Name: labeling stem cells with fluorescent dyes for non-invasive detection with optical imaging
Uploaded: 2008-04-02T18:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging at JoVE.com

<p> Dieses Projekt wurde von einem Leon J. Thal SEED Zuschuss aus dem California Institute for Regenerative Medicine unterstützt. Tobias Henning wurde durch eine Forschung von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG, HE 4578/1-2) Stipendium finanziert. Wir wollen danken Juanito Meneses für seine Beratung auf die Kultur von humanen embryonalen Stammzellen. </p>

<p class="jove_step"> Kennzeichnung von mesenchymalen Stammzellen mit dem fluoreszierenden Farbstoff DiD </p><ol><li> Zu Beginn des Verfahrens zur Kennzeichnung mesenchymale Stammzellen, trypsinize und zählen Sie die Zellen, um eine Suspension mit einer definierten Anzahl von Zellen erhalten. </li><li> Nehmen Sie die Zellen aus dem Inkubator und saugen aus alten Medien von den Flaschen mit den Zellen markiert werden </li><li> Waschen Sie die Zellen mit 10 ml Mg / Ca-freiem PBS. Saugen Sie die PBS. Die Mg-und Ca würde hemmen die Trypsin, desha...

<ol>
	<li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+tracking+with+Gadophrin-2+--+a+bifunctional+contrast+agent+for+MR+imaging,+optical+imaging+and+fluorescence+microscopy.">Stem cell tracking with Gadophrin-2 -- a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy.</a> <em style='font-style: italic'>Eur J Nucl Med Mol Imaging</em>. <b>31</b>, 1312-1321 (2004).</li><li>Simon, G. H., Daldrup-Link, H. E., Kau, J., Metz, S., Schlegel, J., Piontek, G., Saborowski, O., Demos, S., Duyster, J., Pichler, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+experimental+arthritis+using+allogeneic+leukocytes+labeled+with+a+near-infrared+fluorescent+probe.">Optical imaging of experimental arthritis using allogeneic leukocytes labeled with a near-infrared fluorescent probe.</a> <em style='font-style: italic'>Eur J Nucl Med &amp; Mol Imaging</em>. <b>33</b>, 998-1006 (2006).</li><li>Sutton, E., Henning, T., Pichler, B., Bremer, C., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Tracking+with+Optical+imaging.">Cell Tracking with Optical imaging.</a> <em style='font-style: italic'>Eur Radiol</em>. <b>2</b>, 350-357 (2003).</li><li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging.">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> <em style='font-style: italic'>Mol Imaging</em>. <b>2</b>, 350-357 (2003).</li></ol>

<p> OI ist ein relativ neues bildgebendes Verfahren, basierend auf der Detektion von Fluoreszenz. OI ist so sensibel wie Radiotracer-basierten Imaging-Techniken, aber nicht mit einer Bestrahlung Exposition verbunden. OI stellt ein wirksames Mittel zur Verfolgung Zellen nicht-invasiv und wiederholt damit einen Einblick in die Zellwanderung an den Zielort. Eine wichtige Einschränkung der Technik ist die begrenzte Eindringen in das Gewebe von fluoreszierenden Sonden in vivo. So ein Tracer Akkumulation im tiefen Gewebe, mehr als etwa 5-10 cm von d...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Indocyanine Green (IR-125)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>AC41254-1000 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-2650 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-MEM High Glucose </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>D5648</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gelatin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1890</td>
<td>Dilute to final concentration of 0.1% in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS, Mg and Ca free</td>
<td>Reagent</td>
<td>GIBCO </td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA 0.05% </td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25300-120</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA 0.25% </td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25200-114	</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FCS, characterized</td>
<td>Reagent</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Strainer (40 &#x03BC;m Nylon)</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DiD</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>V-22887</td>
<td>
</td>
</tr>
<tr>
<td>Knockout DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>GIBCO</td>
<td>10829018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Knockout Serum Replacer</td>
<td>Reagent</td>
<td>GIBCO</td>
<td>10828028</td>
<td>
</td>
</tr>
<tr>
<td>b-Mercaptoethanol </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>7522</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Non-essential Amino Acids </td>
<td>Reagent</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11140050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FGF-2</td>
<td>Reagent</td>
<td>R&D Systems </td>
<td> 233-FB-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamine 200mM </td>
<td>Reagent</td>
<td>GIBCO</td>
<td>25030081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>Reagent</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protamine Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>American Pharmaceutical Partners Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

labeling stem cells with fluorescent dyes for non-invasive detection with optical imaging

<p class="jove_content">Optical Imaging (OI) ist eine einfache, schnelle und kostengünstige Werkzeug zur In-vivo-Überwachung der neuen Stammzell-basierten Therapien. Die Technik basiert auf ex vivo-Markierung von Stammzellen mit einem fluoreszierenden Farbstoff, anschließende intravenöse Injektion der markierten Zellen und Visualisierung ihrer Anreicherung in bestimmten Zielorganen oder Pathologien basiert. Die vorgestellte Technik zeigt, wie wir von humanen mesenchymalen Stammzellen (hMSC) Etikett durch einfache Inkubation mit dem lipophilen Fluoreszenzfarbstoff DiD (C67H103CIN2O3S) und wie wir humanen embryonalen Stammzellen (hES) Etikett mit der FDA zugelassen Fluoreszenzfarbstoff Indocyaningrün (ICG). Die Aufnahme-Mechanismus erfolgt über die Einhaltung und Verbreitung der lipophilen Farbstoff in die Phospholipid-Doppelschicht der Zellmembran. Die Kennzeichnung Effizienz ist in der Regel verbessert werden, wenn die Zellen mit dem Farbstoff in serum-freien Medien als der Inkubation in Serum-haltigen Medien Gegensatz bebrütet werden. Darüber hinaus ist der Zusatz des Transfektionsagens Protaminsulfat deutlich verbessert Kontrastmittelaufnahme.</p>

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Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Labeling Stammzellen mit fluoreszierenden Farbstoffen zur nicht-invasiven Detektion mit Optical Imaging

<p class="jove_content">Dieses Video zeigt Techniken für die Kennzeichnung von menschlichen embryonalen Stammzellen und mesenchymalen Stammzellen mit fluoreszierenden Farbstoffen. Diese Technik kann für eine in vivo Verfolgung der transplantierten Stammzellen mit optischen Bildgebung und zur histopathologischen Korrelation mit Fluoreszenzmikroskopie eingesetzt werden.</p>

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Labeling hESCs und hMSCs mit Eisenoxid-Nanopartikel für Non-Invasive in vivo-Tracking mit MR-Bildgebung

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Forschung

Biologie

Non-invasive 3D-Visualization with Sub-micron Resolution Using Synchrotron-X-ray-tomography

Nicht-invasive 3D-Visualisierung mit Sub-Mikron-Auflösung mit Synchrotron-Röntgen-Tomographie

Little is known about the internal organization of many micro-arthropods with body sizes below 1 mm. The reasons for that are the small size and the hard ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

In-vitro-Markierung von humanen embryonalen Stammzellen für Magnetic Resonance Imaging

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Proper Care and Cleaning of the Microscope

Richtige Pflege und Reinigung des Mikroskops

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a ...

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

Phasenkontrast und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Visualizing the Live <em>Drosophila</em> Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualisierung der Live-<em> Drosophila</em> Glial-neuromuskulären Synapse mit Fluoreszenzfarbstoffen

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Fluorescent Labeling of <em>Drosophila</em> Heart Structures

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Fluoreszenzmarkierung<em> Drosophila</em> Herz Structures

The Drosophila melanogaster dorsal vessel, or heart, is a tubular structure comprised of a single layer of contractile cardiomyocytes, pericardial cells ...

Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

Lineage Kennzeichnung von Zebrafisch-Zellen mit Laser Uncagable Fluorescein Dextran

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

Fluoreszenz-Imaging mit One-Nanometer-Genauigkeit (FIONA)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...

Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

Der Nachweis von modifizierte Formen von Cytosin Mit Sensitive Immunhistochemie

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...