Name: shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies
Uploaded: 2008-03-05T22:18:00
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हम इस काम के समर्थन के लिए सीआईआरएम धन्यवाद देना चाहूंगा. सेल लाइन उदारता माउंट सिनाई अस्पताल, टोरंटो, ओंटारियो में डा. Andras नेगी से दान था.

1. Shrinky-dink मोल्ड बनाना <ol><li> Shrinky dink एक अच्छा परिभाषा प्रिंटर का उपयोग कर पत्रक पर वांछित पैटर्न प्रिंट. </li><li> सेंकना 163 पर चादर shrinky dink डिग्री सेल्सियस के बारे में 10 मिनट, या जब तक के लिए पूरी तरह से सिकुड़ और एक नियमित...

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	<li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells.">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, 862-869 (1995).</li><li>Doetschman, T. C., Eistetter, H., Katz, M., Schmidt, W., Kemler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vitro+development+of+blastocyst-derived+embryonic+stem+cell+lines:+Formation+of+visceral+yolk+sac,+blood+islands+and+myocardium.">The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: Formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 87, 27-45 (1985).</li><li>Park, J., Cho, C. H., Parashurama, N., Li, Y., Berthiaume, F., Toner, M., Tilles, A. W., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabrication-based+modulation+of+embryonic+stem+cell+differentiation.">Microfabrication-based modulation of embryonic stem cell differentiation.</a> Lab Chip. 7, 1018-1028 (2007).</li><li>Koike, M., Sakaki, S., Amano, Y., Kurosawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+embryoid+bodies+of+mouse+embryonic+stem+cells+formed+under+various+culture+conditions+and+estimation+of+differentiation+status+of+such+bodies.">Characterization of embryoid bodies of mouse embryonic stem cells formed under various culture conditions and estimation of differentiation status of such bodies.</a> J Biosci Bioeng. 104, 294-299 (2007).</li><li>Hwang, N. S., Varghese, S., Elisseeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+differentiation+of+stem+cells.">Controlled differentiation of stem cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60, 199-204 (2008).</li><li>Adelman, C. A., Chattopadhyay, S., Bieker, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMP/BMPR/Smad+pathway+directs+expression+of+the+erythroid-specific+EKLF+and+GATA1+transcription+factors+during+embryoid+body+differentiation+in+serum-free+media.">The BMP/BMPR/Smad pathway directs expression of the erythroid-specific EKLF and GATA1 transcription factors during embryoid body differentiation in serum-free media.</a> Development. 129, 539-549 (2002).</li><li>Tanaka, N., Takeuchi, T., Neri, O. V., Sills, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-assisted+blastocyst+dissection+and+subsequent+cultivation+of+embryonic+stem+cells+in+a+serum/cell+free+culture+system:+applications+and+preliminary+results+in+a+murine+model.">Laser-assisted blastocyst dissection and subsequent cultivation of embryonic stem cells in a serum/cell free culture system: applications and preliminary results in a murine model.</a> J Transl Med. 4, (2006).</li></ol>

हम एक सरल, तेजी से और स्केलेबल संस्कृति microfabricated कुओं (Shrinky - Dinks से molded) में कक्षों की पूर्व निर्धारित संख्या लोड और उन्हें embryoid शरीर के विकास के लिए बनाए रखने के विधि विकसित किया है. अंत में, इन कोशिकाओं को आगे के विश्लेष?...

KO DMEM: 40.8ml; 81.6ml 15% KSR: 7.5ml, 15ml 1x पेन - Strep: 0.5 मिलीलीटर, 1ml 2mm एल glutamine,: (100ml 50ml कुल तैयार मीडिया के लिए:) mESC मीडिया (McCloskey प्रयोगशाला प्रोटोकॉल) के लिए: 0.5 मिलीलीटर, 1ml LIF:; 0.5 मिलीलीटर 1ml NEAA 100ul, बीएमपी 4-200ul (10ng/ml): 50ul, पतला 100ul BME:. 50ul; 100ul (पीबीएस और सिरिंज फिल्टर के 5ml बाँझ फ़िल्टर BME के ​​35ul जोड़ें बाँझ त्यागें 2 सप्ताह के बाद अंतिम समाधान में एकाग्रता 0.1 मिमी)

shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies

Embryoid निकायों (EB) भ्रूण स्टेम कोशिकाओं का समुच्चय हैं. इन समुच्चय बनाने का सबसे आम तरीका फांसी ड्रॉप विधि, अच्छी तरह प्लेटों में कक्षों की एक मनमाना संख्या pipetting के एक श्रमसाध्य दृष्टिकोण है. एक दूसरे के करीब निकटता में मजबूर स्टेम कोशिकाओं के बीच बातचीत ईबीएस की पीढ़ी को बढ़ावा देता है. क्योंकि कुओं की प्रत्येक में मीडिया के लिए मैन्युअल रूप से हर दिन विमर्श किया जा, इस दृष्टिकोण मैन्युअल गहन है. इसके अलावा, क्योंकि सेल सेल, सेल घुलनशील कारक बातचीत, पीएच, और ऑक्सीजन की उपलब्धता सहित पर्यावरण मापदंडों EB आकार का कार्य किया जा सकता है, सेल पारंपरिक फांसी बूंदों से प्राप्त आबादी नाटकीय रूप से भी भिन्न जब समान शर्तों के तहत संवर्धित कर सकते हैं. वास्तव में हाल के अध्ययनों से पता चला है कि कुल कोशिकाओं के गठन की प्रारंभिक संख्या स्टेम सेल भेदभाव पर महत्वपूर्ण प्रभाव हो सकता है. हम एक सरल, तेजी से और स्केलेबल संस्कृति microfabricated कुओं में कक्षों की पूर्व निर्धारित संख्या लोड और उन्हें embryoid शरीर के विकास के लिए बनाए रखने के विधि विकसित किया है. अंत में, इन कोशिकाओं को आगे के विश्लेषण और प्रयोग के लिए आसानी से सुलभ हैं. यह विधि किसी भी प्रयोगशाला करने के लिए उत्तरदायी है और कोई समर्पित उपकरणों की आवश्यकता है. हम embryoid शरीर एक लाल फ्लोरोसेंट माउस सेल लाइन (129S6B6 F1) का उपयोग कर बनाने के द्वारा इस विधि का प्रदर्शन.

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Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies

हम एक सरल और तेजी से विधि microfabricated कुओं में कक्षों की पूर्व निर्धारित संख्या लोड और उन्हें embryoid शरीर के विकास के लिए बनाए रखने दिखा.

गिरता हैंगिंग Shrinky dink: एक सरल फॉर्म और संस्कृति embryoid निकायों

Embryoid bodies (EB) are aggregates of embryonic stem cells. The most common way of creating these aggregates is the hanging drop method, a laborious ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

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प्रारंभिक चिकी भ्रूण पूर्व vivo (नई संस्कृति) की संस्कृति के लिए विधि

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Analysis of Pluripotent Stem Cells by using Cryosections of Embryoid Bodies

Pluripotent स्टेम सेल की embryoid निकायों के Cryosections का उपयोग करके विश्लेषण

Embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of blastocyst-stage early mammalian embryos 1. A crucial stage in the ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

वृषण सेल निलंबन की तैयारी के लिए सरल और कारगर तकनीक

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प्रतिदीप्ति डीएनए के लिए सरल तरीका<em&gt; बगल में</em&gt; कुचल गुणसूत्रों को संकरण

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

न्यूक्लिक एसिड की छानने का अलगाव: एक सरल और तेजी डीएनए निष्कर्षण विधि

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain (RTA) Trafficking in Yeast

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एक साधारण प्रतिदीप्ति-रिपोर्टर परख सेलुलर घटकों की पहचान करने के लिए Ricin विष के लिए आवश्यक एक श्रृंखला (आरटीए) खमीर में तस्करी

Bacterial and plant A/B toxins exploit the natural trafficking pathways in eukaryotic cells to reach their intracellular target(s) in the cytosol and to ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

चूहे से अग्नाशयी आइलेट अलगाव के लिए एक सरल उच्च दक्षता प्रोटोकॉल

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

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सोयाबीन Protoplasts और क्षणिक जीन अभिव्यक्ति के लिए आवेदन के अलगाव के लिए एक सरल तरीका विश्लेषण

Soybean (Glycine max (L.) Merr.) is an important crop species and has become a legume model for the studies of genetic and biochemical pathways. ...

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

कोशिकाओं के बीच Paracrine सिगनल का अध्ययन करने के लिए एक समीपस्थ संस्कृति पद्धति

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

Simple Homemade Tools to Handle Fruit FliesÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬ÂDrosophila melanogaster

फल मक्खी को संभालने के लिए सरल घर का बना उपकरण ]Drosophila मेलेनोगैस्टर

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...