Name: shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies
Uploaded: 2008-03-05T22:18:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить CIRM за поддержку этой работы. Клеточная линия была щедро пожертвовал от доктора Андраш Надь в больнице Маунт Синай в Торонто, Онтарио.

1. Создание Shrinky-Mold Динка <ol><li> Печать желаемый рисунок на shrinky-Динка листа с помощью хорошего принтера определение. </li><li> Выпекать shrinky-Динка листа при 163 ° С около 10 минут, или пока он полностью не уменьшились, а получив правильной формы. </li><li> После shrinky-Динка плесень остынет, погрузите ег?...

<ol>
	<li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells.">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, 862-869 (1995).</li><li>Doetschman, T. C., Eistetter, H., Katz, M., Schmidt, W., Kemler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vitro+development+of+blastocyst-derived+embryonic+stem+cell+lines:+Formation+of+visceral+yolk+sac,+blood+islands+and+myocardium.">The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: Formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 87, 27-45 (1985).</li><li>Park, J., Cho, C. H., Parashurama, N., Li, Y., Berthiaume, F., Toner, M., Tilles, A. W., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabrication-based+modulation+of+embryonic+stem+cell+differentiation.">Microfabrication-based modulation of embryonic stem cell differentiation.</a> Lab Chip. 7, 1018-1028 (2007).</li><li>Koike, M., Sakaki, S., Amano, Y., Kurosawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+embryoid+bodies+of+mouse+embryonic+stem+cells+formed+under+various+culture+conditions+and+estimation+of+differentiation+status+of+such+bodies.">Characterization of embryoid bodies of mouse embryonic stem cells formed under various culture conditions and estimation of differentiation status of such bodies.</a> J Biosci Bioeng. 104, 294-299 (2007).</li><li>Hwang, N. S., Varghese, S., Elisseeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+differentiation+of+stem+cells.">Controlled differentiation of stem cells.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60, 199-204 (2008).</li><li>Adelman, C. A., Chattopadhyay, S., Bieker, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMP/BMPR/Smad+pathway+directs+expression+of+the+erythroid-specific+EKLF+and+GATA1+transcription+factors+during+embryoid+body+differentiation+in+serum-free+media.">The BMP/BMPR/Smad pathway directs expression of the erythroid-specific EKLF and GATA1 transcription factors during embryoid body differentiation in serum-free media.</a> Development. 129, 539-549 (2002).</li><li>Tanaka, N., Takeuchi, T., Neri, O. V., Sills, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-assisted+blastocyst+dissection+and+subsequent+cultivation+of+embryonic+stem+cells+in+a+serum/cell+free+culture+system:+applications+and+preliminary+results+in+a+murine+model.">Laser-assisted blastocyst dissection and subsequent cultivation of embryonic stem cells in a serum/cell free culture system: applications and preliminary results in a murine model.</a> J Transl Med. 4, (2006).</li></ol>

Мы разработали простой, быстрой и масштабируемой культуры метод для загрузки предварительно определенные числа клеток в microfabricated скважин (отлит из Shrinky-Dinks) и сохранить их для эмбриоидных развития организма. Наконец, эти клетки были легко доступны для дальнейшего анализа и экспериментов. Этот мет?...

Для мЭСК СМИ (Макклоски лаборатории протокола): (для общего СМИ подготовлено: 50 мл, 100 мл) KO DMEM: 40.8ml; 81.6ml 15% KSR: 7.5ml; 15мл 1x Пенн-Strep: 0,5 мл, 1 мл 2 мМ L-глутамина: 0,5 мл, 1 мл NEAA: 0,5 мл, 1 мл LIF: 100 мкл; 200ul BMP-4 (10ng/ml): 50ul; 100 мкл Разводненная BME. 50ul; 100 мкл (Добавить 35ul стерильных фильтруется BME в 5 мл PBS и шприцев фильтр стерилизуют Отменить через 2 недели. Конечная концентрация в растворе 0,1 ммоль)

shrinky-dink hanging drops: a simple way to form and culture embryoid bodies

Эмбриоидных органов (EB) являются агрегатами эмбриональных стволовых клеток. Наиболее распространенным способом создания этих агрегатов методом висячей капли, трудоемкий подход пипетирования произвольное количество клеток в хорошо пластин. Взаимодействий между стволовыми клетками вынуждены непосредственной близости друг от друга способствует поколения EBS. Потому что средства массовой информации в каждой из скважин вручную обменялись каждый день, этот подход вручную интенсивно. Более того, поскольку параметры окружающей среды, включая сотовые-ячейки и растворимые взаимодействия фактора, рН и наличие кислорода могут быть функциями EB размер, клеточных популяций получены от традиционных висят капли могут резко меняться даже при культивировании в одинаковых условиях. Недавние исследования показали, что действительно начальное количество клеток, образующих совокупности может оказать существенное воздействие на стволовые дифференциации клеток. Мы разработали простой, быстрой и масштабируемой культуры метод для загрузки предварительно определенные числа клеток в microfabricated скважин и сохранить их для эмбриоидных развития организма. Наконец, эти клетки были легко доступны для дальнейшего анализа и экспериментов. Этот метод поддается любой лаборатории и не требует специализированного оборудования. Мы показываем этот метод путем создания эмбриоидных органов использованием красного флуоресцентного клеточной линии мыши (129S6B6-F1).

Watch this Scientific Journal Video about Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies at JoVE.com

Shrinky-Dink Hanging Drops: A Simple Way to Form and Culture Embryoid Bodies

Мы показываем, простой и быстрый метод для загрузки предварительно определенные числа клеток в microfabricated скважин и поддерживать их на эмбриоидных развития организма.

Shrinky-Динка Висячие Капли: Простой способ Форма и культуры эмбриоидные тела

Embryoid bodies (EB) are aggregates of embryonic stem cells. The most common way of creating these aggregates is the hanging drop method, a laborious ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Метод культуры раннего куриных эмбрионов исключая виво (Новая Культура)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Analysis of Pluripotent Stem Cells by using Cryosections of Embryoid Bodies

Анализ плюрипотентных стволовых клеток с помощью Cryosections из эмбриоидные тела

Embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of blastocyst-stage early mammalian embryos 1. A crucial stage in the ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Простой и эффективный способ для подготовки яичек клеточные суспензии

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Простой метод ДНК флуоресценции<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация, чтобы раздавил хромосом

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

Фильтрация Выделение нуклеиновых кислот: Простой и быстрый ДНК Метод экстракции

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain (RTA) Trafficking in Yeast

A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain RTA Trafficking in Yeast

Простой на основе флуоресценции репортер проба для выявления клеточных компонентов необходимых для рицин токсинному цепь (RTA) оборота дрожжей

Bacterial and plant A/B toxins exploit the natural trafficking pathways in eukaryotic cells to reach their intracellular target(s) in the cytosol and to ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Простой протокол высокой эффективности для изоляции поджелудочной железы от мышей

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

A Simple Method for Isolation of Soybean Protoplasts and Application to Transient Gene Expression Analyses

Простой метод для изоляции протопласта сои и приложения для анализа переходных ген выражение

Soybean (Glycine max (L.) Merr.) is an important crop species and has become a legume model for the studies of genetic and biochemical pathways. ...

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

Проксимальный культуры метод для изучения паракринными сигнализации между ячейками

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

Simple Homemade Tools to Handle Fruit FliesÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬ÂDrosophila melanogaster

Простые домашние инструменты для обработки фруктовых мух-Drosophila меланогастер

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...