Name: an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions
Uploaded: 2023-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions at JoVE.com

Vi takker våre kolleger Vladimir Shilo, Vera Morozovа, Ulyana Rotskaya, Olga Polenogova og Oksana Tomilova for deres hjelp med organisering og gjennomføring av felt- og laboratorieprosedyrer.
Forskningen ble støttet av Russian Science Foundation, prosjekt nr. 22-14-00309.

1. Beskrivelse av burene for dvalemodus
MERK: Avhengig av målene med forsøket, varierer antall bur. Bruk minst tre merder per prøvetakingsdato. For å estimere antall biller som vil dukke opp, forberede minst tre ekstra bur, som ikke vil bli tatt ut av jorden til våren.
<ol><li>Bruk bur laget av en stiv treramme med en størrelse på 25 × 25 × 40 cm (L × B × H).</li>
	<li>For å bygge en ramme for buret, bruk trelast minst 2 cm tykk og 4 cm bred.</li>
	<li>Dekk innsi...

<ol>
	<li>Alyokhin, A., Benkovskaya, G., Udalov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle.">Colorado potato beetle.</a> Insect Pests of Potato. , 29-43 (2022).</li><li>Alyokhin, A., Kryukov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+a+potato+field.">Ecology of a potato field.</a> Insect Pests of Potato. , 451-462 (2022).</li><li>Lee Jr, R. E., Costanzo, J. P., Kaufman, P. E., Lee, M. R., Wyman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-nucleating+active+bacteria+reduce+the+cold-hardiness+of+the+freeze-intolerant+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Ice-nucleating active bacteria reduce the cold-hardiness of the freeze-intolerant Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Journal of Economic Entomology. 87 (2), 377-381 (1994).</li><li>Ushatinskaja, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+of+insects+and+its+modifications.">Diapause of insects and its modifications.</a> Journal of General Biology. 34, 194-215 (1973).</li><li>Zheng, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soil+moisture+on+overwintering+pupae+in+Spodopteraexigua+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Effect of soil moisture on overwintering pupae in Spodopteraexigua (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48, 365-371 (2013).</li><li>Hiiesaar, K., Metspalu, L., J&#245;udu, J., J&#245;gar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Over-wintering+of+the+Colorado+potato+beetle+(Leptinotarsa+decemlineata+Say)+in+field+conditions+and+factors+affecting+its+population+density+in+Estonia.">Over-wintering of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata Say) in field conditions and factors affecting its population density in Estonia.</a> Agronomy Research. 4 (1), 21-30 (2006).</li><li>Yocum, G. D., Rinehart, J. P., Chirumamilla-Chapara, A., Larson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+gene+expression+patterns+during+the+initiation+and+maintenance+phases+of+diapause+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Characterization of gene expression patterns during the initiation and maintenance phases of diapause in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (1), 32-39 (2009).</li><li>Yocum, G. D., Buckner, J. S., Fatland, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+internal+and+external+lipids+of+nondiapausing+and+diapause+initiation+phase+adult+Colorado+potato+beetles,+Leptinotarsa+decemlineata.">A comparison of internal and external lipids of nondiapausing and diapause initiation phase adult Colorado potato beetles, Leptinotarsa decemlineata.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 159 (3), 163-170 (2011).</li><li>Nikonorov, Y. M., Syrtlanova, L. A., Kitaev, K. A., Benkovskaya, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activity+of+genes+involved+in+diapause+regulation+in+the+Colorado+Potato+beetle+and+its+change+under+a+fipronil+impact.">Transcription activity of genes involved in diapause regulation in the Colorado Potato beetle and its change under a fipronil impact.</a> Russian Journal of Genetics: Applied Research. 8, 80-86 (2018).</li><li>Govaere, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+and+proteome+analyses+to+investigate+the+molecular+underpinnings+of+cold+response+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Transcriptome and proteome analyses to investigate the molecular underpinnings of cold response in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Cryobiology. 88, 54-63 (2019).</li><li>Lehmann, P., Westberg, M., Tang, P., Lindstr&#246;m, L., K&#228;kel&#228;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diapause+lipidomes+of+three+closely+related+beetle+species+reveal+mechanisms+for+tolerating+energetic+and+cold+stress+in+high-latitude+seasonal+environments.">The diapause lipidomes of three closely related beetle species reveal mechanisms for tolerating energetic and cold stress in high-latitude seasonal environments.</a> Frontiers in Physiology. 11, 576617 (2020).</li><li>Lebenzon, J. E., Torson, A. S., Sinclair, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+differentially+modulates+the+transcriptomes+of+fat+body+and+flight+muscle+in+the+Colorado+potato+beetle.">Diapause differentially modulates the transcriptomes of fat body and flight muscle in the Colorado potato beetle.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics. 40, 100906 (2021).</li><li>Lashomb, J. H., Ng, Y. S., Ghidiu, G., Green, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+spring+emergence+by+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Say)+(Coleoptera:+Chrysomelidae),+in+New+Jersey.">Description of spring emergence by the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), in New Jersey.</a> Environmental entomology. 13 (3), 907-910 (1984).</li><li>Cantwell, G. E., Cantelo, W. W., Schroder, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Beauveria+bassiana+on+underground+stages+of+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Effect of Beauveria bassiana on underground stages of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> The Great Lakes Entomologist. 19 (2), 6 (1986).</li><li>Fedorko, A., Bajan, C., Kmitowa, K., Wojciehowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+the+use+of+selected+microorganisms+to+control+the+Colorado+beetle+during+hibernation.">Effectiveness of the use of selected microorganisms to control the Colorado beetle during hibernation.</a> Ecological Studies. 3 (2), 127-134 (1977).</li><li>Gaugler, R., Costa, S. D., Lashomb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+efficacy+of+Beauveria+bassiana+soil+inoculations.">Stability and efficacy of Beauveria bassiana soil inoculations.</a> Environmental Entomology. 18 (3), 412-417 (1989).</li><li>Bajan, C., Kmitowa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+entomopathogenic+fungi+to+the+natural+winter+reduction+of+Colorado+beetle+adults.">Contribution of entomopathogenic fungi to the natural winter reduction of Colorado beetle adults.</a> Polish Ecological Studies. 3 (2), 107-114 (1977).</li><li>Milner, M., Kung, K. S., Wyman, J. A., Feldman, J., Nordheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+overwintering+mortality+of+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae)+by+manipulating+the+temperature+of+its+diapause+habitat.">Enhancing overwintering mortality of Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) by manipulating the temperature of its diapause habitat.</a> Journal of Economic Entomology. 85 (5), 1701-1708 (1992).</li><li>Do&#287;an, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+calcium+signaling+proteins+from+the+fat+body+of+the+Colorado+Potato+Beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae):+Implications+for+diapause+and+lipid+metabolism.">Characterization of calcium signaling proteins from the fat body of the Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae): Implications for diapause and lipid metabolism.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 133, 103549 (2021).</li><li>Benkovskaya, G. V., Udalov, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle+investigations+in+the+south+Urals.">Colorado potato beetle investigations in the south Urals.</a> Nova Science Publishers. , (2011).</li><li>Short, C. A., Hahn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+enough+for+the+winter?+Does+nutritional+status+affect+diapause.">Fat enough for the winter? Does nutritional status affect diapause.</a> Journal of Insect Physiology. , 104488 (2023).</li><li>McDonald, J. R., Bale, J. S., Walters, K. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+mortality+and+overwintering+of+the+western+flower+thrips+Frankliniella+occidentalis+(Thysanoptera:+Thripidae).">Low-temperature mortality and overwintering of the western flower thrips Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae).</a> Bulletin of Entomological Research. 87 (5), 497-505 (1997).</li></ol>

Denne studien viser at den foreslåtte metoden for å studere overvintring av CPB gjør det mulig for oss å skaffe et tilstrekkelig antall insekter i forskjellige dvaleperioder. Suksessen til den presenterte teknikken avhenger av flere uavhengige faktorer, hvorav det viktigste er værforholdene. I en kald, snøfri vinter kan jorden fryse til hele dybden av buret. I dette tilfellet øker risikoen for død av alle biller betydelig18. Bjelkens overlevelse avhenger av en kombinasjon av mange faktorer...

Colorado potetbille Leptinotarsa decemlineata Say (CPB) er et viktig av Solanaceae planter, hovedsakelig potet Solanum tuberosum L. Det geografiske området for denne arten er mer enn 16 millioner km2 og utvides stadig1. CPB har fakultativ vinterdiapause, og dvalemodus er obligatorisk i den tempererte sonen. Diapausen induseres av en fotoperiode på kort dag og moduleres av temperatur1. Disse billene overvintrer i voksenstadiet ved å grave seg ned i jord. Med økende breddegrader strekker varigheten av dvalemodusperioden seg. I den tempererte sonen, spesielt på nordlige områder av sitt område, varer overvintringen opptil 9 måneder: fra august-september til mai-juni (Noskov et al., personlige observasjoner). I løpet av denne perioden er CPB - akkurat som alle andre insekter i den tempererte sonen - utsatt for ugunstige vinterforhold og må øke sin kuldetoleranse. Samtidig øker kontakt av biller med jord risikoen for infeksjon av ulike opportunistiske og patogene mikroorganismer2. Derfor må disse billene opprettholde et visst nivå av immunsystemaktivitet under dvalemodus, noe som også er energisk kostbart. Likevel, selv om insektet overlever en infeksjon, kan sykdommen redusere sin kalde hardførhet3. Det skal bemerkes at lav temperatur ikke er den eneste grunnen til vinterdødeligheten til CPB. En viktig rolle spilles også av mangel på oksygen, og under noen forhold kan det være hovedfaktoren for vinterdødelighet 4,5.
Det er kjent at naturlig vinterdødelighet av CPB kan være svært høy, og nå 100% i leirleirjord6. Dermed er overvintring en av de mest avgjørende periodene i CPBs livssyklus. Likevel er data om fysiologi, immunsystemaktivitet, overlevelse og andre parametere for CPB-dvalemodus under naturlige forhold fortsatt begrenset. Det er studier på differensielt genuttrykk og ulike fysiologiske parametere hos CPB-voksne under diapausen og som respons på kuldesjokk 7,8,9,10,11,12; Imidlertid har disse analysene hovedsakelig blitt utført ved induksjon av diapause eller kuldespenning under laboratorieforhold uten naturlige svingninger i temperatur, fuktighet og naturlig patogenbelastning. Likevel er forskning på fysiologien til disse billene samlet inn ved utgraving fra jord under naturlige forhold viktig. Ulike aspekter ved CPB-overvintring under naturlige forhold ble aktivt studert på 1970-1980-tallet 13,14,15,16,17,18. På den annen side involverte disse studiene ikke CPB-utgraving fra jorda om vinteren. I tillegg er en teknikk for kontrollert dvalemodus av CPB og en beskrivelse av burene ikke gitt i detalj. Derfor er det nødvendig med undersøkelse av fysiologien til CPB som overvintrer i naturlige omgivelser19.
Målet med denne studien var å utvikle og teste en metode for kontrollert dvalemodus hos CPB-voksne under naturlige forhold. Den foreslåtte metoden gjør det mulig å oppnå et ønsket antall CPB-individer for mikrobiologiske, immunologiske og andre analyser under dvalemodus under feltforhold i et kontinentalt klima. Denne metoden kan tilpasses og brukes på andre insektarter som overvintrer i jord under snø.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-agar bacteriological purified</td>
			<td>diaGene</td>
			<td>1806.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bile Esculin Agar</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo Agar&#160;</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate-D</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>143140.1000&#934;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid&#160;</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>141034.1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani liquid medium</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>G009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical centrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>SCT-15ML-25-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>FBIS SRCAMB</td>
			<td>M<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65862/65862eq01v2.jpg" style="margin: auto;" />030/O61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Medigen</td>
			<td>PBS500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperatutre and humidity datalogger Ecklerk-M-11</td>
			<td>Relsib</td>
			<td></td>
			<td>Waterproof datalogger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions

En av de største av potet Solanum tuberosum L. i den tempererte sonen er insektet Colorado potetbille (CPB). De fleste studier på immunitet og sykdommer i CPB utføres under aktive fôringsstadier. Likevel er det færre studier på hvilestadier, selv om disse billene tilbringer mesteparten av livssyklusen i en tilstand av vinterdiapause (dvalemodus). I dette arbeidet ble det utviklet og testet en metode for å undersøke CPB-dvalemodus under naturlige forhold, noe som gir mulighet til å samle et tilstrekkelig antall individer om vinteren. I denne artikkelen ble CPB-overlevelsen vurdert, og smittestoffer i ulike dvalestadier ble identifisert. CPB-dødeligheten økte under dvalemodusen, og nådde et maksimum i april-mai. Entomopatogene sopp (Beauveria, Isaria og Lecanicillium) og bakterier Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas og Serratia ble isolert fra de døde insekter. Overlevelsesgraden for biller for hele dvaleperioden var 61%. Ingen frosne eller uttørkede biller ble funnet, noe som indikerer suksessen til den presenterte metoden.

Resultatene nedenfor på overvintrende CPB viser jordtemperatur, overlevelse og infeksjoner.
Jordtemperaturdynamikk. Fra slutten av november til begynnelsen av april ble det registrert minusgrader i merdene på 30 cm dyp (figur 1). Gjennomsnittstemperaturen i denne perioden var minus 3,3 ± 0,1 °C (gjennomsnitt ± standardfeil). Laveste registrerte temperatur var minus 7,9 °C i midten av februar.
Overlevels...

Watch this Scientific Journal Video about An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions at JoVE.com

An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions

Her presenterer vi en metode for å studere Colorado-potetbille dvalemodus under de naturlige forholdene i den tempererte sonen, samt en teknikk for å samle biller om vinteren. Denne metoden gjør det mulig å oppnå et ønsket antall overvintrende individer for ulike analyser på et hvilket som helst stadium av dvalemodus.

En eksperimentell studie på Colorado potetbille dvale under naturlige forhold

One of the major pests of potato Solanum tuberosum L. in the temperate zone is the insect Colorado potato beetle (CPB). Most studies on the immunity and ...

Colorado-potetbaglen er en av de alvorligste av potet i temperert sone. Studier av immunitet og patogenese av dette utføres hovedsakelig på aktivt stadium. Men i temperert sone tilbringer dette mesteparten av livssyklusen i dvalemodus.I denne studien presenterer vi en metode for dvalemodus av Colorado potetbille og en teknikk for å samle biller om vinteren. Den største fordelen med denne metoden er at den tillater å skaffe et hvilket som helst antall overvintrende individer for virusanalyse i en hvilken som helst dvalemodus. Bruk bur laget av en stiv treramme med en størrelse på 25 x 25 x 40 centimeter.For å bygge en ramme for buret, bruk trelast minst to centimeter tykke og fire centimeter brede. Dekk innsiden av buret med et rustfritt stålnett med en størrelse på ikke større enn fem ganger tre millimeter. Fest nettet med en trestiftemaskin.Linje innsiden av buret med en svart syntetisk geotekstil med en tetthet på 60 gram per kvadratmeter. Fest et rør av syntetisk gjennomsiktig pustende stoff, omtrent 60 centimeter høyt til toppen av buret. Kryss og fest to sterke tau til bunnen av buret for å trekke det ut fra jorden når det trengs.Grav et hull i jorden 40 centimeter dypt. Legg tørt gress eller høy på hullet. Plasser buret inne slik at hø eller tørt gress er mellom burets vegger og jorda.Fyll burene opp med jord fra samme potetåker hvor insektene er samlet. Installer vanntette temperatur- og fuktighetsdataloggere i merdene på nødvendige dybder. Plant potetplanter inne i buret tre til fire uker før billeinnføringen og vann dem moderat.Fest et rør av syntetisk stoff vertikalt til en pinne av noe materiale som er installert på utsiden av buret. Samle opp voksne biller manuelt i de sprøytemiddelfrie potetåkrene mot slutten av potetvegetasjonen. Hold de oppsamlede biller i 20 liters plastbøtter som inneholder potetplater for å mate insekter før de plasseres i burene.Dekk bøttene med et pustende stoff. Plasser ikke mer enn 200 individer av biller på potetplanter dekket av syntetisk stoffnett. Når potettoppene er fortært, tilsett nye som er satt i en plastkanne som inneholder vann og bytt potetoppene daglig etterpå.Når alle billene gravde seg ned i jorden for overvintring, løsner du røret av syntetisk stoff fra pinnen og legger stoffet ned. Fjern snøen over overflaten av buret. Løsne buret på hver side med en sterk spade.Trekk buret ut av jorden ved hjelp av tau. Ta buret til laboratoriet. Fjern jorda fra buret i små porsjoner, bryt forsiktig opp store jordstykker og isoler biller ved hjelp av pinsett.Separate levende biller fra. Levende, sunne biller komprimerer jord rundt dem og danner et lufthulrom, en såkalt vugge, og skilles derfor lett fra jorda. Biller drept av sopp er mumifisert eller har synlig mycel på overflaten.Bakterielt nedbrytende insekter er mørke. Sikt jorden gjennom en sil for å sikre at alle biller er isolert og ikke skadet. Plasser med symptomer på soppinfeksjon eller bakteriell nedbrytning i et individuelt sterilt Falcon-rør for fremtidig identifikasjon.Oppbevar levende biller i kjøleskap ved en temperatur på 2 grader Celsius til analyse i lukkede, ventilerte beholdere som inneholder en fuktig bomullsdott. For å samle hemolymfe, gjør en punktering i den laterale delen av magen under aorta med en insulinnål. For å isolere tarmen, kutt av hodekapselen, klem ut alt innholdet i en petriskål med fosfatbuffer.Skill tarmen og rens den fra fete og malpighiske kar. Separer en ønsket del av tarmen, for eksempel foregut, midgut eller hindgut. For å isolere fettlegemet, skille det fra de andre vevene etter isolering av tarmen.For å isolere entomopatogene sopp fra, legg de mumifiserte inn i et sterilt fuktighetskammer. Bruk luftkonidia eller skleroti fra billenes indre innhold til plating på Sabouraud druesukkeragar med 0,4 % melkesyre. Isoler bakterier fra med symptomer på bakteriell henfall.Klipp av et billehode, klem ut det indre innholdet og samle inn i rør for etterfølgende plating på media for bakterier. Temperaturer under null i merdene på en dybde på 30 centimeter, ble registrert fra slutten av november til begynnelsen av april. Gjennomsnittstemperaturen i denne perioden var 3,3 0,1 Celsius.Den laveste registrerte temperaturen var 7,9 grader i midten av februar. Insektdødeligheten økte under dvalemodus og nådde et maksimum om våren før fremveksten. Det opprinnelige antall biller var 2.000, hvorav 1.470 personer overlevde.Dermed var overlevelsesgraden til biller under dvalemodus 61%En analyse av 530 viste at i dvalemodus var 53% av dem preget av symptomer på bakteriell nedbrytning og 25% ble preget av symptomer på soppinfeksjon. Beauveria dominerte blant de isolerte kulturer av entomopatogene sopp. Metarhizium, Cordyceps og Lecanicillium var mye mindre vanlige.Blant bakteriene isolert fra med symptomer på bakteriell nedbrytning ble arter som tilhører slektene Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella og Glutamicibacter identifisert. Ved hjelp av denne metoden kan du løse problemet med å skaffe Colorado-potetbagler fra feltet om vinteren. Det gjør det mulig å få så mye individer som du trenger med den lave dødeligheten av insekter.Studien av ulike aspekter av biller dvalemodus er viktig fra både grunnleggende og anvendte synspunkter for å forbedre tilnærmingen til kontrollen av dette. Og selvfølgelig kan denne teknikken tilpasses for andre insektarter som overvintrer i jorden.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Computer-Generated Animal Model Stimuli

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase

HIV-1 integrates into the host chromosome of infected cells and persists as a provirus flanked by long terminal repeats. Current treatment strategies ...

Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution

Bruke unfixed, frosset vev å studere naturlige mucin Distribusjon

Mucins are complex and heavily glycosylated O-linked glycoproteins, which contain more than 70% carbohydrate by weight1-3. Secreted mucins, produced by ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Høy gjennomstrømming Bildeanalyse av Tumor Spheroids: Et brukervennlig program for å måle størrelsen på Spheroids automatisk og nøyaktig

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larve RNA-interferens i Red Mel Beetle,<em&gt; Tribolium castaneum</em

The red flour beetle, Tribolium&#160;castaneum, offers a repertoire of experimental tools for genetic and developmental studies, including a fully ...

Applications of the Single-probe: Mass Spectrometry Imaging and Single Cell Analysis under Ambient Conditions

Anvendelser av Single-sonde: massespektrometri Imaging og enkelt celle analyse under omgivelses

Mass spectrometry imaging (MSI) and in-situ single cell mass spectrometry (SCMS) analysis under ambient conditions are two emerging fields with great ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Eksperimentell protokoll for bruke Drosophila som en virvelløse modellsystem for toksisitet Testing i laboratoriet

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Co-immunoprecipitation Assay Using Endogenous Nuclear Proteins from Cells Cultured Under Hypoxic Conditions

Co-immunoprecipitation analysen bruke endogene kjernefysiske proteiner fra celler kultivert Hypoxic vilkår

Low oxygen levels (hypoxia) trigger a variety of adaptive responses with the Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) complex acting as a master regulator. ...

An Adipocyte Cell Culture Model to Study the Impact of Protein and Micro-RNA Modulation on Adipocyte Function

En Adipocyte-cellekulturmodell for å studere virkningen av protein- og mikro-RNA-modulering på adipocyttfunksjon

Alteration of adipocyte function contributes to the pathogenesis of metabolic diseases including Type 2 diabetes and insulin resistance. This highlights ...