Name: shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies
Uploaded: 2008-03-05T22:18:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies at JoVE.com

우리는이 작품의 지원 CIRM 감사하고 싶습니다. 셀 라인은 넉넉한 마운트시나이 병원, 토론토, 온타리오에서 박사 Andras 나지에서 기증되었다.

1. Shrinky - 딩크 몰드 만들기 <ol><li> 좋은 정의 프린터를 사용 shrinky - 딩크 시트에 원하는 패턴을 인쇄합니다. </li><li> 163에서 베이크 shrinky - 딩크 시트 ° C 약 10 분, 또는 때까지 대해 전적으로 축소하고 정기적인 모양을 인수하는 데. </li><li> shrinky - 딩크의 금형이 냉각되면, 이소프로판올 욕조에서 잠수함 그것은 전체 표면은 거의 덮여 때까지. </li><li> 신중하게, 금형을 통해 몇 가지 아세톤을 스?...

<ol>
	<li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells.">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, 862-869 (1995).</li><li>Doetschman, T. C., Eistetter, H., Katz, M., Schmidt, W., Kemler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vitro+development+of+blastocyst-derived+embryonic+stem+cell+lines:+Formation+of+visceral+yolk+sac,+blood+islands+and+myocardium.">The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: Formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 87, 27-45 (1985).</li><li>Park, J., Cho, C. H., Parashurama, N., Li, Y., Berthiaume, F., Toner, M., Tilles, A. W., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabrication-based+modulation+of+embryonic+stem+cell+differentiation.">Microfabrication-based modulation of embryonic stem cell differentiation.</a> Lab Chip. 7, 1018-1028 (2007).</li><li>Koike, M., Sakaki, S., Amano, Y., Kurosawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+embryoid+bodies+of+mouse+embryonic+stem+cells+formed+under+various+culture+conditions+and+estimation+of+differentiation+status+of+such+bodies.">Characterization of embryoid bodies of mouse embryonic stem cells formed under various culture conditions and estimation of differentiation status of such bodies.</a> J Biosci Bioeng. 104, 294-299 (2007).</li><li>Hwang, N. S., Varghese, S., Elisseeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+differentiation+of+stem+cells.">Controlled differentiation of stem cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60, 199-204 (2008).</li><li>Adelman, C. A., Chattopadhyay, S., Bieker, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMP/BMPR/Smad+pathway+directs+expression+of+the+erythroid-specific+EKLF+and+GATA1+transcription+factors+during+embryoid+body+differentiation+in+serum-free+media.">The BMP/BMPR/Smad pathway directs expression of the erythroid-specific EKLF and GATA1 transcription factors during embryoid body differentiation in serum-free media.</a> Development. 129, 539-549 (2002).</li><li>Tanaka, N., Takeuchi, T., Neri, O. V., Sills, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-assisted+blastocyst+dissection+and+subsequent+cultivation+of+embryonic+stem+cells+in+a+serum/cell+free+culture+system:+applications+and+preliminary+results+in+a+murine+model.">Laser-assisted blastocyst dissection and subsequent cultivation of embryonic stem cells in a serum/cell free culture system: applications and preliminary results in a murine model.</a> J Transl Med. 4, (2006).</li></ol>

우리는 microfabricated 웰스 (Shrinky - Dinks에서 성형)에 세포의 미리 정의된 숫자를로드하고 embryoid 몸 개발을 위해 그들을 유지하기 위해, 간단한 신속하고 확장 가능한 문화 방식을 개발했습니다. 마지막으로, 이러한 전지는 더 이상 분석 및 실험을 위해 쉽게 액세스할 수 있습니다. 이 방법은 실험실 의무이며, 우리가 석판술의 필요성을 사전에 제거하다 때문에 아무 전용 장비를 필요하지 않습니다. 우리는 embryoid ?...

KO DMEM : 40.8ml, 81.6ml 15 % KSR : 7.5ml, 15ml 1X 펜 - Strep : 0.5 ML, 1ml 2mM L - 글루타민; (100ml 50ml 대비 총 미디어 :) mESC 미디어 (맥클로스키 실험실 프로토콜)에 대한 0.5 ML, 1ml NEAA : 0.5 ML, 1ml 평범한 : 100ul, 200ul BMP - 4 (10ng/ml) : 50ul, 100ul 희석 BME :. 50ul, 100ul (PBS와 주사기 필터 5ml에 살균 필터 BME의 35ul 추가 소독 삭제 이주 후에. 솔루션에 최종 농도는 0.1 MM입니다)

shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies

Embryoid 단체 (EB)는 배아 줄기 세포 집합체입니다. 이러한 집합체를 만드는 가장 일반적인 방법은 매달려 드롭 방식, 잘 접시에 세포의 임의의 숫자를 pipetting의 힘드는 접근이다. 서로의 가까이에 강제 줄기 세포 사이의 상호 작용은 EBS의 생성을 촉진. 우물의 각 미디어가 수동으로 매일 교환해야했기 때문에, 이러한 방식은 수동으로 집약적이다. 동일한 조건에서 양식 때 또한, 셀 셀, 셀 용해 계수 상호 작용, 산도, 그리고 산소의 가용성을 포함한 환경 매개 변수 EB 크기의 기능을 수 있기 때문에, 전통적인 매달려 방울에서 얻은 세포 집단도 크게 다를 수 있습니다. 최근 연구는 실제로 집계를 형성하는 세포의 초기 숫자가 줄기 세포 분화에 중요한 영향을 미칠 수있는 것으로 나타났습니다. 우리는 microfabricated 우물로 세포의 미리 정의된 숫자를로드하고 embryoid 몸 개발을 위해 그들을 유지하기 위해, 간단한 신속하고 확장 가능한 문화 방식을 개발했습니다. 마지막으로, 이러한 전지는 더 이상 분석 및 실험을 위해 쉽게 액세스할 수 있습니다. 이 방법은 실험실 의무이며 전용 장비를 필요하지 않습니다. 우리는 붉은 형광 마우스 세포 라인을 (129S6B6 - F1)를 사용 embryoid 시체를 작성하여이 방법을 보여줍니다.

Watch this Scientific Journal Video about Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies at JoVE.com

Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies

우리는 microfabricated 우물로 세포의 미리 정의된 숫자를로드하고 embryoid 몸 개발을 위해 그들을 유지하기 위해 간단하고 빠른 방법을 보여줍니다.

방울을 공중 Shrinky - 딩크 : Embryoid 기관 폼 문화하는 간단한 방법

Embryoid bodies (EB) are aggregates of embryonic stem cells. The most common way of creating these aggregates is the hanging drop method, a laborious ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

연구

생물학

Analysis of Pluripotent Stem Cells by using Cryosections of Embryoid Bodies

Embryoid 기관의 Cryosections를 사용하여 Pluripotent 줄기 세포 분석

Embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of blastocyst-stage early mammalian embryos 1. A crucial stage in the ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

고환 세포 현탁액의 준비를 위해 간단하고 효율적인 기술

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

형광 DNA를위한 간단한 방법<em&gt; 현장에서</em&gt; 숙청 염색체에 하이브리드

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

핵산의 여과 분리 : 간단하고 신속한 DNA 추출 방법

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain (RTA) Trafficking in Yeast

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain RTA Trafficking in Yeast

세포질 구성 요소를 식별 하는 간단한 형광 기반 기자 분석 결과 리 독 소에 필요한 체인 (RTA) 효 모에 인신 매매

Bacterial and plant A/B toxins exploit the natural trafficking pathways in eukaryotic cells to reach their intracellular target(s) in the cytosol and to ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

마우스에서 췌장 췌도 격리를 위한 간단한 고효율 프로토콜

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

A Simple Method for Isolation of Soybean Protoplasts and Application to Transient Gene Expression Analyses

콩 Protoplasts 및 변이 유전자 표정 분석 응용 프로그램의 격리에 대 한 간단한 방법

Soybean (Glycine max (L.) Merr.) is an important crop species and has become a legume model for the studies of genetic and biochemical pathways. ...

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

Paracrine 신호 세포 사이 공부 하는 인접 문화 방법

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

Simple Homemade Tools to Handle Fruit FliesÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬ÂDrosophila melanogaster

과일 파리를 처리하는 간단한 수제 도구 -초파리 멜라노가스터

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...