Name: in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice
Uploaded: 2008-03-13T12:00:00
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<p> Gostaríamos de agradecer Olga Garaschuk para discussões úteis sobre como otimizar o carregamento a granel de indicadores de cálcio. </p>

<ol><li> Prepare a solução indicador fluorescente de cálcio. Nós usamos corantes éster acetoxymethyl, ou AM corantes para breve. Estes são corantes que podem ser absorvidas pelas células quando injetado extracelularmente. Normalmente usamos Oregon-Green-BAPTA 01:00 ou 04:00 Fluo-a uma concentração de 1 mM. Corantes AM podem ser obtidas Invitrogen em frascos de 50 microgramas. Primeiro, preparar uma solução de 20% dos PLURONIC F-127 em DMSO. Nós aquecer a solução antes de usar todos os dias até a sua clara. Nós dissolver o indica...

<ol>
	<li>Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+bulk-loading+of+fluorescent+indicators+for+two-photon+brain+imaging+in+vivo.">Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Protoc</em>. <b>1</b>, (2006).</li><li>Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+two-photon+calcium+imaging+of+neuronal+networks.">In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci USA</em>. <b>100</b>, 7319-7324 (2003).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp;+Biomed+Eng+Online+2:13.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp; Biomed Eng Online 2:13.</a> <em style='font-style: italic'>Biomed Eng Online</em>. <b>2</b>, (2003).</li></ol>

<p> A vantagem deste método sobre gravações eletrofisiológicas é que é menos invasiva e permite que as gravações da atividade neuronal em densas redes neuronais. Ao fazer este procedimento é importante lembrar de tomar extremo cuidado ao realizar a craniotomia para não danificar a dura. Mesmo uma pequena quantidade de sangramento subdural com muito obscura a imagem. </p>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Oregon Green BAPTA1-AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>O-6807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluo 4- AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-14201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulforhodamine 101</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-359</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pluronic F-127 in DMSO</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P-3000MP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifugal Filter (0.45 micron)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC3 0HV 0S</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice

<p class="jove_content"> Para entender a dinâmica da rede de microcircuitos no neocórtex, é essencial para gravar simultaneamente a atividade de um grande número de neurônios. In-vivo de dois fótons de imagens de cálcio é o único método que permite registrar a atividade de uma densa população neuronal com uma única célula de resolução. O método consiste na implantação de uma janela de imagem do crânio, a injeção de um corante indicador fluorescente de cálcio que podem ser tomadas por um grande número de neurônios e, finalmente, gravar a atividade dos neurônios com o tempo de imagem usando um lapso de cálcio in-vivo duas microscópio de fótons. Co-injeção de astrócitos específicos corantes permite diferenciar os neurônios de astrócitos. A técnica pode ser realizada em camundongos expressando moléculas fluorescentes em subpopulações específicas de neurônios para entender melhor as interações de rede de diferentes grupos de células. </p>

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In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

<p class="jove_content">Para entender a dinâmica da rede de microcircuitos no neocórtex, é essencial para gravar simultaneamente a atividade de um grande número de neurônios. In-vivo de dois fótons de imagens de cálcio é o único método que permite registrar a atividade de uma densa população neuronal com uma única célula de resolução.</p>

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