-910 (1984).</li><li>Cantwell, G. E., Cantelo, W. W., Schroder, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Beauveria+bassiana+on+underground+stages+of+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Effect of Beauveria bassiana on underground stages of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> The Great Lakes Entomologist. 19 (2), 6 (1986).</li><li>Fedorko, A., Bajan, C., Kmitowa, K., Wojciehowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+the+use+of+selected+microorganisms+to+control+the+Colorado+beetle+during+hibernation.">Effectiveness of the use of selected microorganisms to control the Colorado beetle during hibernation.</a> Ecological Studies. 3 (2), 127-134 (1977).</li><li>Gaugler, R., Costa, S. D., Lashomb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+efficacy+of+Beauveria+bassiana+soil+inoculations.">Stability and efficacy of Beauveria bassiana soil inoculations.</a> Environmental Entomology. 18 (3), 412-417 (1989).</li><li>Bajan, C., Kmitowa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+entomopathogenic+fungi+to+the+natural+winter+reduction+of+Colorado+beetle+adults.">Contribution of entomopathogenic fungi to the natural winter reduction of Colorado beetle adults.</a> Polish Ecological Studies. 3 (2), 107-114 (1977).</li><li>Milner, M., Kung, K. S., Wyman, J. A., Feldman, J., Nordheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+overwintering+mortality+of+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae)+by+manipulating+the+temperature+of+its+diapause+habitat.">Enhancing overwintering mortality of Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) by manipulating the temperature of its diapause habitat.</a> Journal of Economic Entomology. 85 (5), 1701-1708 (1992).</li><li>Do&#287;an, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+calcium+signaling+proteins+from+the+fat+body+of+the+Colorado+Potato+Beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae):+Implications+for+diapause+and+lipid+metabolism.">Characterization of calcium signaling proteins from the fat body of the Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae): Implications for diapause and lipid metabolism.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 133, 103549 (2021).</li><li>Benkovskaya, G. V., Udalov, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle+investigations+in+the+south+Urals.">Colorado potato beetle investigations in the south Urals.</a> Nova Science Publishers. , (2011).</li><li>Short, C. A., Hahn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+enough+for+the+winter?+Does+nutritional+status+affect+diapause.">Fat enough for the winter? Does nutritional status affect diapause.</a> Journal of Insect Physiology. , 104488 (2023).</li><li>McDonald, J. R., Bale, J. S., Walters, K. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+mortality+and+overwintering+of+the+western+flower+thrips+Frankliniella+occidentalis+(Thysanoptera:+Thripidae).">Low-temperature mortality and overwintering of the western flower thrips Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae).</a> Bulletin of Entomological Research. 87 (5), 497-505 (1997).</li></ol>

本研究は、CPBの越冬を研究するための提案手法により、異なる冬眠期間において十分な数の昆虫を獲得できることを示している。提示された技術の成功は、いくつかの独立した要因に依存しますが、その中で最も重要なのは気象条件です。雪の降らない寒い冬には、土がケージの奥深くまで凍ってしまうことがあります。この場合、すべてのカブトムシの死のリスクが大幅に上昇します<sup cl...

コロラド州のジャガイモのカブトムシLeptinotarsa decemlineata Say(CPB)は、ナス科植物、主にジャガイモSolanum tuberosum Lの重要な害虫です。この種の地理的範囲は1600万km2以上であり、常に拡大しています1。CPBは通性冬季休眠があり、温帯では冬眠が義務付けられています。休眠は短日日長によって誘発され、温度1によって調節される。成虫期には土に穴を掘って越冬します。緯度が上がるにつれて、冬眠期間が長くなります。温帯、特にその範囲の北方領土では、越冬は8月から9月までの5月から6月までの9か月間続きます(Noskovら、個人的な観察)。この期間中、CPBは、温帯の他の昆虫と同様に、不利な冬の条件にさらされ、耐寒性を高める必要があります。同時に、カブトムシが土壌と接触すると、さまざまな日和見微生物や病原性微生物による感染のリスクが高まります2。そのため、これらのカブトムシは冬眠中に一定レベルの免疫系活動を維持する必要があり、これもエネルギー的にコストがかかります。それにもかかわらず、昆虫が感染を生き延びたとしても、病気はその耐寒性を低下させる可能性があります3。低温がCPBの冬の死亡率の唯一の理由ではないことに注意する必要があります。酸素の欠乏も重要な役割を果たしており、条件によっては、冬の死亡率の主な要因となる可能性があります4,5。
CPBの冬季の自然死亡率は非常に高く、粘土質ローム土壌では100%に達することが知られています6。したがって、越冬はCPBライフサイクルにおいて最も重要な時期の1つです。それにもかかわらず、自然条件下でのCPB冬眠の生理機能、免疫系活性、生存率、およびその他のパラメータに関するデータはまだ限られています。休眠中およびコールドショックに応答するCPB成人の遺伝子発現の違いとさまざまな生理学的パラメーターに関する研究があります7,8,9,10,11,12;しかし、これらの分析は、主に、温度、湿度、および固有の病原体負荷の自然な変動のない実験室条件下での休眠または寒冷ストレスの誘発によって行われてきました。しかし、自然条件下で土壌から発掘して採取したこれらの甲虫の生理学に関する研究は重要です。1970年代から1980年代にかけて、自然条件下でのCPB越冬のさまざまな側面が活発に研究されました13,14,15,16,17,18。一方、これらの研究は、冬季の土壌からのCPB掘削を含みませんでした。また、CPBの冬眠を制御するための技術やケージの説明については、詳細には説明されていません。したがって、自然環境で越冬するCPBの生理機能の調査が必要である19。
この研究の目的は、自然条件下でCPB成虫の冬眠を制御する方法を開発し、テストすることでした。提案手法は、大陸性気候の野外条件下での冬眠中に、微生物学的、免疫学的、およびその他のアッセイのために所望の数のCPB個体を得ることを可能にします。この方法は、雪の下の土壌で越冬する他の昆虫種にも適用できます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-agar bacteriological purified</td>
			<td>diaGene</td>
			<td>1806.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bile Esculin Agar</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo Agar&#160;</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate-D</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>143140.1000&#934;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid&#160;</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>141034.1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani liquid medium</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>G009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical centrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>SCT-15ML-25-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>FBIS SRCAMB</td>
			<td>M<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65862/65862eq01v2.jpg" style="margin: auto;" />030/O61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Medigen</td>
			<td>PBS500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperatutre and humidity datalogger Ecklerk-M-11</td>
			<td>Relsib</td>
			<td></td>
			<td>Waterproof datalogger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions

温帯のジャガイモ Solanum tuberosum L.の主要な害虫の1つは、昆虫のコロラドジャガイモカブトムシ(CPB)です。CPBの免疫と疾患に関するほとんどの研究は、活発な摂食段階で実施されます。それにもかかわらず、これらのカブトムシはライフサイクルのほとんどを冬の休眠状態(冬眠)で過ごしますが、休息段階に関する研究は少ないです。この研究では、自然条件下でのCPB冬眠を調査する方法が開発され、テストされ、冬に十分な数の個体を収集する機会が提供されました。本稿では、CPBの生存率を評価し、冬眠のさまざまな段階にある感染性病原体を同定した。CPBによる死亡率は冬眠中に増加し、4月から5月にかけて最大値に達した。昆虫病原性真菌(Beauveria、 Isaria、 Lecanicillium)および細菌 Bacillus、Sphingobacterium、Peribacillus、Pseudomonas、および Serratia は、死んだ昆虫から分離されました。冬眠期間全体のカブトムシの生存率は61%でした。凍結または乾燥した甲虫は見つからず、提示された方法の成功を示しています。

以下の越冬CPBの結果は、土壌温度、生存率、感染性を示しています。
土壌温度のダイナミクス。 11月下旬から4月上旬にかけて、水深30cmのケージ内の氷点下の気温を記録しました(図1)。この期間の平均気温はマイナス3.3°C±0.1°C(標準誤差±平均)でした。最低気温は2月中旬のマイナス7.9°Cでした。
越冬CPBの?...

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An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions

ここでは、温帯の自然条件下でのコロラドジャガイモ甲虫の冬眠を研究する方法と、冬に甲虫を採集する技術を紹介します。この方法により、冬眠のどの段階でも、さまざまな分析のために必要な数の越冬個体を得ることができます。

コロラドジャガイモ甲虫の自然環境下での冬眠に関する実験的研究

One of the major pests of potato Solanum tuberosum L. in the temperate zone is the insect Colorado potato beetle (CPB). Most studies on the immunity and ...

コロラドジャガイモカブトムシは、温帯のジャガイモの最も深刻な害虫の1つです。この害虫の免疫と病因の研究は、主に活動段階で行われます。しかし、温帯では、この害虫はライフサイクルのほとんどを冬眠状態で過ごします。本研究では、コロラドジャガイモ甲虫の冬眠方法と冬季の甲虫採集技術について紹介する。この方法の主な利点は、冬眠の任意の期間にウイルス分析のために任意の数の越冬個体を取得できることです。ケージは、25×25×40cmの硬い木製フレームで作られたものを使用してください。ケージのフレームを作るには、厚さ2センチ以上、幅4センチ以上の木製スラットを使います。ケージの内側を5×3ミリメートル以下のサイズのステンレス鋼メッシュで覆います。木のホッチキスでメッシュを固定します。ケージの内側に、密度60グラム/平方メートルの黒い合成ジオテキスタイルを敷きます。高さ約60センチの合成半透明の通気性生地のチューブをケージの上部にしっかりと取り付けます。ケージの底に2本の強力なロープを交差させて固定し、必要に応じて土から引き出します。土に40センチの深さの穴を掘ります。枯れ草や干し草を穴に置きます。干し草や枯れ草がケージの壁と土の間に来るようにケージを内側に置きます。昆虫が集められたのと同じジャガイモ畑の土でケージを満たします。防水温度および湿度データロガーをケージ内の必要な深さに設置します。甲虫が入る3〜4週間前にケージ内にジャガイモの苗を植え、適度に水をやります。合成繊維のチューブをケージの外側に取り付けられた素材の棒に垂直に固定します。ジャガイモの植生の終わりに向かって無農薬のジャガイモ畑で成虫のカブトムシを手作業で集めます。集めたカブトムシは、昆虫に餌を与えるためにジャガイモのてっぺんが入った20リットルのプラスチックバケツに入れてからケージに入れます。通気性の良い布でバケツを覆います。合成繊維のメッシュで覆われたジャガイモの植物にカブトムシの200個以下の個体を配置します。ポテトトップスが消費されたら、水の入ったプラスチックの瓶にセットされた新しいものを追加し、その後毎日ポテトトップを交換します。すべてのカブトムシが越冬のために土に穴を掘ったら、棒から合成繊維のチューブをほどき、布を置きます。ケージの表面の上の雪を取り除きます。強力なシャベルで両側のケージを緩めます。ロープを使ってケージを土から引き出します。ケージをラボに持参します。ケージから土を少しずつ取り除き、大きな土を慎重に砕き、ピンセットを使用してカブトムシを分離します。生きたカブトムシを死体から分離します。生きた健康なカブトムシは、周囲の土壌を圧縮して空気空洞、いわゆる揺りかごを形成するため、土壌から簡単に分離されます。真菌によって殺されたカブトムシは、ミイラ化しているか、表面に菌糸体が見えます。バクテリアで分解する昆虫は暗いです。ふるいを通して土をふるいにかけ、すべてのカブトムシが孤立し、損傷を受けていないことを確認します。真菌感染または細菌分解の症状のある死体を、将来の識別のために個々の滅菌ファルコンチューブに入れます。生きたカブトムシは、湿らせた綿球が入った密閉された換気容器に分析されるまで、摂氏2度の温度で冷蔵庫に保管してください。血リンパ液を採取するには、インスリン針で大動脈の下の腹部の外側部分に穿刺します。腸を分離するには、ヘッドカプセルを切り取り、リン酸緩衝液を入れたペトリ皿にすべての内容物を絞り出します。腸を分離し、脂肪やマルピーギの血管から浄化します。前腸、中腸、後腸など、腸の目的の部分を分離します。脂肪体を分離するには、腸を分離した後、他の組織から分離します。死体から昆虫病原性真菌を分離するには、ミイラ化した死体を滅菌湿度室に入れます。カブトムシの内部内容物からの空中分生子または菌核を使用して、0.4%乳酸でSabouraudデキストロース寒天にメッキします。細菌腐敗の症状のある死体から細菌を分離します。カブトムシの頭を切り落とし、内部の内容物を絞り出し、チューブに集めて、バクテリアの培地にめっきします。11月末から4月上旬にかけて、水深30センチメートルのケージ内の気温が0度以下を記録しました。この期間の平均気温は摂氏3.3度0.1度でした。最低気温は2月中旬の7.9°C。昆虫の死亡率は冬眠中に増加し、羽化前の春に最大に達しました。カブトムシの最初の数は2, 000匹で、そのうち1, 470匹が生き残りました。したがって、冬眠中のカブトムシの生存率は61%でした530体の死体を分析したところ、冬眠期間中の53%が細菌分解の症状を特徴とし、25%が真菌感染の症状を特徴としていました。Beauveriaは昆虫病原性真菌の隔離された文化の間で支配した。Metarhizium、冬虫夏草、Lecanicilliumはあまり一般的ではありませんでした。細菌分解の症状を呈した死体から分離された細菌の中には、バチルス属、スフィンゴバクテリウム属、ペリバチルス属、シュードモナス属、セラチア属、ラーネラ属、グルタミシバクター属に属する種が同定された。この方法を使用すると、冬に畑からコロラドポテトビートルを入手する問題を解決できます。それはあなたが昆虫の低い死亡率であなたが必要とするだけ多くの個体を得ることを可能にします。カブトムシの冬眠のさまざまな側面の研究は、この害虫の防除へのアプローチを改善するために、基礎的および応用的観点から重要です。そしてもちろん、この技術は土壌で越冬する他の昆虫種にも適用できます。

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