Name: in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice
Uploaded: 2008-03-13T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice at JoVE.com

<p> We willen graag Olga Garaschuk erkennen voor nuttige discussies over het optimaliseren van de bulk van calcium indicatoren. </p>

<ol><li> Bereid de fluorescerende calcium indicator oplossing. We maken gebruik van acetoxymethyl ester kleurstoffen, of AM-kleurstoffen voor kort. Dit zijn kleurstoffen die kunnen worden genomen door de cellen bij het extracellulair geïnjecteerd. Wij gebruiken meestal de Oregon-Green-BAPTA een AM-of Fluo-4 uur in een concentratie van 1 mM. AM kleurstoffen kunnen worden verkregen bij Invitrogen in 50 microgram flacons. We hebben eerst voor te bereiden een 20% oplossing van Pluronic F-127 in DMSO. We voorafgaande warm de oplossing om elke dag t...

<ol>
	<li>Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+bulk-loading+of+fluorescent+indicators+for+two-photon+brain+imaging+in+vivo.">Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Protoc</em>. <b>1</b>, (2006).</li><li>Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+two-photon+calcium+imaging+of+neuronal+networks.">In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci USA</em>. <b>100</b>, 7319-7324 (2003).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp;+Biomed+Eng+Online+2:13.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp; Biomed Eng Online 2:13.</a> <em style='font-style: italic'>Biomed Eng Online</em>. <b>2</b>, (2003).</li></ol>

<p> Het voordeel van deze methode meer dan elektrofysiologische opnames is dat het minder invasief en laat de opnames van de activiteit in dichte neuronale neuronale netwerken. Bij het doen van deze procedure is het belangrijk om te onthouden om uiterste zorg te nemen bij het uitvoeren van de craniotomie niet naar de dura schade. Zelfs een kleine hoeveelheid van de subdurale bloeden met een sterk obscure de beeldvorming. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Oregon Green BAPTA1-AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>O-6807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluo 4- AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-14201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulforhodamine 101</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-359</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pluronic F-127 in DMSO</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P-3000MP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifugal Filter (0.45 micron)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC3 0HV 0S</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice

<p class="jove_content"> Om te begrijpen netwerk dynamiek van microcircuits in de neocortex, is het essentieel om tegelijkertijd op te nemen van de activiteit van een groot aantal neuronen. In-vivo twee-foton calcium beeldvorming is de enige methode die het mogelijk maakt een op te nemen van de activiteit van een dichte neuronale populatie met single-cell resolutie. De methode bestaat uit het implanteren van een schedel imaging venster, het injecteren van een fluorescente calcium indicator kleurstof die kan worden genomen door een groot aantal neuronen en tenslotte het opnemen van de activiteit van neuronen met time-lapse calcium beeldvorming met behulp van een in-vivo twee foton microscoop. Co-injectie van astrocyten-specifieke kleurstoffen kunnen een onderscheid te maken neuronen van astrocyten. De techniek kan worden uitgevoerd in muizen die fluorescerende moleculen in specifieke subpopulaties van neuronen beter inzicht in de interactie met het netwerk van verschillende groepen van cellen. </p>

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice at JoVE.com

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

<p class="jove_content">Om te begrijpen netwerk dynamiek van microcircuits in de neocortex, is het essentieel om tegelijkertijd op te nemen van de activiteit van een groot aantal neuronen. In-vivo twee-foton calcium beeldvorming is de enige methode die het mogelijk maakt een op te nemen van de activiteit van een dichte neuronale populatie met single-cell resolutie.</p>

In vivo 2-Photon Imaging Calcium in Layer 2 / 3 van Muizen

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

In situ beeldvorming van de muis Thymus Met behulp van 2-Photon Microscopie

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

Een methode voor 2-Photon Imaging van de bloedstroom in de neocortex door middel van een Cranial Window

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

Generatie van beenmerg afgeleide Murine dendritische cellen voor gebruik in twee-foton Imaging

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

Imaging Protein-protein Interactions <em>in vivo</em>

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging eiwit-eiwit interacties<em> In vivo</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

<em>In Vivo</em> 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

<em>En Face</em> Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

<em>En Face</em> Detection van stikstofoxide en superoxide in endotheellaag van Intact slagaders

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

Micropuncture of Bowman's Space in Mice Facilitated by 2 Photon Microscopy

Micropuncture van Bowman ruimte in muizen vergemakkelijkt door 2 foton microscopie

Renal micropuncture and renal 2-photon imaging are seminal techniques in renal physiology. However, micropuncture is limited by dependence on conventional ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imaging calcium dynamica in subpopulaties van muizen pancreatic eilandje cellen

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in <em>Helianthus Annuus</em>

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Identificatie van nieuwe regulatoren van plantaardige transpiratie door grootschalige thermische beeldvorming screening in <em>Helianthus Annuus</em>

Plant adaptation to biotic and abiotic stresses is governed by a variety of factors, among which the regulation of stomatal aperture in response to water ...