Name: in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice
Uploaded: 2008-03-13T12:00:00
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<p> Queremos agradecer a Olga Garaschuk útil para los debates sobre la optimización de la carga masiva de los indicadores de calcio. </p>

<ol><li> Prepare la solución de calcio indicador fluorescente. Usamos tintes acetoximetil éster, o AM tintes para el cortocircuito. Estos son los tintes que pueden ser absorbidos por las células cuando se inyecta extracelular. Por lo general el uso de Oregon-Green BAPTA-1 AM o Fluo-4 AM a una concentración de 1 mM. Colorantes AM se puede obtener de Invitrogen en viales de 50 microgramos. En primer lugar, preparar una solución al 20% de Pluronic F-127 en DMSO. Calentamos la solución antes de usar todos los días hasta su claro. Disolvemos ...

<ol>
	<li>Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+bulk-loading+of+fluorescent+indicators+for+two-photon+brain+imaging+in+vivo.">Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Protoc</em>. <b>1</b>, (2006).</li><li>Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+two-photon+calcium+imaging+of+neuronal+networks.">In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci USA</em>. <b>100</b>, 7319-7324 (2003).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp;+Biomed+Eng+Online+2:13.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp; Biomed Eng Online 2:13.</a> <em style='font-style: italic'>Biomed Eng Online</em>. <b>2</b>, (2003).</li></ol>

<p> La ventaja de este método sobre los registros electrofisiológicos es que es menos invasiva y permite que las grabaciones de la actividad en las densas redes neuronales neuronal. Al hacer este procedimiento s importante recordar que tener sumo cuidado al realizar la craneotomía para no dañar la duramadre. Incluso una pequeña cantidad de sangrado subdural con mucho oscurecer la imagen. </p>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Oregon Green BAPTA1-AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>O-6807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluo 4- AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-14201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulforhodamine 101</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-359</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pluronic F-127 in DMSO</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P-3000MP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifugal Filter (0.45 micron)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC3 0HV 0S</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice

<p class="jove_content"> Para comprender la dinámica de la red de microcircuitos de la neocorteza, que es esencial para grabar simultáneamente la actividad de un gran número de neuronas. En vivo de dos fotones de imágenes de calcio es el único método que permite grabar la actividad de una densa población neuronal con una sola célula de resolución. El método consiste en la implantación de una ventana de imagen del cráneo, se inyecta una solución de calcio indicador fluorescente que puede ser ocupado por un gran número de neuronas y, por último registro de la actividad de las neuronas con las imágenes de calcio lapso de tiempo con una in-vivo dos microscopio de fotones. Co-inyección de astrocito específicos colorantes permite diferenciar las neuronas de los astrocitos. La técnica puede llevarse a cabo en ratones que expresan moléculas fluorescentes en subpoblaciones específicas de neuronas para entender mejor las interacciones en la red de los diferentes grupos de células. </p>

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In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

<p class="jove_content">Para comprender la dinámica de la red de microcircuitos de la neocorteza, que es esencial para grabar simultáneamente la actividad de un gran número de neuronas. En vivo de dos fotones de imágenes de calcio es el único método que permite grabar la actividad de una densa población neuronal con una sola célula de resolución.</p>

En Vivo 2-Photon imágenes de calcio en la capa 2 / 3 de los ratones

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

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