Name: localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech
Uploaded: 2008-04-17T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

نود أن نشكر الدكتور مايكل بيكر لمساعدته في توليد بنيات لتدق في الجينات وتقديم الأفلام مرور الزمن من التوقعات المتزايدة الحسية. نود أيضا أن نشكر Vandelinder فرجينيا لتقديم المساعدة التقنية مع التجارب بندقية تعمل بالهواء المضغوط.

يمكن أن تكون مغلفة مع الكواشف الجسيمات مختلفة ، مثل جزيئات الرنا المزدوج الجديلة ، البلازميدات الحمض النووي أو الأصباغ. ويتم اختيار نوع وقطر من الجسيمات وفقا للكاشف وعمق الخلايا المستهدفة في النسيج : أكبر اختراق جسيمات أخرى ، ولكن قد يسبب بعض الأضرار التي لحقت الأنس?...

<ol>
	<li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+of+the+receptor+tyrosine+phosphatase+HmLAR2+in+a+single+cell+of+an+intact+leech+embryo+leads+to+growth-cone+collapse.">RNAi of the receptor tyrosine phosphatase HmLAR2 in a single cell of an intact leech embryo leads to growth-cone collapse.</a> Current Biology. 10, 1071-1074 (2000).</li><li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Hirudo+medicinalis+DNA+Promoters+for+Targeted+Gene+Expression.">Characterization of Hirudo medicinalis DNA Promoters for Targeted Gene Expression.</a> Journal of Neuroscience Methods. 156, 145-153 (2006).</li><li>Gan, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+expression+of+a+leech+netrin+suggests+roles+in+the+formation+of+longitudinal+nerve+tracts+and+in+regional+innervation+of+peripheral+targets.">Cellular expression of a leech netrin suggests roles in the formation of longitudinal nerve tracts and in regional innervation of peripheral targets.</a> Journal of Neurobiology. 40, 103-115 (1999).</li><li>Juven-Gershon, T., Cheng, S., Kadonaga, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+super+core+promoter+that+enhances+gene+expression.">Rational design of a super core promoter that enhances gene expression.</a> Nature Methods. 3, 917-922 (2006).</li><li>Rinberg, D., Simonnet, C., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumatic+capillary+gun+for+ballistic+delivery+of+microparticles.">Pneumatic capillary gun for ballistic delivery of microparticles.</a> Applied Physics Letters. 87, 014103 (2005).</li><li>Shefi, O., Simonnet, C., Baker, M. W., Glass, J. R., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtargeted+gene+silencing+and+ectopic+expression+in+live+embryos+using+biolistic+delivery+with+a+pneumatic+capillary+gun.">Microtargeted gene silencing and ectopic expression in live embryos using biolistic delivery with a pneumatic capillary gun.</a> Journal of Neuroscience. 26, 6119-6123 (2006).</li></ol>

في هذه المظاهرة ، كنا البندقية الهوائية الشعرية لتقديم جزيئات الذهب في الخلايا المترجمة في حجم صغير من الجنين علقة لضرب العيش في وتدق إلى أسفل الجينات. المنطقة المستهدفة كانت عموما يبلغ قطرها 150 ~ تم العثور على جزيئات ميكرومتر و~ 15 ميكرون حول عمق الاختراق يعني ، الذي قابل للتعديل...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gold particles</td>
<td>Other</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>S1600ri</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>binding buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>silicone rubber </td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech

في هذا الفيديو ، وتبين لنا من استخدام بندقية تعمل بالهواء المضغوط الشعرية لتسليم biolistic دقيقة من الكواشف في الأنسجة الحية. نستخدم الإجراء لأنماط التشويش على التعبير الجيني في قطاعات مختارة من أجنة علقة ، وترك دون علاج وشرائح الضوابط الداخلية. ويمكن استخدام البندقية الهوائية للوصول إلى طبقات الشعرية الداخلية من الخلايا في مراحل مبكرة من التنمية دون فتح العينة. كوسيلة لإدخال المواد المترجمة في الأنسجة الحية ، وتسليم biolistic بالبندقية ديها العديد من المزايا : فهي سريعة ، اتصل خالية وغير مدمرة. بالإضافة ، يمكن استخدام بندقية واحدة للتسليم الشعرية المستقلة من المواد المختلفة. يمكن تسليم المنطقة أبعادا الوحشي 50-150 ميكرومتر ~ ويمتد على مدى 15 ميكرومتر ~ حول عمق الاختراق يعني ، وهو قابل للتعديل بين 0 و 50 ميكرومتر. هذا التسليم لديها ميزة كونها قادرة على استهداف عدد محدود من الخلايا في الموقع المحدد وسيطة بين خلية واحدة هدم من قبل microinjection ضربة قاضية والنظامية من خلال الحقن خارج الخلية أو عن طريق الأساليب الوراثية. لهدمت أو طرق في التعبير عن جزيء محوار Netrin التوجيه ، وهو ما يعبر عنه بشكل طبيعي من جانب بعض الخلايا العصبية المركزية ، وجدار الجسم في بطني ، ولكن ليس في المجال الظهرية ، التي نقدمها من جزيئات الرنا المزدوج الجديلة أو البلازميد الحمض النووي في الجسم والجدار وسط العقد. هذا الإجراء يشمل الخطوات التالية : (ط) إعداد برنامج الإعداد التجريبية لفحص محددة (ضبط ضغط متسارعة) ، (ب) طلاء الجزيئات مع جزيئات الحمض النووي أو الرنا المزدوج الجديلة ، (الثالث) تحميل الجزيئات المغلفة في البندقية ، ما يصل الى اثنين في واحد الكواشف مقايسة ، (د) اعداد الحيوانات لإيصال الجسيمات ، (V) تسليم الجزيئات المغلفة في الأنسجة المستهدفة (جدار الجسم أو العقد) ، و (السادس) معالجة الأجنة (immunostaining ، المناعية والعصبية التوسيم) لتصور النتائج ، عادة من 2 إلى 3 أيام بعد الولادة. تسبب عندما كانت مغلفة الجسيمات مع الرنا المزدوج الجديلة netrin ، مرئية بوضوح تدق إلى أسفل التعبير netrin التي وقعت فقط في الخلايا التي تحتوي على جزيئات (عادة ، 1-2 الجسيمات في الخلية). جسيمات المغلفة مع مضان ترميز البلازميد يسببها EGFP في الخلايا العصبية عندما توقفت في النواة.

Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

في هذا الفيديو ، وتبين لنا لإجراء التسليم an biolistic دقيقة من الكواشف في الأنسجة الحية بمسدس الجينات مصغرة الرواية. نحن هدمت التعبير عن جزيء محوار Netrin التوجيه في الأجنة علقة من خلال تقديم جزيئات الرنا المزدوج الجديلة في الجدار البطني الجسم والعقد من شرائح واحد.

رني المترجمة خارج الرحم والتعبير الجيني في المستنزف الطبية

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Spinal Cord Electrophysiology

الحبل الشوكي الكهربية

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

باستخدام الجينات Electroporation MXcell بولسير النظام لTransfect الخلايا الأولية ذات الكفاءة العالية

Robotics and Dynamic Image Analysis for Studies of Gene Expression in Plant Tissues

الروبوتات والتحليل الديناميكي صورة للدراسات في التعبير الجيني في أنسجة النبات

Gene expression in plant tissues is typically studied by destructive extraction of compounds from plant tissues for in vitro analyses. The methods ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

باستخدام خلية مكافحة الآلي لتبسيط دراسات التعبير الجيني : ضربة قاضية سيرنا من IL - 4 التعبير الجيني في الخلايا التابعة Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

البارافين ، جزءا لا يتجزأ من والمجمدة أقسام ذبابة الفاكهة</emالعضلات الكبار>

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

وساطة رني ضربة قاضية بواسطة الجينات وTransgenesis Microinjection في نيماتودا Necromenic Pristionchus pacificus</em

Although it is increasingly affordable for emerging model organisms to obtain completely sequenced genomes, further in-depth gene function and expression ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

تحليل الحمض النووي الريبي العالمي التجميعي على مستوى خلية واحدة نقص الأكسجة التالي

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...