Name: shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies
Uploaded: 2008-03-05T22:18:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies at JoVE.com

我々はこの作業の支援のためCIRMに感謝します。細胞株は、寛大にマウントサイナイ病院、トロント、オンタリオ州で博士アンドラーシュNagy氏から寄贈されました。

1。 Shrinky -ディンク金型を作る<ol><li>良い定義のプリンターを使用してshrinky -ディンクのシート上に所望のパターンを印刷します。 </li><li> 163で焼くshrinky -ディンクシート℃で約10分間、または完全に縮小し、定期的な形状を取得した時まで。 </li><li> shrinky -ディンクの金型冷却された後、イソプロパノール浴に浸し、それは完全な表面はほとんどカバーされるまで。 </li><li>慎重に、金型の上...

<ol>
	<li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells.">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, 862-869 (1995).</li><li>Doetschman, T. C., Eistetter, H., Katz, M., Schmidt, W., Kemler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vitro+development+of+blastocyst-derived+embryonic+stem+cell+lines:+Formation+of+visceral+yolk+sac,+blood+islands+and+myocardium.">The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: Formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 87, 27-45 (1985).</li><li>Park, J., Cho, C. H., Parashurama, N., Li, Y., Berthiaume, F., Toner, M., Tilles, A. W., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabrication-based+modulation+of+embryonic+stem+cell+differentiation.">Microfabrication-based modulation of embryonic stem cell differentiation.</a> Lab Chip. 7, 1018-1028 (2007).</li><li>Koike, M., Sakaki, S., Amano, Y., Kurosawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+embryoid+bodies+of+mouse+embryonic+stem+cells+formed+under+various+culture+conditions+and+estimation+of+differentiation+status+of+such+bodies.">Characterization of embryoid bodies of mouse embryonic stem cells formed under various culture conditions and estimation of differentiation status of such bodies.</a> J Biosci Bioeng. 104, 294-299 (2007).</li><li>Hwang, N. S., Varghese, S., Elisseeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+differentiation+of+stem+cells.">Controlled differentiation of stem cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60, 199-204 (2008).</li><li>Adelman, C. A., Chattopadhyay, S., Bieker, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMP/BMPR/Smad+pathway+directs+expression+of+the+erythroid-specific+EKLF+and+GATA1+transcription+factors+during+embryoid+body+differentiation+in+serum-free+media.">The BMP/BMPR/Smad pathway directs expression of the erythroid-specific EKLF and GATA1 transcription factors during embryoid body differentiation in serum-free media.</a> Development. 129, 539-549 (2002).</li><li>Tanaka, N., Takeuchi, T., Neri, O. V., Sills, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-assisted+blastocyst+dissection+and+subsequent+cultivation+of+embryonic+stem+cells+in+a+serum/cell+free+culture+system:+applications+and+preliminary+results+in+a+murine+model.">Laser-assisted blastocyst dissection and subsequent cultivation of embryonic stem cells in a serum/cell free culture system: applications and preliminary results in a murine model.</a> J Transl Med. 4, (2006).</li></ol>

Weは、微細加工井戸（Shrinky - DINKSから成形された）へのセルの定義済みの数値をロードし、胚様体の開発のためにそれらを維持するために、シンプル、迅速、かつスケーラブルな培養法を開発した。最後に、これらの細胞は、さらに分析と実験のために簡単にアクセス可能です。このメソッドは、どの研究室に適していると我々はフォトリソグラフィの必要性を未然に防ぐため、専用機器を必要としません?...

KO DMEM：40.8ミリリットル、81.6ミリリットルの15％KSR：7.5ミリリットル、15ミリリットル× 1ペン、連鎖球菌：0.5ミリリットル、1ミリリットル2mMのL -グルタミン：;：（100ミリリットル50ミリリットル調製した全メディアのための：）MESCメディア（マクロスキーラボプロトコル）のための0.5ミリリットル、1ミリリットルNEAA：0.5ミリリットル、1ミリリットルLIF：100ul、200ul BMP - 4（10ng/ml）：50UL、100ulの希薄化後BME：。50UL、100ul（PBSとシリンジフィルター5mlのために滅菌濾過BMEの35ulを追加する滅菌破棄2週間後。溶液中の最終濃度は0.1 mMのです）

shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies

胚様体（EB）は、胚性幹細胞の集合体です。これらの集計を作成する最も一般的な方法は、ハンギングドロップ法、ウェルプレートに細胞を任意の数のピペッティングの面倒なアプローチです。互いの接近に強制的に幹細胞間の相互作用は、EBSの生成を促進。各ウェル内のメディアを手動で毎日交換する必要があるため、このアプローチは、手作業の多いです。 同一の条件下で培養するとさらに、細胞 - 細胞、細胞可溶性因子の相互作用は、pH、及び酸素の可用性を含む、環境パラメータは、EBの大きさの関数である可能性があるため、従来の吊り下げ降下から得られた細胞集団は、さらに劇的に異なることがあります。最近の研究では、実際に集計を形成する細胞の初期数は、幹細胞の分化に大きな影響を持つことができることが示されている。 Weは、微細加工のウェルに細胞の定義済みの数値をロードし、胚様体の開発のためのそれらを維持するために、シンプル、迅速、かつスケーラブルな培養法を開発した。最後に、これらの細胞は、さらに分析と実験のために簡単にアクセス可能です。このメソッドは、どの研究室に適していると、専用機器を必要としません。私たちは、赤色蛍光マウスの細胞株（129S6B6 - F1）を使用して胚様体を作成して、このメソッドを示しています。

Watch this Scientific Journal Video about Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies at JoVE.com

Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies

我々は微細加工のウェルに細胞の事前定義された数値をロードし、胚様体の開発のためにそれらを維持するために簡単かつ迅速な方法を示しています。

滴をハンギングShrinky -ディンク：胚の体を形成し、文化に簡単

Embryoid bodies (EB) are aggregates of embryonic stem cells. The most common way of creating these aggregates is the hanging drop method, a laborious ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

初期のニワトリ胚をex vivo（新文化）の文化のための方法

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Analysis of Pluripotent Stem Cells by using Cryosections of Embryoid Bodies

胚様体の凍結切片を使用して、多能性幹細胞の解析

Embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of blastocyst-stage early mammalian embryos 1. A crucial stage in the ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

精巣細胞懸濁液の調製のためのシンプルで効率的な手法

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

蛍光DNAための簡単​​な方法<em&gt;その場で</em&gt;ぺしゃんこ染色体へのハイブリダイゼーション

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

核酸の濾過単離：簡易迅速DNA抽出方法

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain (RTA) Trafficking in Yeast

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain RTA Trafficking in Yeast

リシン毒素チェーン (RTA) 酵母の人身売買に必要な細胞成分を識別するために簡単な蛍光レポーターの試金

Bacterial and plant A/B toxins exploit the natural trafficking pathways in eukaryotic cells to reach their intracellular target(s) in the cytosol and to ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

マウスからの膵島分離のための簡単な高効率プロトコル

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

A Simple Method for Isolation of Soybean Protoplasts and Application to Transient Gene Expression Analyses

簡便な分離大豆プロトプ ラストと一過的遺伝子発現解析への応用

Soybean (Glycine max (L.) Merr.) is an important crop species and has become a legume model for the studies of genetic and biochemical pathways. ...

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

パラ分泌細胞間シグナル研究に近位の培養法

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

Simple Homemade Tools to Handle Fruit FliesÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬ÂDrosophila melanogaster

フルーツハエを扱うシンプルな自家製ツール -ショウジョウバエメラノガスター

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...