Name: in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice
Uploaded: 2008-03-13T12:00:00
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<p> Nous tenons à remercier Olga Garaschuk pour des discussions utiles sur l&#39;optimisation du chargement en vrac des indicateurs de calcium. </p>

<ol><li> Préparer la solution de calcium indicateur fluorescent. Nous utilisons des colorants ester acétoxyméthyle, colorants ou AM pour faire court. Ce sont des colorants qui peuvent être prises par les cellules lorsqu&#39;elles sont injectées extracellulaire. Nous utilisons généralement l&#39;Oregon-Vert BAPTA-1 AM ou Fluo-quatre heures à une concentration de 1 mM. AM colorants peuvent être obtenus auprès de Invitrogen dans 50 flacons de microgramme. Nous avons d&#39;abord préparer une solution à 20% de Pluronic F-127 dans le DMSO...

<ol>
	<li>Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+bulk-loading+of+fluorescent+indicators+for+two-photon+brain+imaging+in+vivo.">Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Protoc</em>. <b>1</b>, (2006).</li><li>Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+two-photon+calcium+imaging+of+neuronal+networks.">In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci USA</em>. <b>100</b>, 7319-7324 (2003).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp;+Biomed+Eng+Online+2:13.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp; Biomed Eng Online 2:13.</a> <em style='font-style: italic'>Biomed Eng Online</em>. <b>2</b>, (2003).</li></ol>

<p> L&#39;avantage de cette méthode sur des enregistrements électrophysiologiques, c&#39;est qu&#39;il est moins invasive et permet l&#39;enregistrement de l&#39;activité neuronale dans les denses réseaux de neurones. Lorsque vous effectuez cette procédure, il est important de se rappeler de prendre un soin extrême lors de l&#39;exécution de la craniotomie pour ne pas endommager la mère. Même une petite quantité de saignement sous-dural avec énormément obscurs de l&#39;imagerie. </p>

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Oregon Green BAPTA1-AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>O-6807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluo 4- AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-14201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulforhodamine 101</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-359</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pluronic F-127 in DMSO</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P-3000MP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifugal Filter (0.45 micron)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC3 0HV 0S</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice

<p class="jove_content"> Pour comprendre la dynamique des réseaux de microcircuits du néocortex, il est indispensable d&#39;enregistrer simultanément l&#39;activité d&#39;un grand nombre de neurones. L&#39;imagerie in vivo de calcium à deux photons est la seule méthode qui permet d&#39;enregistrer l&#39;activité d&#39;une population dense de neurones avec une seule cellule de résolution. La méthode consiste à implanter une fenêtre d&#39;imagerie crânienne, l&#39;injection d&#39;un colorant fluorescent de calcium indicateur qui peut être repris par un grand nombre de neurones et finalement d&#39;enregistrer l&#39;activité des neurones à l&#39;imagerie calcique laps de temps en utilisant une in-vivo deux microscope photonique. La co-injection des astrocytes spécifiques colorants permet de différencier les neurones à partir des astrocytes. La technique peut être réalisée sur des souris exprimant des molécules fluorescentes dans les sous-populations spécifiques de neurones pour mieux comprendre les interactions en réseau des différents groupes de cellules. </p>

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In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

<p class="jove_content">Pour comprendre la dynamique des réseaux de microcircuits du néocortex, il est indispensable d&#39;enregistrer simultanément l&#39;activité d&#39;un grand nombre de neurones. L&#39;imagerie in vivo de calcium à deux photons est la seule méthode qui permet d&#39;enregistrer l&#39;activité d&#39;une population dense de neurones avec une seule cellule de résolution.</p>

In Vivo 2-Photon Imaging calcium dans la couche 2 / 3 de souris

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

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