Name: Author Spotlight: Advancing Personalized Medicine in Ovarian Cancer
Uploaded: 2024-02-23T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Advancing Personalized Medicine in Ovarian Cancer at JoVE.com

Studiet er finansieret af det tyske kræftforskningscenter DKTK, partnersite München, et partnerskab mellem DKFZ og University Hospital LMU München. Undersøgelsen er også støttet af det tyske kræfthjælpstilskud (#70113426 og #70113433). Paraffinindlejring af væv og organoider er blevet udført på kernefaciliteten ved Institut for Anatomi, Det Sundhedsvidenskabelige Fakultet, LMU München, München. Confocal Imaging er blevet udført på Core facilitet Bioimaging på Biomedical Center (BMC). Forfatterne takker Simone Hofmann, Maria Fischer, Cornelia Herbst, Sabine Fink og Martina Rahmeh for teknisk hjælp.

Tumorvævsprøver fra ovariecanceroperationer blev indsamlet, og patientafledte organoider blev genereret i overensstemmelse med den etiske komité for LMU University (17-471) i overensstemmelse med de eksisterende gældende EU-, nationale og lokale regler. Hver patient, der er involveret i undersøgelsen, har givet skriftligt samtykke. Ved arbejde med friske vævsprøver kræves biosikkerhedsniveau 2 sikkerhedstilladelse og Laminar Flow-skabe. I betragtning af vævsprøvernes potentielt infektiøse karakter, som ikke ka...

Standardizing Ovarian Cancer Organoid Biobanking

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 72 (1), 7-33 (2022).</li><li>Berger, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+pan-cancer+molecular+study+of+gynecologic+and+breast+cancers.">A comprehensive pan-cancer molecular study of gynecologic and breast cancers.</a> Cancer Cell. 33 (4), 690-705 (2018).</li><li>Watson, R. W. G., Kay, E. W., Smith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+biobanks:+addressing+the+practical+and+ethical+issues+to+deliver+a+valuable+tool+for+cancer+research.">Integrating biobanks: addressing the practical and ethical issues to deliver a valuable tool for cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 10 (9), 646-651 (2010).</li><li>Coppola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biobanking+in+health+care:+evolution+and+future+directions.">Biobanking in health care: evolution and future directions.</a> J Transl Med. 17 (1), 172 (2019).</li><li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue.">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nat Protoc. 11 (2), 347-358 (2016).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+development+and+disease+with+organoids.">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li><li>Hill, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+DNA+repair+inhibitor+response+in+short-term+patient-derived+ovarian+cancer+organoids.">Prediction of DNA repair inhibitor response in short-term patient-derived ovarian cancer organoids.</a> Cancer Discov. 8 (11), 1404-1421 (2018).</li><li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity.">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nat Med. 25 (5), 838-849 (2019).</li><li>Larsen, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pan-cancer+organoid+platform+for+precision+medicine.">A pan-cancer organoid platform for precision medicine.</a> Cell Rep. 36 (4), 109429 (2021).</li><li>Bartfeld, S., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-derived+organoids+and+their+application+for+medical+research+and+patient+treatment.">Stem cell-derived organoids and their application for medical research and patient treatment.</a> J Mol Med (Berl). 95 (7), 729-738 (2017).</li><li>Larsen, B. M., Cancino, A., Shaxted, J. M., Salahudeen, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+drug+screening+of+patient-derived+tumor+organoids+using+high-content+fluorescent+imaging.">Protocol for drug screening of patient-derived tumor organoids using high-content fluorescent imaging.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101407 (2022).</li><li>Senkowski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+platform+for+efficient+establishment+and+drug-response+profiling+of+high-grade+serous+ovarian+cancer+organoids.">A platform for efficient establishment and drug-response profiling of high-grade serous ovarian cancer organoids.</a> Dev Cell. 58 (12), 1106-1121 (2023).</li><li>LeSavage, B. L., Suhar, R. A., Broguiere, N., Lutolf, M. P., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next-generation+cancer+organoids.">Next-generation cancer organoids.</a> Nat Mater. 21 (2), 143-159 (2022).</li><li>Hoffmann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+expansion+of+high-grade+serous+ovarian+cancer+organoids+requires+a+low-Wnt+environment.">Stable expansion of high-grade serous ovarian cancer organoids requires a low-Wnt environment.</a> EMBO J. 39 (6), e104013 (2020).</li><li>Kessler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Notch+and+Wnt+pathways+regulate+stemness+and+differentiation+in+human+fallopian+tube+organoids.">The Notch and Wnt pathways regulate stemness and differentiation in human fallopian tube organoids.</a> Nat Commun. 6, 8989 (2015).</li><li>Trillsch, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+to+optimize+the+biobanking+of+ovarian+cancer+organoids+by+accommodating+patient-specific+differences+in+stemness+potential.">Protocol to optimize the biobanking of ovarian cancer organoids by accommodating patient-specific differences in stemness potential.</a> STAR Protoc. 4 (3), 102484 (2023).</li><li>Maenhoudt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+organoids+from+ovarian+cancer+as+experimental+and+preclinical+models.">Developing organoids from ovarian cancer as experimental and preclinical models.</a> Stem Cell Reports. 14 (4), 717-729 (2020).</li><li>Fuerer, C., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+to+probe+and+manipulate+the+Wnt+signaling+pathway.">Lentiviral vectors to probe and manipulate the Wnt signaling pathway.</a> PLoS One. 5 (2), e9370 (2010).</li><li>. Leica ASP300S - Advanced smart processor vacuum tissue processor, instructions for use, V 2.1 Available from: <a target="_blank" href="https://www.leicabiosystems.com/sites/default/files/media_product-download/2022-01/Leica_ASP300S_IFU_2v1N_en.pdf">https://www.leicabiosystems.com/sites/default/files/media_product-download/2022-01/Leica_ASP300S_IFU_2v1N_en.pdf</a> (2021)</li><li>Thermo Scientific. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Microm EC350 Modular tissue embedding center Instruction manual. , (2009).</li><li>Nanki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+ovarian+cancer+organoids+capture+the+genomic+profiles+of+primary+tumours+applicable+for+drug+sensitivity+and+resistance+testing.">Patient-derived ovarian cancer organoids capture the genomic profiles of primary tumours applicable for drug sensitivity and resistance testing.</a> Sci Rep. 10 (1), 12581 (2020).</li></ol>

Den designede protokol adresserer tidligere udfordringer ved organoid biobanking af ovariecancer med hensyn til organoiddannelse og langsigtet passagepotentiale og sikrer generering af fuldt udvidelige linjer fra størstedelen af solide tumoraflejringer. Den kirurgiske indsamlingsproces af tumorprøver, der skal anvendes til organoidgenerering, påvirker udbyttet og ekspansionspotentialet betydeligt. Tumorvævsprøver kan opnås under forskellige procedurer, herunder multivisceral kirurgi, diagnostisk laparoskopi eller b...

Klinisk behandling af patienter med kræft i æggestokkene er fortsat udfordrende på grund af dets heterogene kliniske præsentation på fremskredne stadier og høje tilbagefaldsrater1. Forbedring af vores forståelse af udvikling af kræft i æggestokkene og biologisk adfærd kræver forskningsmetoder, der adresserer den patientspecifikke variabilitet i løbet af sygdommen, behandlingsrespons og histopatologiske såvel som molekylære træk2.
Biobanking, der er kendetegnet ved systematisk indsamling og langsigtet bevarelse af tumorprøver afledt af ovariecancerpatienter sammen med deres kliniske oplysninger, giver bevarelse af en stor patientkohorte i forskellige sygdomsstadier, herunder tumorprøver fra primære debulkingoperationer, efter neoadjuverende kemoterapi og fra tilbagevendende sygdom. Det rummer et værdifuldt potentiale for at fremme kræftforskning, der tjener som en ressource af lovende prognostiske biomarkører og terapeutiske mål3. Imidlertid er konventionelle biobankmetoder, såsom formalinfiksering og frysning, ikke modtagelige for at gennemføre funktionelle undersøgelser på de originale tumorprøver på grund af tab af levedygtighed og forstyrrelse af den oprindelige tredimensionelle vævsarkitektur 4,5.
Undersøgelser af molekylære mekanismer, i onkologi og videre, afhænger afgørende af brugen af passende eksperimentelle modeller, der nøjagtigt afspejler sygdommens biologi og opretholder in vitro-egenskaber af det væv, der observeres in vivo. Patientafledte organoider, baseret på bevarelsen af fornyelsespotentialet, reproducerer i laboratoriet epithelets oprindelige struktur og funktion og tillader test i en patientspecifik sammenhæng. Derfor har de vist sig som meget lovende værktøjer til kræftforskning og personlig medicin, der bygger bro mellem klinisk mangfoldighed og laboratorieforskning 6,7,8,9. Skræddersyede terapeutiske strategier baseret på individuelle lægemiddelresponser af organoidlinjer og test af den funktionelle relevans af molekylære profiler kan potentielt anvendes direkte til patientpleje10,11. Muligheden for langtidsdyrkning, herunder patientspecifikke karakteristika, og indsamling af relevante prospektive kliniske data over tid er meget lovende med hensyn til at identificere nye prognostiske og prædiktive faktorer, der er involveret i sygdomsprogression og resistensmekanismer 3,9.
Ikke desto mindre kræver opbygning af en biobank, der inkluderer organoider fra forskellige tumorprøver, en kombination af streng overholdelse af kompleks metode og opsætning af protokoller for nem vedligeholdelse12. Processtandardisering sikrer, at biobanken kan etableres og vedligeholdes effektivt af uddannet personale selv ved høj omsætning, samtidig med at de højeste kvalitetsstandarderoverholdes 13. Flere undersøgelser rapporterede den vellykkede generering af stabile organoide linjer for kræft i æggestokkene svarende til mutations- og fænotypisk profil af den oprindelige tumor med varierende effektivitetshastigheder. Alligevel er rutinemæssig biobank fortsat udfordrende i praksis, især for langsigtet stabil vækst af linjer, hvilket er en forudsætning for storstilet ekspansion eller vellykket genomisk redigering.
Især spørgsmålet om udvidelsesmuligheder er fortsat vagt defineret på området, da organoider, der viser langsomt og begrænset vækstpotentiale, lejlighedsvis tælles som etablerede linjer. Som oprindeligt påvist af Hoffmann et al., en undersøgelse, hvis hovedresultater dannede grundlag for denne videreudviklede protokol, kræver optimal håndtering af ovariecancervæv en unik strategi for at imødekomme heterogenitet14. Fænotypisk karakterisering af organoiderne opnået ved denne metode og tæt lighed med forældrenes tumorvæv blev bekræftet ved panel-DNA-sekventering og transkriptomisk analyse af modne kulturer (4-10 måneders dyrkning), der demonstrerer stabiliteten af modellen 8,9,12,14.
I modsætning til det parakrinmiljø, der regulerer homeostase i de sunde æggeledere, epitellaget, som sandsynligvis giver højkvalitets serøs ovariecancer (HGSOC), kræftregenereringspotentiale og organoid dannelseskapacitet, er mindre afhængig af eksogent Wnt-tilskud. Desuden viste aktiv knoglemorfogenetisk protein (BMP) signalering, karakteriseret ved fraværet af Noggin i organoidmedium, sig at være gavnlig for etablering af langsigtede kulturer fra ovariecancer faste vævsaflejringer14,15. Under systematisk biobanking af faste forekomster af kræft i æggestokkene har vi bekræftet disse resultater og oprettet rørledningen med detaljer skitseret i denne protokol, der sikrer vedvarende langsigtet ekspansion i de fleste tilfælde. Vi finder, at parallel afprøvning af forskellige mediesammensætninger og såningsmetoder, når der arbejdes med primære isolater, er afgørende for at forbedre etableringen af langsigtede stabile organoidlinjer og for at øge udbyttet, hvilket muliggør robust formering og udvidelse til multibrøndformater, der kræves til downstream-forsøg16.
Desuden er renheden og kvaliteten af de prøver, der indsamles under operationen, af afgørende betydning for translationspotentialet af ovariecancerorganoider i grundforskning og molekylær diagnostik. Kompleksiteten af den kliniske præsentation af HGSOC kræver et tæt samarbejde mellem kirurgerne, onkologerne og forskerne i laboratoriet for at sikre, at relevant materiale identificeres korrekt, transportbetingelserne holdes konstante, og organoide linjer genereres med høj effektivitet, der repræsenterer de vigtigste egenskaber ved sygdommen hos hver patient. Denne protokol giver en standardiseret, men tilpasningsdygtig ramme til at fange det fulde potentiale af ovariecancerorganoider i betragtning af den heterogenitet, der karakteriserer kræft i æggestokkene16,17. Denne protokol muliggør især pålidelig biobanking af det brede spektrum af klinisk præsentation af kræft i æggestokkene, herunder forskellige histologiske typer (højkvalitets og lavgradig ovariecancer, LGSOC), forskellige aflejringer fra de samme patienter, der udviser forskelle i stemnessregulering, væv fra operationer i postneoadjuverende indstilling, biopsimateriale og prøver fra operationer i den tilbagevendende fase af sygdomsprogression.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 Sterican 26 G</td>
			<td>Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>4657683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 Sterican 27 G</td>
			<td>Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>4657705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T HA Rspo1-Fc</td>
			<td>R&#38;D systems, Minneapolis, USA</td>
			<td>3710-001-01</td>
			<td>Alternative: R-Spondin1 expressing Cell line, Sigma-Aldrich, SC111</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-83-01 (TGF-b RI Kinase inhibitor IV)</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>616454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F-12 Medium&#160;</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-p53 antibody (DO1)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, Texas, USA</td>
			<td>sc-126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PAX8 antibody</td>
			<td>Proteintech, Manchester, UK&#160;</td>
			<td>10336-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50x)</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle-top vacuum filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>Corning, Berlin, Germany&#160;</td>
			<td>430049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR cell culture flask, 175 cm2</td>
			<td>Greiner Bio-one, Kremsm&#252;nster, Austria</td>
			<td>661175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR cell culture flask, 25 cm2</td>
			<td>Greiner Bio-one, Kremsm&#252;nster, Austria</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR cell culture flask, 75 cm2</td>
			<td>Greiner Bio-one, Kremsm&#252;nster, Austria</td>
			<td>658175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar 48-well Clear TC-treated&#160;</td>
			<td>Corning, Berlin, Germany&#160;</td>
			<td>3548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo SFM</td>
			<td>PromoCell &#8211; Human Centered Science, Heidelberg, Germany</td>
			<td>C-29912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Extract, Type 2, Pathclear</td>
			<td>R&#38;D systems, Minneapolis, USA</td>
			<td>3533-005-02</td>
			<td>Alternative: Matrigel, Growth Factor Reduced Basement membrane matrix&#160; Corning, 356231&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy5 AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG</td>
			<td>Jackson Immuno</td>
			<td>715-175-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAKO&#160; Citrate Buffer, pH 6.0, 10x Antigen Retriever</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>C9999-1000ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa Fluor Plus 555</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>A32794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG Alexa Fluor Plus 488</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>A32814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#180;s Phosphate-Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Richard-Allan Scientific HistoGel</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>Epredia HG-4000-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 24-well Polystyrene&#160;</td>
			<td>Corning, Berlin, Germany&#160;</td>
			<td>351447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather scalpel&#160;</td>
			<td>Pfm medical, Cologne, Germany</td>
			<td>200130010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin 37% acid free, stabilized</td>
			<td>Morphisto, Offenbach am Main, Germany</td>
			<td>1019205000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>35050038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>156630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human EpCAM/TROP-1 Antibody</td>
			<td>R&#38;D systems, Minneapolis, USA</td>
			<td>AF960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF10</td>
			<td>Peprotech, NJ, USA</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human recombinant BMP2</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>PHC7146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human recombinant EGF</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>PHG0311L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human recombinant Heregulin beta-1</td>
			<td>Peprotech, NJ, USA</td>
			<td>100-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS X core Software</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>https://webshare.leica-microsystems.com/latest/core/widefield/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP8 X&#160;White Light Laser Confocal Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100x)</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnifix 1 mL</td>
			<td>Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>3570519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Omnilab, Munich, Germany</td>
			<td>5170002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyd&#160;</td>
			<td>Morphisto, Offenbach am Main, Germany</td>
			<td>1176201000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>P4333-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PluriStrainer 400 &#181;m</td>
			<td>PluriSelect, Leipzig, Germany</td>
			<td>43-50400-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>InvivoGen, Toulouse, France</td>
			<td>ant-pm-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysing Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>11814389001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roticlear</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>A538.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgipath Paraplast</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Germany</td>
			<td>39602012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nunc Cryovials</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>375418PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express Enzyme&#160;</td>
			<td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>12604-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>PanReac AppliChem, Darmstadt, Germany</td>
			<td>A4974-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>TOCRIS biotechne, Wiesbaden, Germany</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeocin</td>
			<td>Invitrogen, Thermo Scientific, Waltham, USA</td>
			<td>R25001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

strategy for biobanking of ovarian cancer organoids: addressing the interpatient heterogeneity across histological subtypes and disease stages

Mens etableringen af en biobank for kræft i æggestokkene fra patientafledte organoider sammen med deres kliniske baggrundsinformation lover fremskridt inden for forskning og patientpleje, er standardisering fortsat en udfordring på grund af heterogeniteten af denne dødelige malignitet kombineret med den iboende kompleksitet af organoidteknologi. Denne tilpasningsdygtige protokol giver en systematisk ramme for at realisere det fulde potentiale af ovariecancerorganoider i betragtning af en patientspecifik variabilitet af forfædre. Ved at implementere en struktureret eksperimentel arbejdsgang for at vælge optimale dyrkningsforhold og såningsmetoder med parallel test af direkte 3D-såning versus en 2D / 3D-rute opnår vi i de fleste tilfælde robuste langsigtede ekspansionslinjer, der er egnede til en bred vifte af downstream-applikationer. 
Især er protokollen blevet testet og vist sig effektiv i et stort antal tilfælde (N = 120) af meget heterogent udgangsmateriale, herunder højkvalitets og lavgradig ovariecancer og stadier af sygdommen med primær debulking, tilbagevendende sygdom og post-neoadjuverende kirurgiske prøver. Inden for et eksogent signalmiljø med lav Wnt, høj BMP observerede vi, at forfædre var forskelligt modtagelige for aktiveringen af Heregulin 1 ß (HERß-1)-vejen, hvor HERß-1 fremmer organoiddannelse hos nogle, mens den hæmmer den i andre. For en delmængde af patientens prøver nødvendiggør optimal organoiddannelse og langvarig vækst tilsætning af fibroblastvækstfaktor 10 og R-Spondin 1 til mediet. 
Desuden fremhæver vi de kritiske trin i vævsfordøjelse og stamcelleisolering og peger på eksempler, hvor kort dyrkning i 2D på plast er gavnlig for efterfølgende organoiddannelse i kældermembranekstrakt type 2-matrixen. Samlet set kræver optimal biobanking systematisk test af alle hovedforhold parallelt for at identificere et passende vækstmiljø for individuelle linjer. Protokollen beskriver også håndteringsproceduren for effektiv indlejring, sektionering og farvning for at opnå billeder i høj opløsning af organoider, hvilket er nødvendigt for omfattende fænotypning.

Strategy for Biobanking of Ovarian Cancer Organoids: Addressing the Interpatient Heterogeneity across Histological Subtypes and Disease Stages

Efter indledende vævsdissociation, filtrering og tælling podes celler parallelt direkte i 3D-format, som forklaret ovenfor, såvel som suspensionen i kolben for kort 2D-ekspansion. I nogle tilfælde påvirker den forbigående 2D-ekspansion positivt organoiddannelsen, og den langsigtede linje etableres med succes via denne rute, mens komparativ parallel 3D-såning kan resultere i vækststop (figur 1). For hvert donorvæv, der behandles, testes cellerne i henhold til mediematrixen. Efter den...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Advancing Personalized Medicine in Ovarian Cancer at JoVE.com

Author Spotlight: Advancing Personalized Medicine in Ovarian Cancer 

Denne protokol tilbyder en systematisk ramme for etablering af ovariecancerorganoider fra forskellige sygdomsstadier og adresserer udfordringerne ved patientspecifik variabilitet for at øge udbyttet og muliggøre robust langsigtet ekspansion til efterfølgende applikationer. Det inkluderer detaljerede trin til vævsbehandling, såning, justering af mediekrav og immunofluorescensfarvning.

Strategi for biobanking af ovariecancerorganoider: adressering af interpatient heterogenitet på tværs af histologiske undertyper og sygdomsstadier

While the establishment of an ovarian cancer biobank from patient-derived organoids along with their clinical background information promises advances in ...

Den bedste kliniske behandling inden for banebrydende translationel forskning til patienter med fremskreden kræft i æggestokkene har højeste prioritet på vores institution. Med biobanking af patientafledte organoider har vi opnået store fremskridt mod individuelt skræddersyet ledelse. Dette gør det muligt for os at evaluere patientspecifikke egenskaber og identificere prædiktive biomarkører.Vi har gjort betydelige fremskridt i de senere år med at forbedre radikal multivisceral kirurgi, kemoterapi, antiangiogen terapi og også PARP-hæmmerbehandling hos patienter med avanceret kræft i æggestokkene og forbedrede overlevelsesrater selv med det. Nu ville det næste store skridt være bedre at forudsige, hvilken patient der ville have gavn af hvilken specifik behandling. I øjeblikket er kliniske behandlingsbeslutninger baseret på generelle histopatologiske træk og på information om homolog anbefalingsmangel eller testet i paraffinindlejret tumorvæv.Biologiske modeller, der evaluerer specifikke reaktioner på kemoterapi og målrettede behandlinger, er endnu ikke implementeret i klinisk rutine. Vi har identificeret nøglekarakteristika ved ovariecancervæv, specifikt de dyrkningskrav, der er nødvendige for at opretholde dets fornyelsespotentiale in vitro, og bruger denne viden til at opnå robust langsigtet vækst af organoidlinjer og etablere biobank fra prøver på forskellige stadier af sygdommen. Vores daglige erfaring med biobanking af ovariecancerorganoider viser effektivt en bemærkelsesværdig heterogenitet i biologien bag denne malignitet, hvilket kan bane vejen for ny klassificering eller danne grundlag for nye terapeutiske løsninger rettet mod STEMI's potentiale.