Name: an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions
Uploaded: 2023-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions at JoVE.com

Meslektaşlarımız Vladimir Shilo, Vera Morozovа, Ulyana Rotskaya, Olga Polenogova ve Oksana Tomilova'ya saha ve laboratuvar prosedürlerinin düzenlenmesi ve yürütülmesindeki yardımları için teşekkür ederiz.
Araştırma, Rus Bilim Vakfı, proje No. 22-14-00309 tarafından desteklenmiştir.

1. Hazırda bekletme kafeslerinin tanımı
NOT: Deneyin amaçlarına bağlı olarak kafes sayısı değişmektedir. Numune alma tarihi başına en az üç kafes kullanın. Ortaya çıkacak böcek sayısını tahmin etmek için, ilkbahara kadar topraktan çıkarılmayacak en az üç ek kafes hazırlayın.
<ol><li>25 × 25 × 40 cm (U × G × Y) boyutlarında sert ahşap çerçeveden yapılmış kafesler kullanın.</li>
	<li>Kafes için bir çerçeve oluşturmak için en az 2 ...

<ol>
	<li>Alyokhin, A., Benkovskaya, G., Udalov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle.">Colorado potato beetle.</a> Insect Pests of Potato. , 29-43 (2022).</li><li>Alyokhin, A., Kryukov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+a+potato+field.">Ecology of a potato field.</a> Insect Pests of Potato. , 451-462 (2022).</li><li>Lee Jr, R. E., Costanzo, J. P., Kaufman, P. E., Lee, M. R., Wyman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-nucleating+active+bacteria+reduce+the+cold-hardiness+of+the+freeze-intolerant+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Ice-nucleating active bacteria reduce the cold-hardiness of the freeze-intolerant Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Journal of Economic Entomology. 87 (2), 377-381 (1994).</li><li>Ushatinskaja, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+of+insects+and+its+modifications.">Diapause of insects and its modifications.</a> Journal of General Biology. 34, 194-215 (1973).</li><li>Zheng, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+soil+moisture+on+overwintering+pupae+in+Spodopteraexigua+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Effect of soil moisture on overwintering pupae in Spodopteraexigua (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Applied Entomology and Zoology. 48, 365-371 (2013).</li><li>Hiiesaar, K., Metspalu, L., J&#245;udu, J., J&#245;gar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Over-wintering+of+the+Colorado+potato+beetle+(Leptinotarsa+decemlineata+Say)+in+field+conditions+and+factors+affecting+its+population+density+in+Estonia.">Over-wintering of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata Say) in field conditions and factors affecting its population density in Estonia.</a> Agronomy Research. 4 (1), 21-30 (2006).</li><li>Yocum, G. D., Rinehart, J. P., Chirumamilla-Chapara, A., Larson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+gene+expression+patterns+during+the+initiation+and+maintenance+phases+of+diapause+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Characterization of gene expression patterns during the initiation and maintenance phases of diapause in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (1), 32-39 (2009).</li><li>Yocum, G. D., Buckner, J. S., Fatland, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+internal+and+external+lipids+of+nondiapausing+and+diapause+initiation+phase+adult+Colorado+potato+beetles,+Leptinotarsa+decemlineata.">A comparison of internal and external lipids of nondiapausing and diapause initiation phase adult Colorado potato beetles, Leptinotarsa decemlineata.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 159 (3), 163-170 (2011).</li><li>Nikonorov, Y. M., Syrtlanova, L. A., Kitaev, K. A., Benkovskaya, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+activity+of+genes+involved+in+diapause+regulation+in+the+Colorado+Potato+beetle+and+its+change+under+a+fipronil+impact.">Transcription activity of genes involved in diapause regulation in the Colorado Potato beetle and its change under a fipronil impact.</a> Russian Journal of Genetics: Applied Research. 8, 80-86 (2018).</li><li>Govaere, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+and+proteome+analyses+to+investigate+the+molecular+underpinnings+of+cold+response+in+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Transcriptome and proteome analyses to investigate the molecular underpinnings of cold response in the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Cryobiology. 88, 54-63 (2019).</li><li>Lehmann, P., Westberg, M., Tang, P., Lindstr&#246;m, L., K&#228;kel&#228;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diapause+lipidomes+of+three+closely+related+beetle+species+reveal+mechanisms+for+tolerating+energetic+and+cold+stress+in+high-latitude+seasonal+environments.">The diapause lipidomes of three closely related beetle species reveal mechanisms for tolerating energetic and cold stress in high-latitude seasonal environments.</a> Frontiers in Physiology. 11, 576617 (2020).</li><li>Lebenzon, J. E., Torson, A. S., Sinclair, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diapause+differentially+modulates+the+transcriptomes+of+fat+body+and+flight+muscle+in+the+Colorado+potato+beetle.">Diapause differentially modulates the transcriptomes of fat body and flight muscle in the Colorado potato beetle.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics. 40, 100906 (2021).</li><li>Lashomb, J. H., Ng, Y. S., Ghidiu, G., Green, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+spring+emergence+by+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Say)+(Coleoptera:+Chrysomelidae),+in+New+Jersey.">Description of spring emergence by the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), in New Jersey.</a> Environmental entomology. 13 (3), 907-910 (1984).</li><li>Cantwell, G. E., Cantelo, W. W., Schroder, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Beauveria+bassiana+on+underground+stages+of+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Effect of Beauveria bassiana on underground stages of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> The Great Lakes Entomologist. 19 (2), 6 (1986).</li><li>Fedorko, A., Bajan, C., Kmitowa, K., Wojciehowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+the+use+of+selected+microorganisms+to+control+the+Colorado+beetle+during+hibernation.">Effectiveness of the use of selected microorganisms to control the Colorado beetle during hibernation.</a> Ecological Studies. 3 (2), 127-134 (1977).</li><li>Gaugler, R., Costa, S. D., Lashomb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+efficacy+of+Beauveria+bassiana+soil+inoculations.">Stability and efficacy of Beauveria bassiana soil inoculations.</a> Environmental Entomology. 18 (3), 412-417 (1989).</li><li>Bajan, C., Kmitowa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+entomopathogenic+fungi+to+the+natural+winter+reduction+of+Colorado+beetle+adults.">Contribution of entomopathogenic fungi to the natural winter reduction of Colorado beetle adults.</a> Polish Ecological Studies. 3 (2), 107-114 (1977).</li><li>Milner, M., Kung, K. S., Wyman, J. A., Feldman, J., Nordheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+overwintering+mortality+of+Colorado+potato+beetle+(Coleoptera:+Chrysomelidae)+by+manipulating+the+temperature+of+its+diapause+habitat.">Enhancing overwintering mortality of Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) by manipulating the temperature of its diapause habitat.</a> Journal of Economic Entomology. 85 (5), 1701-1708 (1992).</li><li>Do&#287;an, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+calcium+signaling+proteins+from+the+fat+body+of+the+Colorado+Potato+Beetle,+Leptinotarsa+decemlineata+(Coleoptera:+Chrysomelidae):+Implications+for+diapause+and+lipid+metabolism.">Characterization of calcium signaling proteins from the fat body of the Colorado Potato Beetle, Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae): Implications for diapause and lipid metabolism.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 133, 103549 (2021).</li><li>Benkovskaya, G. V., Udalov, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorado+potato+beetle+investigations+in+the+south+Urals.">Colorado potato beetle investigations in the south Urals.</a> Nova Science Publishers. , (2011).</li><li>Short, C. A., Hahn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+enough+for+the+winter?+Does+nutritional+status+affect+diapause.">Fat enough for the winter? Does nutritional status affect diapause.</a> Journal of Insect Physiology. , 104488 (2023).</li><li>McDonald, J. R., Bale, J. S., Walters, K. F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+mortality+and+overwintering+of+the+western+flower+thrips+Frankliniella+occidentalis+(Thysanoptera:+Thripidae).">Low-temperature mortality and overwintering of the western flower thrips Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae).</a> Bulletin of Entomological Research. 87 (5), 497-505 (1997).</li></ol>

Bu çalışma, CPB'lerin kışlamasını incelemek için önerilen yöntemin, farklı kış uykusu dönemlerinde yeterli sayıda böcek elde etmemizi sağladığını göstermektedir. Sunulan tekniğin başarısı, en önemlisi hava koşulları olan birkaç bağımsız faktöre bağlıdır. Soğuk ve karsız bir kış aylarında, toprak kafesin tüm derinliğine kadar donabilir. Bu durumda, tüm böceklerin ölüm riski önemli ölçüde artar18. Böceğin hayatta kalması,yılda...

Colorado patates böceği Leptinotarsa decemlineata Say (CPB), ağırlıklı olarak patates Solanum tuberosum L olmak üzere Solanaceae bitkilerinin önemli bir zararlısıdır. Bu türün coğrafi aralığı 16 milyonkm2'den fazladır ve sürekli genişler1. CPB'nin fakültatif kış diyapozu vardır ve ılıman bölgede kış uykusu zorunludur. Diyapoz, kısa günlük bir fotoperiyot ile indüklenir ve sıcaklık1 ile modüle edilir. Bu böcekler yetişkin aşamasında toprağa girerek kışı geçirirler. Artan enlemlerle, hazırda bekletme süresinin süresi uzar. Ilıman bölgede, özellikle menzilinin kuzey bölgelerinde, kışlama 9 aya kadar sürer: Ağustos-Eylül'den Mayıs-Haziran'a kadar (Noskov ve diğerleri, kişisel gözlemler). Bu süre zarfında, CPB - tıpkı ılıman bölgedeki diğer böcekler gibi - elverişsiz kış koşullarına maruz kalır ve soğuğa toleransını arttırmalıdır. Aynı zamanda, böceklerin toprakla teması, çeşitli fırsatçı ve patojenik mikroorganizmalar tarafından enfeksiyon riskini arttırır2. Bu nedenle, bu böceklerin kış uykusu sırasında belirli bir bağışıklık sistemi aktivitesini sürdürmeleri gerekir ve bu da enerjik olarak maliyetlidir. Bununla birlikte, böcek bir enfeksiyondan kurtulsa bile, hastalık soğuğa dayanıklılığını azaltabilir3. Düşük sıcaklığın, CPB'nin kış mortalitesinin tek nedeni olmadığı unutulmamalıdır. Oksijen eksikliği de önemli bir rol oynar ve bazı koşullar altında kış ölümlerinin ana faktörü olabilir 4,5.
CPB'nin doğal kış ölüm oranının çok yüksek olabileceği ve killi tınlı topraklarda% 100'e ulaşabileceğibilinmektedir 6. Bu nedenle, kışlama, CPB yaşam döngüsündeki en önemli dönemlerden biridir. Bununla birlikte, doğal koşullar altında CPB hazırda bekletmenin fizyolojisi, bağışıklık sistemi aktivitesi, sağkalımı ve diğer parametreleri hakkındaki veriler hala sınırlıdır. CPB erişkinlerinde diyapoz sırasında ve soğuk şokuna yanıt olarak diferansiyel gen ekspresyonu ve çeşitli fizyolojik parametreler üzerine çalışmalar vardır 7,8,9,10,11,12; Bununla birlikte, bu analizler esas olarak, sıcaklık, nem ve doğal patojen yükünde doğal dalgalanmalar olmaksızın laboratuvar koşullarında diyapoz veya soğuk stresinin indüklenmesiyle gerçekleştirilmiştir. Bununla birlikte, doğal koşullar altında topraktan kazı yoluyla toplanan bu böceklerin fizyolojisi üzerine araştırmalar önemlidir. 1970'ler-1980'lerdedoğal koşullar altında kışlamanın farklı yönleri aktif olarak incelenmiştir 13,14,15,16,17,18. Öte yandan, bu çalışmalarda kışın topraktan CPB kazısı yapılmamıştır. Ek olarak, CPB'nin kontrollü hazırda bekletme modu için bir teknik ve kafeslerin bir açıklaması ayrıntılı olarak sağlanmamıştır. Bu nedenle, doğal ortamlarda kışlayan CPB'lerin fizyolojisinin araştırılmasına ihtiyaç vardır19.
Bu çalışmanın amacı, KPB erginlerinin doğal koşullar altında kontrollü kış uykusuna yatması için bir yöntem geliştirmek ve test etmektir. Önerilen yöntem, karasal iklimin tarla koşulları altında kış uykusu sırasında mikrobiyolojik, immünolojik ve diğer tahliller için istenen sayıda CPB bireyinin elde edilmesine izin verir. Bu yöntem, kar altında toprakta kışı geçiren diğer böcek türlerine uyarlanabilir ve uygulanabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-agar bacteriological purified</td>
			<td>diaGene</td>
			<td>1806.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bile Esculin Agar</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo Agar&#160;</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate-D</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>143140.1000&#934;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid&#160;</td>
			<td>PanReac Applichem</td>
			<td>141034.1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani liquid medium</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>G009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical centrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>SCT-15ML-25-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>FBIS SRCAMB</td>
			<td>M<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65862/65862eq01v2.jpg" style="margin: auto;" />030/O61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Medigen</td>
			<td>PBS500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperatutre and humidity datalogger Ecklerk-M-11</td>
			<td>Relsib</td>
			<td></td>
			<td>Waterproof datalogger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental study on colorado potato beetle hibernation under natural conditions

Ilıman bölgedeki patates Solanum tuberosum L.'nin en büyük zararlılarından biri, Colorado patates böceği (CPB) böceğidir. CPB'nin bağışıklığı ve hastalıkları ile ilgili çalışmaların çoğu aktif beslenme aşamalarında yapılır. Bununla birlikte, bu böcekler yaşam döngülerinin çoğunu kış diyapozu (kış uykusu) durumunda geçirmelerine rağmen, dinlenme aşamaları hakkında daha az çalışma vardır. Bu çalışmada, doğal koşullar altında CPB hazırda bekletme modunu araştırmak için bir yöntem geliştirildi ve test edildi ve kışın yeterli sayıda birey toplama fırsatı sunuldu. Bu makalede, KPB sağkalımı değerlendirildi ve farklı hiberasyon evrelerindeki enfeksiyöz ajanlar tanımlandı. CPB mortalitesi kış uykusu sırasında artarak Nisan-Mayıs aylarında maksimuma ulaştı. Ölü böceklerden entomopatojenik mantarlar (Beauveria, Isaria ve Lecanicillium) ve bakteriler Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas ve Serratia izole edildi. Böceklerin tüm kış uykusu süresi boyunca hayatta kalma oranı% 61 idi. Sunulan yöntemin başarısını gösteren donmuş veya kurutulmuş böcek bulunamadı.

Kışlayan CPB'lerle ilgili aşağıdaki sonuçlar toprak sıcaklığını, hayatta kalmayı ve enfeksiyonları göstermektedir.
Toprak sıcaklığı dinamiği. Kasım ayının sonundan Nisan ayının başına kadar 30 cm derinlikteki kafeslerde sıfırın altındaki sıcaklıklar kaydedilmiştir (Şekil 1). Bu dönemde ortalama sıcaklık eksi 3,3 ± 0,1 °C idi (standart hata ±). Kaydedilen en düşük sıcaklık Şubat ortasında eksi 7,9 ?...

Watch this Scientific Journal Video about An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions at JoVE.com

An Experimental Study on Colorado Potato Beetle Hibernation Under Natural Conditions

Burada, ılıman bölgenin doğal koşulları altında Colorado patates böceği hazırda bekletme modunu incelemek için bir yöntem ve kışın böcek toplama tekniği sunuyoruz. Bu yöntem, hazırda bekletme modunun herhangi bir aşamasında çeşitli analizler için istenen sayıda kışlayan bireyin elde edilmesini sağlar.

Colorado Patates Böceği Kış Uykusuna Yatması Üzerine Doğal Koşullar Altında Deneysel Bir Çalışma

One of the major pests of potato Solanum tuberosum L. in the temperate zone is the insect Colorado potato beetle (CPB). Most studies on the immunity and ...

Colorado patates böceği, ılıman bölgedeki en ciddi patates zararlılarından biridir. Bu haşerenin bağışıklığı ve patogenezi ile ilgili çalışmalar esas olarak aktif aşamada gerçekleştirilir. Bununla birlikte, ılıman bölgede, bu haşere yaşam döngüsünün çoğunu kış uykusunda geçirir.Bu çalışmada, Colorado patates böceğinin kış uykusuna yatması için bir yöntem ve kışın böcek toplama tekniği sunuyoruz. Bu yöntemin temel avantajı, herhangi bir kış uykusu döneminde virüs analizi için herhangi bir sayıda kışlayan bireyin elde edilmesine izin vermesidir. 25 x 25 x 40 santimetre boyutlarında sert ahşap çerçeveden yapılmış kafesler kullanın.Kafes için bir çerçeve oluşturmak için en az iki santimetre kalınlığında ve dört santimetre genişliğinde tahta çıtalar kullanın. Kafesin içini, beş x üç milimetreden büyük olmayan paslanmaz çelik bir ağ ile örtün. Ağı tahta zımba ile sabitleyin.Kafesin içini, metrekare başına 60 gram yoğunluğa sahip siyah sentetik bir jeotekstil ile hizalayın. Kafesin tepesine yaklaşık 60 santimetre yüksekliğinde sentetik yarı saydam nefes alabilen bir kumaş tüpünü sıkıca tutturun. Gerektiğinde topraktan çıkarmak için iki güçlü ipi kafesin dibine çaprazlayın ve sabitleyin.Toprakta 40 santimetre derinliğinde bir çukur kazın. Deliğin üzerine kuru ot veya saman koyun. Kafesi, saman veya kuru ot kafesin duvarları ile toprak arasında olacak şekilde yerleştirin.Kafesleri, böceklerin toplandığı aynı patates tarlasından toprakla doldurun. Su geçirmez sıcaklık ve nem dataloggerlarını kafeslere gerekli derinliklerde monte edin. Patates fidelerini böceğin girişinden üç ila dört hafta önce kafesin içine dikin ve orta derecede sulayın.Bir sentetik kumaş tüpünü, kafesin dışına monte edilmiş herhangi bir malzemeden bir çubuğa dikey olarak sabitleyin. Pestisit içermeyen patates tarlalarında yetişkin böcekleri patates bitki örtüsünün sonuna doğru elle toplayın. Toplanan böcekleri kafeslere yerleştirmeden önce böcekleri beslemek için patates üstleri içeren 20 litrelik plastik kovalarda saklayın.Kovaları nefes alabilen bir bezle örtün. Sentetik kumaş ağ ile kaplanmış patates bitkilerinin üzerine 200'den fazla böcek bireyi yerleştirmeyin. Patates üstleri tüketildiğinde, su içeren plastik bir kavanoza yerleştirilmiş taze olanları ekleyin ve daha sonra patates üstlerini günlük olarak değiştirin.Tüm böcekler kışlamak için toprağa girdikten sonra, sentetik kumaş tüpünü çubuktan çözün ve kumaşı yere koyun. Kafes yüzeyinin üzerindeki karı temizleyin. Kafesi her iki taraftan güçlü bir kürekle gevşetin.Halatları kullanarak kafesi topraktan dışarı çekin. Kafesi laboratuvara getirin. Toprağı kafesten küçük porsiyonlarda çıkarın, büyük toprak parçalarını dikkatlice parçalayın ve cımbız kullanarak böcekleri izole edin.Canlı böcekleri kadavralardan ayırın. Canlı, sağlıklı böcekler, etraflarındaki toprağı sıkıştırır, beşik adı verilen bir hava boşluğu oluşturur ve bu nedenle topraktan kolayca ayrılır. Mantarlar tarafından öldürülen böcekler mumyalanır veya yüzeyde görünür miselyum bulunur.Bakteriyel olarak ayrışan böcekler karanlıktır. Tüm böceklerin izole edildiğinden ve zarar görmediğinden emin olmak için toprağı bir elek ile eleyin. Mantar enfeksiyonu veya bakteriyel ayrışma semptomları olan kadavraları, ileride tanımlamak için ayrı bir steril Falcon tüpüne yerleştirin.Canlı böcekleri, nemli bir pamuk topu içeren kapalı havalandırmalı kaplarda analiz edilene kadar buzdolabında 2 santigrat derece sıcaklıkta saklayın. Hemolenf toplamak için, bir insülin iğnesi ile aort altında karnın yan kısmında bir delik açın. Bağırsakları izole etmek için, kafa kapsülünü kesin, tüm içeriği fosfat tamponlu bir Petri kabına sıkın.Bağırsakları ayırın ve yağdan ve Malpighian damarlarından temizleyin. Ön bağırsak, orta bağırsak veya arka bağırsak gibi bağırsağın istenen bir bölümünü ayırın. Yağ gövdesini izole etmek için, bağırsağın izolasyonundan sonra diğer dokulardan ayırın.Entomopatojenik mantarları kadavralardan izole etmek için mumyalanmış kadavraları steril bir nem odasına koyun. % 0.4 laktik asit ile Sabouraud dekstroz agar üzerine kaplama yapmak için böceklerin iç içeriğinden hava conidia veya sklerotia kullanın. Bakteriyel çürüme belirtileri olan kadavralardan bakterileri izole edin.Bir böceğin kafasını kesin, iç içeriği sıkın ve daha sonra bakteriler için ortam üzerine kaplama yapmak üzere tüplerde toplayın. 30 santimetre derinlikteki kafeslerde sıfırın altındaki sıcaklıklar, Kasım ayının sonundan Nisan ayının başına kadar kaydedildi. Bu dönemde ortalama sıcaklık 3.3 0.1 Santigrat idi.Kaydedilen en düşük sıcaklık Şubat ortasında 7,9 santigrat derece oldu. Böcek ölümleri kış uykusu sırasında arttı ve ortaya çıkmadan önce ilkbaharda maksimuma ulaştı. İlk böcek sayısı 2.000 idi ve bunlardan 1.470 kişi hayatta kaldı.Böylece, kış uykusu sırasında böceklerin hayatta kalma oranı% 61 idi 530 kadavra üzerinde yapılan bir analiz, kış uykusu döneminde% 53'ünün bakteriyel ayrışma semptomları ve% 25'inin mantar enfeksiyonu semptomları ile karakterize olduğunu gösterdi. Beauveria, entomopatojenik mantarların izole kültürleri arasında baskındı. Metarhizium, Cordyceps ve Lecanicillium çok daha az yaygındı.Kadavralardan izole edilen ve bakteriyel ayrışma belirtileri gösteren bakteriler arasında Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella ve Glutamicibacter cinslerine ait türler tespit edilmiştir. Bu yöntemin kullanılması, kışın tarladan Colorado patates böcekleri elde etme sorununu çözebilir. Böceklerin düşük ölüm oranı ile ihtiyacınız olduğu kadar birey elde etmenizi sağlar.Böceklerin kış uykusuna yatmasının çeşitli yönlerinin incelenmesi, bu haşerenin kontrolüne yaklaşımı geliştirmek için hem temel hem de uygulamalı açıdan önemlidir. Ve elbette, bu teknik toprakta kışı geçiren diğer böcek türleri için uyarlanabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Kertenkeleler Hareket Hız ve Yön Visual Hassasiyet Test

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Computer-Generated Animal Model Stimuli

Bilgisayar oluşturuldu Hayvan Modeli Uyaranlar

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase

Röportaj: Evolved Recombinase kullanarak HIV-1 Proviral DNA eksizyonu

HIV-1 integrates into the host chromosome of infected cells and persists as a provirus flanked by long terminal repeats. Current treatment strategies ...

Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution

Doğal Müsin Dağıtım Eğitim için sabitlenmemiş, Dondurulmuş Dokular kullanma

Mucins are complex and heavily glycosylated O-linked glycoproteins, which contain more than 70% carbohydrate by weight1-3. Secreted mucins, produced by ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Tümör sferoidlerin Yüksek throughput Görüntü Analizi: Otomatik ve Doğru küremsiler boyutunu ölçmek için kullanıcı-dostu Yazılım Uygulama

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Kırmızı Un Beetle Larva RNA Girişim,<em&gt; Tribolium castaneum</em

The red flour beetle, Tribolium&#160;castaneum, offers a repertoire of experimental tools for genetic and developmental studies, including a fully ...

Applications of the Single-probe: Mass Spectrometry Imaging and Single Cell Analysis under Ambient Conditions

Tek prob Uygulamalar: Ortam Koşullarında Kütle Spektrometre Görüntüleme ve Tek Hücre Analizi

Mass spectrometry imaging (MSI) and in-situ single cell mass spectrometry (SCMS) analysis under ambient conditions are two emerging fields with great ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Co-immunoprecipitation Assay Using Endogenous Nuclear Proteins from Cells Cultured Under Hypoxic Conditions

Co-immunoprecipitation tahlil hipoksik koşullarda kültürlü hücrelerden endojen nükleer proteinler kullanarak

Low oxygen levels (hypoxia) trigger a variety of adaptive responses with the Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) complex acting as a master regulator. ...

An Adipocyte Cell Culture Model to Study the Impact of Protein and Micro-RNA Modulation on Adipocyte Function

Protein ve Mikro-RNA Modülasyonunun Adipozit İşlevi Üzerindeki Etkisini Incelemek için Bir Adiposit Hücre Kültürü Modeli

Alteration of adipocyte function contributes to the pathogenesis of metabolic diseases including Type 2 diabetes and insulin resistance. This highlights ...