Name: an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions
Uploaded: 2023-11-17T13:00:00
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현장 및 실험실 절차의 구성 및 실행에 도움을 주신 동료 Vladimir Shilo, Vera Morozovа, Ulyana Rotskaya, Olga Polenogova 및 Oksana Tomilova에게 감사드립니다.
이 연구는 러시아 과학 재단(Russian Science Foundation, 프로젝트 번호 22-14-00309)의 지원을 받았습니다.

1. 동면을 위한 감금소의 묘사
참고: 실험의 목적에 따라 케이지 수가 달라집니다. 샘플링 날짜당 최소 3개의 케이지를 사용하십시오. 출현 할 딱정벌레의 수를 추정하려면 봄까지 토양에서 꺼내지 않을 최소 3 개의 추가 케이지를 준비하십시오.
<ol><li>크기가 25 × 25 × 40cm(L × W × H)인 단단한 나무 프레임으로 만든 케이지를 사용하십시오.</li>
	<li>케이지 프레임을...

<ol>
	<li>Alyokhin, A., Benkovskaya, G., Udalov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle.">Colorado potato beetle.</a> Insect Pests of Potato. , 29-43 (2022).</li><li>Alyokhin, A., Kryukov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+a+potato+field.">Ecology of a potato field.</a> Insect Pests of Potato. , 451-462 (2022).</li><li>Lee Jr, R. E., Costanzo, J. P., Kaufman, P. E., Lee, M. R., Wyman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-nucleating+active+bacteria+reduce+the+cold-hardiness+of+the+freeze-intolerant+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Ice-nucleating active bacteria reduce the cold-hardiness of the freeze-intolerant Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Journal of Economic Entomology. 87 (2), 377-381 (1994).</li><li>Ushatinskaja, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+of+insects+and+its+modifications.">Diapause of insects and its modifications.</a> Journal of General Biology. 34, 194-215 (1973).</li><li>Zheng, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soil+moisture+on+overwintering+pupae+in+Spodopteraexigua+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Effect of soil moisture on overwintering pupae in Spodopteraexigua (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48, 365-371 (2013).</li><li>Hiiesaar, K., Metspalu, L., J&#245;udu, J., J&#245;gar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Over-wintering+of+the+Colorado+potato+beetle+(Leptinotarsa+decemlineata+Say)+in+field+conditions+and+factors+affecting+its+population+density+in+Estonia.">Over-wintering of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata Say) in field conditions and factors affecting its population density in Estonia.</a> Agronomy Research. 4 (1), 21-30 (2006).</li><li>Yocum, G. D., Rinehart, J. P., Chirumamilla-Chapara, A., Larson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+gene+expression+patterns+during+the+initiation+and+maintenance+phases+of+diapause+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Characterization of gene expression patterns during the initiation and maintenance phases of diapause in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (1), 32-39 (2009).</li><li>Yocum, G. D., Buckner, J. S., Fatland, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+internal+and+external+lipids+of+nondiapausing+and+diapause+initiation+phase+adult+Colorado+potato+beetles,+Leptinotarsa+decemlineata.">A comparison of internal and external lipids of nondiapausing and diapause initiation phase adult Colorado potato beetles, Leptinotarsa decemlineata.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 159 (3), 163-170 (2011).</li><li>Nikonorov, Y. M., Syrtlanova, L. A., Kitaev, K. A., Benkovskaya, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activity+of+genes+involved+in+diapause+regulation+in+the+Colorado+Potato+beetle+and+its+change+under+a+fipronil+impact.">Transcription activity of genes involved in diapause regulation in the Colorado Potato beetle and its change under a fipronil impact.</a> Russian Journal of Genetics: Applied Research. 8, 80-86 (2018).</li><li>Govaere, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+and+proteome+analyses+to+investigate+the+molecular+underpinnings+of+cold+response+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Transcriptome and proteome analyses to investigate the molecular underpinnings of cold response in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Cryobiology. 88, 54-63 (2019).</li><li>Lehmann, P., Westberg, M., Tang, P., Lindstr&#246;m, L., K&#228;kel&#228;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diapause+lipidomes+of+three+closely+related+beetle+species+reveal+mechanisms+for+tolerating+energetic+and+cold+stress+in+high-latitude+seasonal+environments.">The diapause lipidomes of three closely related beetle species reveal mechanisms for tolerating energetic and cold stress in high-latitude seasonal environments.</a> Frontiers in Physiology. 11, 576617 (2020).</li><li>Lebenzon, J. E., Torson, A. S., Sinclair, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+differentially+modulates+the+transcriptomes+of+fat+body+and+flight+muscle+in+the+Colorado+potato+beetle.">Diapause differentially modulates the transcriptomes of fat body and flight muscle in the Colorado potato beetle.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics. 40, 100906 (2021).</li><li>Lashomb, J. H., Ng, Y. S., Ghidiu, G., Green, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+spring+emergence+by+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Say)+(Coleoptera:+Chrysomelidae),+in+New+Jersey.">Description of spring emergence by the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), in New Jersey.</a> Environmental entomology. 13 (3), 907-910 (1984).</li><li>Cantwell, G. E., Cantelo, W. W., Schroder, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Beauveria+bassiana+on+underground+stages+of+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Effect of Beauveria bassiana on underground stages of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> The Great Lakes Entomologist. 19 (2), 6 (1986).</li><li>Fedorko, A., Bajan, C., Kmitowa, K., Wojciehowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+the+use+of+selected+microorganisms+to+control+the+Colorado+beetle+during+hibernation.">Effectiveness of the use of selected microorganisms to control the Colorado beetle during hibernation.</a> Ecological Studies. 3 (2), 127-134 (1977).</li><li>Gaugler, R., Costa, S. D., Lashomb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+efficacy+of+Beauveria+bassiana+soil+inoculations.">Stability and efficacy of Beauveria bassiana soil inoculations.</a> Environmental Entomology. 18 (3), 412-417 (1989).</li><li>Bajan, C., Kmitowa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+entomopathogenic+fungi+to+the+natural+winter+reduction+of+Colorado+beetle+adults.">Contribution of entomopathogenic fungi to the natural winter reduction of Colorado beetle adults.</a> Polish Ecological Studies. 3 (2), 107-114 (1977).</li><li>Milner, M., Kung, K. S., Wyman, J. A., Feldman, J., Nordheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+overwintering+mortality+of+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae)+by+manipulating+the+temperature+of+its+diapause+habitat.">Enhancing overwintering mortality of Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) by manipulating the temperature of its diapause habitat.</a> Journal of Economic Entomology. 85 (5), 1701-1708 (1992).</li><li>Do&#287;an, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+calcium+signaling+proteins+from+the+fat+body+of+the+Colorado+Potato+Beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae):+Implications+for+diapause+and+lipid+metabolism.">Characterization of calcium signaling proteins from the fat body of the Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae): Implications for diapause and lipid metabolism.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 133, 103549 (2021).</li><li>Benkovskaya, G. V., Udalov, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle+investigations+in+the+south+Urals.">Colorado potato beetle investigations in the south Urals.</a> Nova Science Publishers. , (2011).</li><li>Short, C. A., Hahn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+enough+for+the+winter?+Does+nutritional+status+affect+diapause.">Fat enough for the winter? Does nutritional status affect diapause.</a> Journal of Insect Physiology. , 104488 (2023).</li><li>McDonald, J. R., Bale, J. S., Walters, K. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+mortality+and+overwintering+of+the+western+flower+thrips+Frankliniella+occidentalis+(Thysanoptera:+Thripidae).">Low-temperature mortality and overwintering of the western flower thrips Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae).</a> Bulletin of Entomological Research. 87 (5), 497-505 (1997).</li></ol>

이 연구는 CPB의 월동을 연구하기 위해 제안된 방법을 통해 다양한 동면 기간에 충분한 수의 곤충을 얻을 수 있음을 보여줍니다. 제시된 기술의 성공 여부는 몇 가지 독립적인 요인에 달려 있으며 그 중 가장 중요한 것은 기상 조건입니다. 춥고 눈이 내리지 않는 겨울에는 토양이 케이지 전체 깊이까지 얼어 붙을 수 있습니다. 이 경우 모든 딱정벌레의 사망 위험은 크게 증가합니다18</s...

콜로라도 감자 딱정벌레 Leptinotarsa decemlineata Say (CPB)는 Solanaceae 식물의 중요한 해충으로, 주로 감자 Solanum tuberosum L입니다. 이 종의 지리적 범위는 1,600만km2 이상이며 지속적으로 확장되고있다.1. CPB는 겨울철 휴지기가 있으며 온대 지역에서는 동면이 필수입니다. 일시정지는 짧은 날의 광주기에 의해 유도되고 온도1에 의해 조절됩니다. 이 딱정벌레는 성충 단계에서 토양에 굴을 파고 겨울을 납니다. 위도가 증가함에 따라 최대 절전 기간이 길어집니다. 온대 지역, 특히 그 범위의 북부 영토에서 월동은 8 월 -9 월부터 5 월 -6 월까지 최대 9 개월 동안 지속됩니다 (Noskov et al., personal observations). 이 기간 동안 CPB는 온대 지역의 다른 곤충과 마찬가지로 불리한 겨울 조건에 노출되어 추위에 대한 내성을 높여야 합니다. 동시에 딱정벌레가 토양과 접촉하면 다양한 기회 및 병원성 미생물에 의한 감염 위험이 증가합니다2. 따라서 이 딱정벌레는 겨울잠을 자는 동안 일정 수준의 면역 체계 활동을 유지해야 하며, 이는 또한 에너지 비용이 많이 듭니다. 그럼에도 불구하고, 곤충이 감염에서 살아남는다 하더라도, 이 질병은 내한성을 감소시킬 수 있다3. 낮은 온도가 CPB의 겨울 사망률의 유일한 이유는 아니라는 점에 유의해야 합니다. 산소 부족도 중요한 역할을 하며, 일부 조건에서는 겨울철 사망률의 주요 요인이 될 수 있다 4,5.
CPB의 겨울철 자연 사망률은 매우 높을 수 있으며, 점토양토 토양에서 100%에 도달할 수 있는 것으로 알려져 있다6. 따라서 월동은 CPB 수명 주기에서 가장 중요한 기간 중 하나입니다. 그럼에도 불구하고 자연 조건에서 CPB 동면의 생리학, 면역 체계 활동, 생존 및 기타 매개변수에 대한 데이터는 여전히 제한적입니다. CPB 성인의 일시적 휴지기 및 냉기 쇼크에 대한 반응으로 유전자 발현 및 다양한 생리학적 매개변수에 대한 연구가있습니다 7,8,9,10,11,12; 그러나 이러한 분석은 주로 온도, 습도 및 토착 병원균 부하의 자연적인 변동 없이 실험실 조건에서 일시정지 또는 저온 스트레스를 유도하여 수행되었습니다. 그럼에도 불구하고 자연 조건에서 토양에서 굴착하여 수집 한이 딱정벌레의 생리학에 대한 연구는 중요합니다. 1970년대-1980년대에 자연 조건 하에서 월동하는 CPB의 다양한 측면이 활발히 연구되었다 13,14,15,16,17,18. 반면에, 이 연구들은 겨울철에 토양에서 CPB를 굴착하는 것을 포함하지 않았다. 또한, CPB의 제어된 동면을 위한 기술 및 케이지에 대한 설명은 상세히 제공되지 않는다. 따라서 자연 환경에서 월동하는 CPB의 생리학에 대한 연구가 필요하다19.
이 연구의 목적은 자연 조건에서 CPB 성인의 통제된 동면 방법을 개발하고 테스트하는 것이었습니다. 제안된 방법은 대륙성 기후의 현장 조건 하에서 동면 중에 미생물학적, 면역학적 및 기타 분석을 위해 원하는 수의 CPB 개체를 얻을 수 있습니다. 이 방법은 눈 아래 토양에서 월동하는 다른 곤충 종에 적용하고 적용 할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-agar bacteriological purified</td>
			<td>diaGene</td>
			<td>1806.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bile Esculin Agar</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo Agar&#160;</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate-D</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>143140.1000&#934;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid&#160;</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>141034.1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani liquid medium</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>G009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical centrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>SCT-15ML-25-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>FBIS SRCAMB</td>
			<td>M<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65862/65862eq01v2.jpg" style="margin: auto;" />030/O61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Medigen</td>
			<td>PBS500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperatutre and humidity datalogger Ecklerk-M-11</td>
			<td>Relsib</td>
			<td></td>
			<td>Waterproof datalogger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions

온대 지역의 감자 Solanum tuberosum L.의 주요 해충 중 하나는 곤충 콜로라도 감자 딱정벌레 (CPB)입니다. CPB의 면역과 질병에 대한 대부분의 연구는 적극적인 섭식 단계에서 수행됩니다. 그럼에도 불구하고 휴식 단계에 대한 연구는 적지만 이 딱정벌레는 생애 주기의 대부분을 겨울 휴면(동면) 상태에서 보냅니다. 이 연구에서는 자연 조건에서 CPB 동면을 조사하는 방법을 개발하고 테스트하여 겨울에 충분한 수의 개체를 수집할 수 있는 기회를 제공했습니다. 이 논문에서는 CPB 생존율을 평가하고 동면의 여러 단계에서 감염원을 확인했습니다. CPB 사망률은 동면 기간 동안 증가하여 4-5월에 최대치에 도달했습니다. 곤충병원성 곰팡이(Beauveria, Isaria, Lecanicillium)와 박테리아 Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas 및 Serratia 를 죽은 곤충에서 분리했습니다. 전체 동면 기간 동안 딱정벌레의 생존율은 61%였습니다. 얼거나 건조된 딱정벌레는 발견되지 않았으며, 이는 제시된 방법의 성공을 나타냅니다.

월동 CPB에 대한 아래 결과는 토양 온도, 생존 및 감염을 보여줍니다.
토양 온도 역학. 11월 말부터 4월 초까지 30cm 깊이의 케이지에서 영하의 온도가 기록되었습니다(그림 1). 이 기간의 평균 기온은 영하 3.3°C± 0.1°C(평균 ± 표준 오차)였습니다. 최저 기온은 2월 중순의 영하 7.9°C였다.
월동 CPB의 생존. 곤?...

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An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions

여기에서는 온대 지역의 자연 조건에서 콜로라도 감자 딱정벌레의 동면을 연구하는 방법과 겨울에 딱정벌레를 수집하는 기술을 제시합니다. 이 방법을 사용하면 동면의 모든 단계에서 다양한 분석을 위해 원하는 수의 월동 개체를 얻을 수 있습니다.

자연 조건에서의 콜로라도 감자 딱정벌레 동면에 대한 실험적 연구

One of the major pests of potato Solanum tuberosum L. in the temperate zone is the insect Colorado potato beetle (CPB). Most studies on the immunity and ...

콜로라도 감자 딱정벌레는 온대 지역에서 가장 심각한 감자 해충 중 하나입니다. 이 해충의 면역 및 발병 기전에 대한 연구는 주로 활성 단계에서 수행됩니다. 그러나 온대 지역에서이 해충은 대부분의 라이프 사이클을 동면 상태로 보냅니다.본 연구에서는 콜로라도감자딱정벌레의 동면 방법과 겨울철 딱정벌레 채집 기법을 제시한다. 이 방법의 가장 큰 장점은 동면 기간에 바이러스 분석을 위해 월동하는 개체를 원하는 수만큼 얻을 수 있다는 것입니다. 25 x 25 x 40cm 크기의 단단한 나무 프레임으로 만든 케이지를 사용하십시오.케이지 프레임을 만들려면 두께가 최소 2cm, 너비가 4cm 인 나무 칸막이를 사용하십시오. 케이지 내부를 5 x 3mm 이하의 스테인리스 스틸 메쉬로 덮습니다. 나무 스테이플러로 메쉬를 고정하십시오.케이지 내부를 평방 미터당 60g의 밀도를 가진 검은색 합성 지오텍스타일로 깔아줍니다. 약 60cm 높이의 통기성 합성 반투명 통기성 직물 튜브를 케이지 상단에 단단히 부착합니다. 두 개의 강한 로프를 케이지 바닥에 교차시키고 고정하여 필요할 때 토양에서 빼냅니다.토양에 40cm 깊이의 구멍을 파십시오. 구멍에 마른 풀이나 건초를 놓습니다. 건초나 마른 풀이 케이지의 벽과 토양 사이에 오도록 케이지를 내부에 놓습니다.곤충이 모이는 감자밭의 흙으로 새장을 채웁니다. 방수 온도 및 습도 데이터 로거를 필요한 깊이의 케이지에 설치합니다. 딱정벌레가 도입되기 3-4주 전에 케이지 안에 감자 묘목을 심고 적당히 물을 줍니다.케이지 외부에 설치된 재료 막대에 합성 섬유 튜브를 수직으로 고정합니다. 감자 채소가 끝날 무렵 무농약 감자 밭에서 성인 딱정벌레를 수동으로 수집합니다. 수집된 딱정벌레를 새장에 넣기 전에 곤충에게 먹이를 주기 위한 감자 꼭지가 들어 있는 20리터 플라스틱 양동이에 보관하십시오.통기성 있는 천으로 양동이를 덮으십시오. 200마리 이하의 딱정벌레를 합성 섬유 메쉬로 덮인 감자 식물에 놓으십시오. 감자 꼭지를 다 먹으면 물이 담긴 플라스틱 병에 담긴 신선한 감자 꼭지를 넣고 그 후 매일 감자 꼭지를 교체하십시오.모든 딱정벌레가 겨울을 나기 위해 토양에 굴을 파고 들어가면 막대기에서 합성 섬유 튜브를 풀고 천을 눕힙니다. 케이지 표면 위의 눈을 제거하십시오. 강한 삽으로 양쪽의 케이지를 풉니다.밧줄을 사용하여 케이지를 흙 밖으로 빼냅니다. 케이지를 실험실로 가져옵니다. 케이지에서 흙을 조금씩 제거하고 큰 흙 조각을 조심스럽게 부수고 핀셋을 사용하여 딱정벌레를 분리하십시오.살아있는 딱정벌레와 시체를 분리하십시오. 살아 있고 건강한 딱정벌레는 주변에 토양을 압축하여 소위 요람이라고 하는 공기 구멍을 형성하므로 토양에서 쉽게 분리됩니다. 곰팡이에 의해 죽은 딱정벌레는 미라가 되거나 표면에 눈에 띄는 균사체가 있습니다.세균으로 분해되는 곤충은 어둡습니다. 체로 토양을 체로 쳐서 모든 딱정벌레가 격리되고 손상되지 않았는지 확인하십시오. 진균 감염 또는 박테리아 분해 증상이 있는 시체를 개별 멸균 Falcon 튜브에 넣어 향후 식별을 위해 보관합니다.살아있는 딱정벌레는 축축한 면봉이 들어 있는 밀폐된 통풍 용기에 분석할 때까지 섭씨 2도의 냉장고에 보관합니다. 혈림프를 채취하려면 인슐린 바늘로 대동맥 아래 복부 측면에 구멍을 뚫습니다. 장을 분리하려면 헤드 캡슐을 잘라내고 인산염 완충액이 있는 페트리 접시에 모든 내용물을 짜냅니다.장을 분리하고 지방과 말피기 혈관에서 정화하십시오. 앞창자, 중창자 또는 뒷창자와 같은 장의 원하는 부분을 분리합니다. 지방체를 분리하려면 장을 분리한 후 다른 조직과 분리해야 합니다.시체에서 곤충병원성 곰팡이를 분리하려면 미라가 된 시체를 멸균 습도 챔버에 넣습니다. 0.4 % 젖산으로 Sabouraud 포도당 한천에 도금하기 위해 딱정벌레의 내부 내용물에서 공중 분생포자 또는 경화증을 사용하십시오. 박테리아 부패 증상이 있는 시체에서 박테리아를 분리합니다.딱정벌레의 머리를 자르고 내부 내용물을 짜낸 다음 박테리아에 대한 배지에 후속 도금을 위해 튜브에 모으십시오. 11월 말부터 4월 초까지 수심 30cm의 케이지 내 기온이 영하로 유지되었습니다. 이 기간의 평균 기온은 섭씨 3.3도에서 0.1도였습니다.가장 낮은 기온은 2월 중순의 섭씨 7.9도였습니다. 곤충의 사망률은 동면 기간 동안 증가했고 출현 전 봄에 최대치에 도달했습니다. 초기 딱정벌레의 수는 2,000 마리였으며 그 중 1,470 마리가 생존했습니다.따라서 동면 기간 동안 딱정벌레의 생존율은 61%530구의 사체를 분석한 결과 동면 기간 동안 53%가 세균 분해 증상을 보였고 25%는 곰팡이 감염 증상을 보였다. Beauveria는 곤충 병원성 균류의 고립 된 배양 중에서 지배적이었습니다. 메타리지움(Metarhizium), 동충하초(Cordyceps) 및 레카니실리움(Lecanicillium)은 훨씬 덜 흔했습니다.세균 분해 증상이 있는 시체에서 분리한 박테리아 중에서 Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella 및 Glutamicibacter 속에 속하는 종이 확인되었습니다. 이 방법을 사용하면 겨울에 밭에서 콜로라도 감자 딱정벌레를 얻는 문제를 해결할 수 있습니다. 곤충의 낮은 사망률로 필요한만큼 많은 개체를 얻을 수 있습니다.딱정벌레 동면의 다양한 측면에 대한 연구는 이 해충 방제에 대한 접근 방식을 개선하기 위한 기본 및 응용 관점에서 중요합니다. 물론 이 기술은 토양에서 월동하는 다른 곤충 종에도 적용할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

도마뱀의 운동의 속도와 방향에 시각 민감도 테스트

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

연구

생물학

Computer-Generated Animal Model Stimuli

컴퓨터가 만든 동물 모델 자극

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase

인터뷰 : 진화 Recombinase을 사용하여 HIV - 1의 DNA 절단 Proviral

HIV-1 integrates into the host chromosome of infected cells and persists as a provirus flanked by long terminal repeats. Current treatment strategies ...

Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution

자연 점액 배포를 공부하기 위해 떼어 낸, 냉동 조직을 사용하여

Mucins are complex and heavily glycosylated O-linked glycoproteins, which contain more than 70% carbohydrate by weight1-3. Secreted mucins, produced by ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

종양 상체의 높은 처리량의 이미지 분석 : 자동으로 정확하게 상체의 크기를 측정하는 사​​용자 친화적 인 소프트웨어 응용 프로그램

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

레드 밀가루 딱정벌레의 애벌레 RNA 간섭,<em&gt; Tribolium castaneum</em

The red flour beetle, Tribolium&#160;castaneum, offers a repertoire of experimental tools for genetic and developmental studies, including a fully ...

Applications of the Single-probe: Mass Spectrometry Imaging and Single Cell Analysis under Ambient Conditions

단일 프로브의 응용 프로그램 : 주변 조건에서 질량 분석 이미징 및 단일 세포 분석

Mass spectrometry imaging (MSI) and in-situ single cell mass spectrometry (SCMS) analysis under ambient conditions are two emerging fields with great ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Co-immunoprecipitation Assay Using Endogenous Nuclear Proteins from Cells Cultured Under Hypoxic Conditions

Hypoxic 조건 하에서 경작 하는 세포에서 내 생 적인 핵 단백질을 사용 하 여 공동 immunoprecipitation 분석 결과

Low oxygen levels (hypoxia) trigger a variety of adaptive responses with the Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) complex acting as a master regulator. ...

An Adipocyte Cell Culture Model to Study the Impact of Protein and Micro-RNA Modulation on Adipocyte Function

아디포세포 기능에 대한 단백질 및 마이크로 RNA 변조의 영향을 연구하는 세포 배양 모델

Alteration of adipocyte function contributes to the pathogenesis of metabolic diseases including Type 2 diabetes and insulin resistance. This highlights ...