Name: in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice
Uploaded: 2008-03-13T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice at JoVE.com

<p> Vi vill tacka för Olga Garaschuk för bra diskussioner om optimering merparten lastning av kalcium indikatorer. </p>

<ol><li> Förbered fluorescerande lösningen kalcium indikator. Vi använder acetoximetyl ester färgämnen eller AM färgämnen för korta. Dessa är färgämnen som kan tas upp av celler när det injiceras extracellularly. Vi använder vanligtvis Oregon-Grön BAPTA-1 AM eller Fluo-4 ÄR vid en koncentration av 1 mm. AM färgämnen kan erhållas från Invitrogen i 50 mikrogram flaskor. Vi förbereder först en 20% lösning av Pluronic F-127 i DMSO. Vi varma lösningen före användning varje dag tills dess klara. Vi löser upp kalcium indikato...

<ol>
	<li>Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+bulk-loading+of+fluorescent+indicators+for+two-photon+brain+imaging+in+vivo.">Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Protoc</em>. <b>1</b>, (2006).</li><li>Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+two-photon+calcium+imaging+of+neuronal+networks.">In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci USA</em>. <b>100</b>, 7319-7324 (2003).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp;+Biomed+Eng+Online+2:13.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.&amp;nbsp;&amp;nbsp; Biomed Eng Online 2:13.</a> <em style='font-style: italic'>Biomed Eng Online</em>. <b>2</b>, (2003).</li></ol>

<p> Fördelen med denna metod under elektrofysiologiska inspelningar är att det är mindre invasiv och gör inspelningarna av aktivitet i tät neuronala neuronala nätverk. När du gör detta förfarande det är viktigt att komma ihåg att största försiktighet när du utför kraniotomi inte skada dura. Även en liten mängd subdural blödning med obskyra kraftigt avbildning. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Oregon Green BAPTA1-AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>O-6807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluo 4- AM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-14201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulforhodamine 101</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-359</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pluronic F-127 in DMSO</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P-3000MP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifugal Filter (0.45 micron)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC3 0HV 0S</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

in vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice

<p class="jove_content"> För att förstå nätverk dynamik mikrokretsar i hjärnbarken är det viktigt att samtidigt spela in aktiviteten hos ett stort antal nervceller. In-vivo två-photon kalcium avbildning är den enda metoden som tillåter en att spela in verksamheten i en tät neuronal befolkning med encelliga upplösning. Metoden består i att implantera en kranial imaging fönster, injicera en fluorescerande färg kalcium indikator som kan tas upp av ett stort antal nervceller och slutligen registrera aktiviteten hos nervceller med tid förfaller kalcium avbildning med en in-vivo två photon mikroskop. Samtidig injektion av astrocyternas-specifika färger gör att man kan skilja nervceller från astrocyter. Tekniken kan utföras på möss som uttrycker fluorescerande molekyler i specifika undergrupper av nervceller för att bättre förstå det nätverk interaktioner mellan olika grupper av celler. </p>

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice at JoVE.com

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

<p class="jove_content">För att förstå nätverk dynamik mikrokretsar i hjärnbarken är det viktigt att samtidigt spela in aktiviteten hos ett stort antal nervceller. In-vivo två-photon kalcium avbildning är den enda metoden som tillåter en att spela in verksamheten i en tät neuronal befolkning med encelliga upplösning.</p>

In Vivo 2-Photon Kalcium Imaging i Layer 2 / 3 av Möss

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissektion och 2-Photon Imaging för perifera lymfkörtlar på möss

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

In situ avbildning av Mouse Thymus Använda 2-Photon Mikroskopi

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

En metod för 2-Photon Imaging av blodflödet i hjärnbarken genom en Kraniell fönster

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

Generering av benmärg härledda Murine dendritiska celler för användning i 2-fotonen Imaging

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

Imaging Protein-protein Interactions <em>in vivo</em>

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein interaktioner<em> In vivo</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

<em>En Face</em> Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

<em>En Face</em> Detection av kväveoxid och superoxid i endotelskiktet intakt artärer

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

Micropuncture of Bowman's Space in Mice Facilitated by 2 Photon Microscopy

Micropuncture Bowmans utrymme hos möss som underlättas av 2 foton mikroskopi

Renal micropuncture and renal 2-photon imaging are seminal techniques in renal physiology. However, micropuncture is limited by dependence on conventional ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Avbildning Kalciumdynamik i subpopulationer av mus bukspottskörteln ö-celler

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in <em>Helianthus Annuus</em>

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Identifiering av nya regulatorer av växttranspiration genom storskalig termisk avbildningsscreening i <em>Helianthus Annuus</em>

Plant adaptation to biotic and abiotic stresses is governed by a variety of factors, among which the regulation of stomatal aperture in response to water ...