Name: Author Spotlight: High-Throughput Toxicity Screening Using Zebrafish Embryo Startle Response Assay
Uploaded: 2024-01-12T14:15:00
Duration: 1 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Toxicity of Chemicals using a Zebrafish Vibration Startle Response Screening System at JoVE.com

हम IBCS-BIP मछली सुविधा और स्क्रीनिंग सेंटर में सहायक कर्मचारियों की उत्कृष्ट तकनीकी सहायता को धन्यवाद देते हैं। इस काम को यूरोपीय संघ के क्षितिज 2020 अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम से ग्रांट एग्रीमेंट नंबर 965406 (प्रिसिजनटॉक्स) के तहत धन प्राप्त हुआ है। यह आउटपुट केवल लेखकों के दृष्टिकोण को दर्शाता है, और यूरोपीय संघ को इसमें निहित जानकारी के किसी भी उपयोग के लिए जिम्मेदार नहीं ठहराया जा सकता है।

Startle Assay for Toxicity Evaluation in Zebrafish Embryo

हमारे पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है।

हाल के वर्षों में, ज़ेब्राफिश रासायनिक यौगिक प्रभावों के मूल्यांकन के लिए अत्यधिक लोकप्रिय मॉडल जीव बन गए हैं, जिसमें दवा विकास से पर्यावरण विष विज्ञान1 तक अनुसंधान क्षेत्र शामिल हैं। कशेरुक के रूप में, ज़ेब्राफिशउनके आनुवंशिक श्रृंगार और मनुष्यों 2,3 के साथ समग्र शरीर विज्ञान के कई पहलुओं को साझा. इसलिए, इस मॉडल में प्राप्त परिणाम अक्सर मानव स्वास्थ्य के लिए सीधे प्रासंगिक होते हैं। वर्तमान में नैदानिक परीक्षणों में कई दवा उम्मीदवारों को जेब्राफिश4 का उपयोग करके यौगिक स्क्रीन में पहचाना गया है।
विषाक्तता मूल्यांकन एक प्रमुख अनुप्रयोग है जहां ज़ेब्राफिश भ्रूण चरणों का उपयोग करके परीक्षण रुचि रखते हैं। आर्थिक सहयोग और विकास के लिए विभिन्न संगठन (ओईसीडी) परीक्षण दिशानिर्देश पर्यावरण विषाक्ततापरीक्षण 5,6 में जेब्राफिश के उपयोग के लिए मौजूद हैं। छोटे आकार और ज़ेब्राफिश भ्रूण का तेजी से विकास उन्हें मध्यम से उच्च थ्रूपुटपैमाने 1,3,4 पर स्क्रीनिंग दृष्टिकोण के लिए अत्यधिक उपयुक्त बनाता है। इस तरह के स्क्रीन द्वारा लक्षित विष संबंधी समापन बिंदुओं भ्रूण विकृतियों और घातकता7, अंतःस्रावी व्यवधान8, अंग विषाक्तता9, और तंत्रिका विषाक्तता10,11 के संकेत व्यवहार आकलन शामिल हैं. व्यवहार परख संभव है क्योंकि ज़ेब्राफिश भ्रूण विकास के अपने चरण के आधार पर विभिन्न उत्तेजनाओं के लिए विभिन्न प्रकार की हरकत प्रतिक्रियाएं दिखाते हैं। उदाहरण के लिए, 1 दिन पोस्ट निषेचन (डीपीएफ) भ्रूण सहज पूंछcoiling 12 दिखाने के लिए और आंदोलनों का एक ठेठ अनुक्रम के साथ प्रकाश दालों का एक अनुक्रम का जवाब, तथाकथित फोटोमोटर प्रतिक्रिया (पीएमआर)10. हैचिंग के बाद, आमतौर पर निषेचन (एचपीएफ) के बाद 48-72 घंटे के आसपास होने वाली, स्वतंत्र रूप से तैरने वाले एलुथेरोएम्ब्रायो13 धीरे-धीरे 4 डीपीएफ14 के आसपास शुरू होने वाली कंपन उत्तेजनाओं के लिए चौंका देने और प्रतिक्रियाओं से बचने का विकास करते हैं। इन प्रतिक्रियाओं को उत्तेजना की दिशा (तथाकथित सी-मोड़ या सी-स्टार्ट) के विपरीत दिशा में एक विशिष्ट मोड़ की विशेषता है, जिसके बाद एक छोटा काउंटर मोड़ और तैराकी व्यवहार 14,15,16,17होता है। विशेष रूप से, भ्रूण के व्यवहार विभिन्न न्यूरोट्रांसमीटर प्रणालियों का उपयोग करके तंत्रिका सर्किट द्वारा शासित होते हैं, जिससे इन प्रणालियों को लक्षित करने वाले रासायनिक यौगिक प्रभावों की जांच करने की अनुमति मिलती है। उदाहरण के लिए, पीएमआर परख कोलीनर्जिक, एड्रीनर्जिक, और डोपामिनर्जिक सिग्नलिंग10 के साथ हस्तक्षेप यौगिकों के प्रभाव का पता चला, जबकि चौंका प्रतिक्रिया कोलीनर्जिक, ग्लूटामेटेरिजिक, और glycinergic न्यूरॉन्स 16,18 शामिल है. इसके अलावा, यौगिकों है कि मांसपेशियों या न्यूरो पेशी इंटरफ़ेस को नुकसान भी इन व्यवहारों को प्रभावित करेगा, के रूप में यौगिकों आंतरिक कान / पार्श्व रेखा बाल कोशिकाओं19,20 के लिए विषाक्त होगा. एक उत्तेजना के जवाब में जेब्राफिश लोकोमोटर व्यवहार का अवलोकन करना इस प्रकार न केवल न्यूरोटॉक्सिसिटी बल्कि समान रूप से ओटोटॉक्सिसिटी और मायोटॉक्सिसिटी का आकलन करने का एक उपयुक्त साधन है। स्कोरिंग लोकोमोटर व्यवहार भी सामान्य विषाक्तता / घातकता मूल्यांकन के लिए एक प्रॉक्सी के रूप में कार्य करता है क्योंकि मृत भ्रूण नहीं चलते हैं। इस प्रकार, भ्रूण हरकत व्यवहार एक प्रथम स्तरीय विषाक्तता स्क्रीनिंग दृष्टिकोण के लिए एक एकीकृत रीडआउट का प्रतिनिधित्व करते हैं, जो एक सेटअप में घातक और न्यूरोमस्कुलर यौगिक प्रभाव को इंगित करता है। यह देखते हुए कि eleutheroembryos पहले से ही यौगिकों metabolizing करने में सक्षम हैं, दृष्टिकोण भी चयापचय परिवर्तन उत्पादों 7,21,22 के प्रभाव का पता लगा सकते हैं. महत्वपूर्ण बात, जेब्राफिश भ्रूण 120 एचपीएफ13 के बाद मुक्त खिला के चरण तक कुछ पशु संरक्षण कानूनों के तहत संरक्षित जीवन चरण के रूप में नहीं माना जाता है. इसलिए, उन्हें पशु विषाक्तता परीक्षण के विकल्प के रूप में माना जाता है।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66153/66153fig01.jpg"> चित्र 1: कंपन चौंका प्रतिक्रिया प्रणाली सेटअप। (ए) सिस्टम का अवलोकन। परीक्षण यौगिकों के संपर्क में भ्रूण के साथ प्लेट्स इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर सरणी ("लाउडस्पीकर") पर रखा जाता है। कैमरा क्रमिक रूप से बेल्ट चालित रैखिक ड्राइव द्वारा लक्षित ट्रांसड्यूसर के ऊपर रिकॉर्डिंग स्थिति में ले जाया जाता है। (बी) शीर्ष पर डाली गई टिशू कल्चर डिश के साथ ट्रांसड्यूसर/लाउडस्पीकर का विस्तृत दृश्य। प्लेटों को 4000-5000 लक्स पर एक एलईडी लाइट शीट द्वारा नीचे से रोशन किया जाता है। स्पीकर के बगल में एक एलईडी लाइट रोशनी करती है जबकि उत्तेजना दी जाती है। (सी)भ्रूण की उत्तेजना पर कैमरे द्वारा रिकॉर्ड किए गए वीडियो की अभी भी छवि। (डी) कॉन्फ़िगरेशन फ़ाइल का स्क्रीनशॉट। (ई) रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर इंटरफेस का स्क्रीनशॉट। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/66153fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
यहां, हम एक टिशू कल्चर डिश23 में कई स्वतंत्र रूप से चलती भ्रूण की एक स्वचालित वीडियो रिकॉर्डिंग के साथ युग्मित इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर द्वारा उत्पन्न कंपन उत्तेजनाओं के आधार पर एक इन-हाउस बिल्ड सरल परीक्षण डिवाइस का उपयोग करके कंपन स्टार्टल प्रतिक्रिया पर यौगिक प्रभावों के मूल्यांकन के लिए एक परीक्षण प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। प्रणाली मॉड्यूलर है और समानांतर में कई टिशू कल्चर व्यंजन से अनुक्रमिक रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है. वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले सेटअप में, पांच इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर टिशू कल्चर व्यंजन के लिए एक कंपन उत्तेजना (500 हर्ट्ज, अवधि 1 एमएस) प्रदान करते हैं जिसमें उनके ऊपर रखे 20 भ्रूण होते हैं (चित्र 1)। प्लेटों को एलईडी लाइट शीट के साथ 4000-5000 लक्स पर नीचे से रोशन किया जाता है। प्रत्येक ट्रांसड्यूसर के बगल में एक एलईडी लाइट उत्तेजना आवेदन की अवधि को इंगित करता है, और एक आस्टसीलस्कप तरंगों और लागू उत्तेजना की आवृत्ति को इंगित करता है (विवरण के लिए, रेफरी 23 देखें)। भ्रूण का व्यवहार एक उच्च गति वाले कैमरे (सामग्री की तालिका) द्वारा 1000 फ्रेम प्रति सेकंड (एफपीएस) पर दर्ज किया जाता है, जिसे बेल्ट-चालित रैखिक ड्राइव द्वारा लक्षित स्पीकर से ऊपर ले जाया जाता है। इस रिकॉर्डिंग गति मज़बूती से चौंका प्रतिक्रिया को हल करने के लिए आवश्यक है. प्रणाली वर्तमान वाणिज्यिक प्रणालियों के लिए कम लागत वाली, व्यक्तिगत रूप से अनुकूलनीय विकल्प प्रदान करती है। नीचे विस्तृत सटीक वर्कफ़्लो वर्तमान में प्रेसिजन विष विज्ञान पहल24 के ढांचे में किया जाता है ताकि विषाक्त पदार्थों के चयनित सेट के साथ इलाज किए गए ज़ेब्राफिश भ्रूण से ओएमआईसीएस डेटा अधिग्रहण के लिए उपयुक्त जोखिम की स्थिति निर्धारित की जा सके।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fine test sieves, Brass frame, pore size 250 &#956;m</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z289744-1EA</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-speed camera</td>
			<td>XIMEA</td>
			<td>&#160;MQ013MG-ON USB 3&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Bottles, Narrow Neck, with Screw Cap</td>
			<td>VWR</td>
			<td>215-3261</td>
			<td>Reference number for 50 mL, available up to 20 L. Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip, working volume: 10 &#181;L</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>70.3010.210</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip, working volume: 1000 &#181;L</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>70.3050.100</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip, working volume: 20 &#181;L</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>70.3020.210</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip, working volume: 200 &#181;L</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>70.3030.100</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette 10 mL</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>86.1254.001</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette 25 mL</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>86.1685.001</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette 5 mL</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish 60,0 mm/15,0 mm vented (Polystyrene)</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>628102</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish 100, suspension (Polystyrene)</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>83.3902.500</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 6 mL</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>86.1175</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube 15 mL 120 mm x 17 mm PP</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>62.554.502</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube 50 mL 114mm x 28 mm PP</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>62.5472.54</td>
			<td>Or comparable material</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating toxicity of chemicals using a zebrafish vibration startle response screening system

हमने ज़ेब्राफिश भ्रूण में न्यूरोमस्कुलर और सामान्य विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए एक सरल स्क्रीनिंग प्रणाली विकसित की है। मॉड्यूलर प्रणाली में इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर होते हैं जिनके ऊपर भ्रूण के साथ टिशू कल्चर व्यंजन रखे जा सकते हैं। ऐसे कई लाउडस्पीकर-टिशू कल्चर डिश जोड़े को जोड़ा जा सकता है। इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर द्वारा उत्पन्न कंपन उत्तेजनाएं भ्रूण में एक विशेषता स्टार्टल और एस्केप प्रतिक्रिया को प्रेरित करती हैं। एक बेल्ट चालित रैखिक ड्राइव क्रमिक रूप से भ्रूण के आंदोलन को रिकॉर्ड करने के लिए प्रत्येक लाउडस्पीकर के ऊपर एक कैमरा रखता है। इस तरह, रासायनिक यौगिकों की घातकता या न्यूरोमस्कुलर विषाक्तता के कारण चौंका देने वाली प्रतिक्रिया में परिवर्तन की कल्पना और मात्रा निर्धारित की जा सकती है। हम इस प्रणाली का उपयोग करके रासायनिक यौगिक स्क्रीनिंग के लिए वर्कफ़्लो का एक उदाहरण प्रस्तुत करते हैं, जिसमें भ्रूण और उपचार समाधान तैयार करना, रिकॉर्डिंग सिस्टम का संचालन और परख में सक्रिय यौगिकों के बेंचमार्क एकाग्रता मूल्यों की गणना करने के लिए डेटा विश्लेषण शामिल है। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सरल घटकों पर आधारित मॉड्यूलर असेंबली इस प्रणाली को विशेष प्रयोगशाला सेटअप और स्क्रीनिंग उद्देश्यों की जरूरतों के लिए किफायती और लचीले ढंग से अनुकूल बनाती है।

Evaluating Toxicity of Chemicals using a Zebrafish Vibration Startle Response Screening System

चित्रा 2 ए अनुपचारित जंगली प्रकार के भ्रूण (एबी 2 ओ 2 तनाव) के 48 चंगुल में स्थिर भ्रूण का प्रतिशत दिखाता है। औसतन, अनुपचारित जंगली प्रकार के भ्रूण का 14.33% कंपन उत्तेजना पर प्रतिक्रिया नहीं करता है। 4 चंगुलों में, गतिहीन लार्वा का प्रतिशत 50% तक पहुंच गया, लेकिन 75% चंगुल में 20% से नीचे गतिशील लार्वा का प्रतिशत था।
चित्रा 2बी, सी कंपन स्टार्टल परख वर्कफ़्लो के साथ गतिशीलता पर यौगिक प्रभावों के लिए बेंचमार्क एकाग्रता/खुराक (बीएमसी/बीएमडी29,30) की एक विशिष्ट गणना का एक उदाहरण दिखाता है, जैसा कि वर्तमान में प्रेसिजनटॉक्स कंसोर्टियम24 के भीतर किया जाता है। BMC10, BMC25, और BMC50 मान सांद्रता के अनुरूप हैं, जिस पर क्रमशः 10%, 25% और 50% भ्रूण पृष्ठभूमि से अधिक गतिहीनता का स्तर दिखाते हैं। केवल भ्रूण जो पूरी तरह से गतिहीन हैं, इस गणना में शामिल हैं, न कि वे जो अभी भी आंशिक प्रतिक्रिया दिखाते हैं, जैसे कि बाद में भागने वाली तैराकी या केवल पूंछ आंदोलनों के बिना केवल सी-मोड़(चित्रा 2बी)। भ्रूण सोडियम चैनल अवरोधक tricaine methanesulfonate, जो अक्सर मछली संज्ञाहरण31 के लिए प्रयोग किया जाता है की 8 सांद्रता के संपर्क में थे. डेटा कंपन उत्तेजना के जवाब में लगभग 25% गतिहीनता के पृष्ठभूमि स्तर को इंगित करता है। 1% ट्राइकेन से शुरू होकर, गतिशीलता कम हो जाती है और फिर 2.5% से ऊपर समाप्त हो जाती है। KNIME वर्कफ़्लो BMC50 की गणना 164.9 माइक्रोन के रूप में करता है, जो 1.07% ट्राइकेन और 75% की गतिहीनता स्तर(चित्रा 2C)से मेल खाती है। छोटे 95% विश्वास अंतराल (वक्र में ग्रे रंगों द्वारा इंगित) इस परख में गतिशीलता मूल्यों की मजबूत प्रजनन क्षमता का संकेत देते हैं।
चित्रा 2 डी एक उप-इष्टतम परख रन का एक उदाहरण दिखाता है, जिसके डेटा का उपयोग बीएमसी गणना के लिए नहीं किया जाना चाहिए। एक ही क्लच से व्युत्पन्न विभिन्न भ्रूणों के साथ पांच E3 उपचारित नियंत्रण समूहों को दिखाया गया है (AB2O2 [जंगली प्रकार का तनाव] 1-5 को दोहराता है)। केवल पहला समूह लगभग सामान्य प्रतिक्रिया दिखाता है, जो लगभग 25% गतिहीनता दिखाता है जो साहित्य मूल्यों32 के अनुरूप है और यहां वर्णित परख में प्राप्त किया गया है, जैसा कि चित्र 2 ए में दिखाया गया है, जबकि अन्य सभी समूह कम और / या अपूर्ण व्यवहार प्रतिक्रियाएं दिखाते हैं (उदाहरण के लिए, केवल एक सी-मोड़ दिखा रहा है जो तैराकी गतिविधि के बाद नहीं है, या शुरुआत में एक स्पष्ट सी-मोड़ के बिना गतिशीलता)। इस तरह की प्रतिक्रिया तब हो सकती है जब भ्रूण ठीक से विकसित नहीं होते हैं और विकासात्मक देरी के कारण अपरिपक्व अवस्था में होते हैं, जो चौंका देने वाली प्रतिक्रिया 14,33की मजबूती को प्रभावित करता है।
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66153/66153fig02v2.jpg"> चित्रा 2: बेंचमार्क खुराक गणना सहित एक विशिष्ट परिणाम का उदाहरण। (ए) 48 चंगुल (एन = 10 प्रति क्लच) के लिए जंगली प्रकार के अनुपचारित लार्वा के लिए ध्वनि नाड़ी के बाद गैर-उत्तरदायी भ्रूण का प्रतिशत। माध्य (14.33%) और मानक विचलन (±16.19%) लाल रंग में दर्शाए गए हैं। (बी) भ्रूण के चौंका प्रतिक्रिया व्यवहार का मूल्यांकन (एन = 20 प्रति शर्त) ई 3 माध्यम में ट्राइकेन की संकेतित एकाग्रता के साथ या नियंत्रण के रूप में अकेले ई 3 के साथ इलाज किया जाता है। व्यवहार को रंग योजना और ग्राफ के दाईं ओर इंगित कार्टून के अनुसार वर्गीकृत किया गया है, प्रत्येक भ्रूण को निम्नलिखित वर्गों में से केवल एक को सौंपा गया है: "गतिशील": भ्रूण कोई आंदोलन नहीं दिखाता है; "पूंछ चलती है": भ्रूण पूंछ आंदोलन दिखाता है, लेकिन न तो सी-मोड़ और न ही तैराकी व्यवहार; "मोटाइल": भ्रूण तैराकी आंदोलन दिखाता है, लेकिन कंपन उत्तेजना के जवाब में कोई सी-मोड़ नहीं है; "केवल सी-बेंड": भ्रूण सी-मोड़ दिखाता है, लेकिन तैराकी से बच नहीं सकता; "सी-बेंड + मोटाइल": भ्रूण विशिष्ट सी-बेंड व्यवहार दिखाता है जिसके बाद एस्केप स्विमिंग (विशिष्ट पूर्ण चौंका देने वाली प्रतिक्रिया) होती है। विभिन्न व्यवहारों को प्रत्येक उपचार के लिए भ्रूण की कुल संख्या के प्रतिशत के रूप में दिखाया गया है। (सी)केएनआईएमई वर्कफ़्लो द्वारा उत्पन्न बीएमसी गणना ग्राफ, प्रत्येक उपचार एकाग्रता के लिए "गतिशील" भ्रूण के प्रतिशत को दर्शाता है। नीली, लाल और काली रेखाएं BMC10, BMC25, और BMC50 मानों को इंगित करती हैं, अर्थात, सांद्रता जिस पर 10%, 25% और 50% भ्रूण क्रमशः पृष्ठभूमि से अधिक गतिहीनता का स्तर दिखाते हैं। (डी) एक खारिज परख चलाने का उदाहरण। एक ही क्लच से प्राप्त विभिन्न AB2O2 जंगली प्रकार के भ्रूण के साथ पांच E3-उपचारित नियंत्रण रन दिखाए जाते हैं (1-5 को दोहराते हैं)। केवल प्रतिकृति 1 लगभग सामान्य प्रतिक्रिया दिखाता है, जबकि शेष रनों के भ्रूण विशिष्ट सी-मोड़ + एस्केप तैराकी प्रतिक्रिया नहीं दिखाते हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/66153fig02largev2.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
तालिका 1: निर्धारित बीएमसी मूल्यों को स्वीकार करने के लिए फिट और थ्रेसहोल्ड की अच्छाई का अनुमान लगाने के लिए सांख्यिकीय पैरामीटर। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/Table%201.xlsx" target="_blank">कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
तालिका 2: कंपन चौंका प्रतिक्रिया परख प्रणाली का एक चयन के गुण. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/Table%202.xlsx" target="_blank">कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पूरक फ़ाइल 1: कॉन्फ़िगरेशन फ़ाइल के लिए एक्सेल टेम्पलेट। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/Supplementary%20File%201.zip" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पूरक फ़ाइल 2: एक उदाहरण डेटा सेट के साथ KNIME इनपुट टेम्पलेट। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/Supplementary%20File%202.zip" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पूरक फ़ाइल 3: KNIME आउटपुट फ़ाइल उदाहरण। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66153/Supplementary%20File%203.zip" target="_blank">कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Toxicity of Chemicals using a Zebrafish Vibration Startle Response Screening System at JoVE.com

Author Spotlight: High-Throughput Toxicity Screening Using Zebrafish Embryo Startle Response Assay

हम ज़ेब्राफिश भ्रूण कंपन चौंका प्रतिक्रिया के आधार पर रासायनिक यौगिक विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए एक स्क्रीनिंग सिस्टम के वर्कफ़्लो और डेटा विश्लेषण का वर्णन करते हैं। प्रणाली एक कंपन उत्तेजना के संपर्क में आने पर जेब्राफिश भ्रूण के आंदोलनों को रिकॉर्ड करती है और सामान्य विषाक्तता / घातकता और न्यूरोमस्कुलर विषाक्तता के एकीकृत मूल्यांकन की अनुमति देती है।

एक Zebrafish कंपन चौंका प्रतिक्रिया स्क्रीनिंग सिस्टम का उपयोग कर रसायनों की विषाक्तता का मूल्यांकन

We developed a simple screening system for the evaluation of neuromuscular and general toxicity in zebrafish embryos. The modular system consists of ...

विषाक्तता के लिए रसायनों की स्क्रीनिंग करते समय, एक वर्तमान प्रयोगात्मक चुनौती विवो में विषाक्त प्रभावों का निर्धारण है, पूरे जीव की जटिलता को ध्यान में रखते हुए, और इसे तेजी से उच्च-थ्रूपुट तरीके से करने के लिए। एक व्यवहार रीडआउट का उपयोग करके जो एक कंपन उत्तेजना के लिए ज़ेब्राफिश भ्रूण की भागने की प्रतिक्रिया पर नज़र रखता है, हमारी प्रणाली हमें उन यौगिकों की पहचान करने की अनुमति देती है जो तंत्रिका या मांसपेशियों के कार्य में हस्तक्षेप करते हैं। क्योंकि मृत भ्रूण हिलते नहीं हैं, हम उन यौगिकों को भी पकड़ते हैं जो अनिर्दिष्ट विषाक्तता द्वारा घातकता का कारण बनते हैं।हमारे द्वारा प्रस्तुत प्रणाली को मामूली कीमत के लिए बनाया जा सकता है और अनुकूलन योग्य है। इसे बनाए रखना भी आसान है और सभी टुकड़ों को बदला जा सकता है। वर्तमान में हम ओएमआईसीएस डेटा अधिग्रहण के लिए रासायनिक यौगिक खुराक निर्धारित करने के लिए प्रेसिजनटॉक्स कंसोर्टियम के भीतर स्टार्टल परख प्रणाली को नियोजित कर रहे हैं।डेटा पांच मॉडल जीवों और मानव कोशिका लाइनों में उत्पन्न होते हैं। उनका उपयोग मानव विषाक्तता की भविष्यवाणी के लिए विषाक्तता मार्ग और बायोमार्कर प्राप्त करने के लिए किया जाएगा।